一种双酶偶联全细胞催化马来酸合成L-天冬氨酸的方法与流程

技术特征：

1.一种制备L-天冬氨酸的方法，其特征在于，以偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株或该重组菌株产生的酶为催化剂，以马来酸为底物，生成L-天冬氨酸。

2.根据权利要求1所述的一种制备L-天冬氨酸的方法，其特征在于，所述偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株，是以大肠杆菌为宿主，表达以pRSFDuet-1为表达载体构建的重组表达载体pRSFDuet-1-maiA-aspA。

3.根据权利要求1或2所述的一种制备L-天冬氨酸的方法，其特征在于，马来酸顺反异构酶来源于粘质沙雷氏菌，L-天冬氨酸裂解酶来源于大肠杆菌。

4.根据权利要求3所述的一种制备L-天冬氨酸的方法，其特征在于，所述大肠杆菌是敲除了基因组中fum A-fum C基因的E.coli BL21(DE3)ΔfumAC。

5.根据权利要求1或2所述的一种制备L-天冬氨酸的方法，其特征在于，编码所述马来酸顺反异构酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，或者编码第27位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子并且编码第171位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子，或者编码第27位的甘氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子并且编码第104位的赖氨酸的密码子突变为编码精氨酸的密码子；编码所述L-天冬氨酸裂解酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

6.根据权利要求1或2或5所述的一种制备L-天冬氨酸的方法，其特征在于，编码L-天冬氨酸裂解酶的基因的RBS序列替换为SEQ ID NO.23或SEQ ID NO.24或SEQ ID NO.25所示的序列。

7.根据权利要求1所述的一种制备L-天冬氨酸的方法，其特征在于，以pH 8.0的2M的马来酸溶液为底物，加入重组菌株菌体浓度OD₆₀₀为40的静息细胞悬液，静息细胞悬液与底物溶液的体积比为2：8。

8.一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株，其特征在于，以大肠杆菌为宿主，表达以pRSFDuet-1为表达载体构建的重组表达载体pRSFDuet-1-maiA-aspA。

9.根据权利要求8所述的一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株，其特征在于，所述大肠杆菌敲除了基因组中fum A-fum C基因的E.coli BL21(DE3)ΔfumAC。

10.根据权利要求8或9所述的一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L-天冬氨酸裂解酶的重组菌株，其特征在于，编码所述马来酸顺反异构酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，或者第27位的甘氨酸突变为丙氨酸并且第171位的甘氨酸突变为丙氨酸，或者第27位的甘氨酸突变为丙氨酸并且第104位的赖氨酸突变为精氨酸；编码L-天冬氨酸裂解酶的基因的RBS序列替换为SEQ ID NO.23或SEQ ID NO.24或SEQ ID NO.25所示的序列。