本发明涉及医药制备技术领域，具体涉及的是一种用作caspase-3激活剂的香豆素类衍生物，以及它在制备治疗和/或预防癌症和其它增生性疾病的药物中的应用。
背景技术：
肿瘤是一种严重威胁人类生命健康的疾病，近年来，肿瘤的发生率和死亡率呈逐年上升的趋势。细胞毒性药物能够杀死肿瘤细胞，但对癌细胞和正常细胞缺乏选择性，因此具有较强的毒副作用，寻找能够选择性地杀死癌细胞且对正常增殖细胞无影响的靶向性抗肿瘤药物已成为新型抗肿瘤药物研发的重要方向。
细胞凋亡是指一种由基因所调控的细胞内自主性、有序的死亡过程，一般认为，恶性转化的肿瘤细胞是因为失控生长、过度增殖引起的，从细胞凋亡的角度看则认为是肿瘤的凋亡机制受到抑制而不能正常进行细胞死亡清除的结果。肿瘤细胞中有一系列的癌基因和原癌基因被激活，并呈现过表达状态。这些基因的激活和肿瘤的发生发展之间有着极为密切的关系。许多种类的癌基因表达以后，阻断了肿瘤细胞的凋亡过程，使肿瘤细胞数目增加。因此，通过细胞凋亡角度和机制来设计对肿瘤的治疗方法就是重建肿瘤细胞的凋亡信号转递系统，即抑制肿瘤细胞生存基因的表达，激活死亡基因的表达。
caspase家族属于天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶，对于在多细胞生物体内的细胞凋亡过程起着关键作用。在人体内已经发现存在有14种caspase，只有一部分参与细胞的凋亡过程，其中caspase-3作为caspase家族中最重要的一员，处于细胞凋亡的共同路径上，是细胞凋亡的关键执行者之一。正常情况下caspase-3在胞质中以无活性的酶原形式(procaspase-3)存在，只有当外界凋亡信号使之激活为有活性的caspase-3时，才会引起细胞质、细胞核及细胞构架的关键蛋白酶失活，导致细胞凋亡。在肿瘤细胞中，caspase-3是受到抑制的，如果能够重新激活caspase-3，那么将会重启细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞增殖。
目前，研究已证实由于caspase-3受到抑制，导致procaspase-3在很多肿瘤细胞中呈现高度表达的状态，如：淋巴瘤；白血病；黑色素瘤；神经母细胞瘤；肝癌；肺癌；乳腺癌和结肠癌。更值得一提的是，procaspase-3属于细胞凋亡信号通路中的下游蛋白，如果癌症的发生是由于下游蛋白突变引发的，那么上游的凋亡信号将不能正确传送给下游蛋白，从而导致作用于中/上游凋亡信号的抗肿瘤药物将不能发挥抑制肿瘤细胞增长的作用。因此，设计合成直接激活caspase-3的小分子化合物，继而催化水解多种蛋白底物诱导肿瘤细胞凋亡将会是一条安全有效的寻找抗肿瘤药物的新方法。
pac-1是报道的第一个能直接作用于半胱天冬蛋白酶-3-酶原procaspase-3，活化其成为活性的caspase-3的小分子化合物。实验表明，pac-1通过直接活化procaspase-3成为caspase-3，进而诱导肿瘤细胞凋亡，继而催化水解多种蛋白底物，最终发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用；目前pac-1处于临床一期研究阶段，2016年被授予孤儿药。
1541系列通过对6200个化合物进行高通量筛选，得到了一系列结构新颖的香豆素衍生物，其中化合物1541，1541b，1541c和1541d对procaspase-3表现出突出的激活活性，化合物1541b活性最强，其ec50为1.3μm。研究表明，1541b通过自组装形成纤维分子进而激活procaspase-3成为caspase-3，进而诱导肿瘤细胞凋亡。
本发明人对香豆素类化合物进行了广泛研究，通过对多个结构位点进行修饰和改造，合成了一系列结构新颖的含芳基的香豆素类衍生物。通过测试其caspase-3激活活力，发现该类化合物具有显著的caspase-3激活作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种用作caspase-3激活剂的香豆素类衍生物，该类化合物具有显著的caspase-3激活作用。
本发明的目的还在于提供了上述香豆素类衍生物在制备治疗和/或预防癌症和其它增生性疾病的药物中的应用。
为了达成上述目的，本发明的解决方案是：
一种用作caspase-3激活剂的香豆素类衍生物，其结构通式如i所示，
其中，x为ch2、o、s、nh或者nhnhconh；n为1-6之间的整数；r1为h或为1～3个选自羟基，卤素，硝基，氨基，氰基，c1-c6的烷基，c1-c6的烯基，c1-c6的炔基，c1-c6的烷氧基，c1-c6的烷基硫基，被羟基、氨基或卤素取代的c1-c6的烷基或c1-c6的烷氧基或c1-c6的烷基硫基，被单个或两个c1-c6的烷基取代的氨基，c1-c6的烷基酰氨基，游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基，c1-c6的烷基亚磺酰基，c1-c6的磺酰基，c1-c6的烷基酰基，氨基甲酰基，被单个或两个c1-c6的烷基取代的氨基甲酰基，c1-c3的亚烷基二氧基的取代基；
r2和r3相同或不同，r2和r3分别独立地选自氢、c1-c10的烷基、c3-c7的环烷基、c2-c10的烯基或c2-c10的炔基；
或r2、r3和与r2、r3所连接的氮原子一起形成5～10元杂环基或5～10元杂芳基，且所述r2、r3的杂环基或杂芳基上含有1～3个相同或不同的取代基r4，r4为苄基、c1-c4的烷基、c1-c4的烷氧基、卤素、羟基、羧基或者酯基；
ar为c6-c10的芳基或者5～10元杂芳基，其中，所述ar的杂芳基中含有1～3个选自n、o和/或s的杂原子。
优选的，所述r2、r3的杂环基或杂芳基除了与r2和r3连接的氮原子外，含有1～4个选自n、o和s的杂原子，所述r2、r3的杂环基中含有1～2个的碳碳双键或1～2个的碳碳叁键，所述ar的杂芳基上含有1～3个相同或不同的取代基r5；r5为氢，羟基，卤素，硝基，氨基，氰基，c1-c6的烷基，c1-c6的烯基，c1-c6的炔基，c1-c6的烷氧基，c1-c6的烷硫基，被羟基、氨基或卤素取代的c1-c6的烷基或c1-c6的烷氧基，被单个或两个c1-c6烷基取代的氨基，c1-c6烷基酰氨基，游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基，c1-c6的烷基亚磺酰基，c1-c6的磺酰基，c1-c6的烷基酰基，氨基甲酰基，被单个或两个c1-c6的烷基取代的氨基甲酰基，c1-c3的亚烷基二氧基。
优选的，x为o、s、nh或者nhnhconh；n为1-4之间的整数；r1为h或为1～3个选自羟基，卤素，硝基，氨基，氰基，c1-c6的烷基，c1-c6的烯基，c1-c6的炔基，c1-c6的烷氧基，c1-c6的烷基硫基，被羟基、氨基或卤素取代的c1-c6的烷基或c1-c6的烷氧基或c1-c6的烷基硫基，被单个或两个c1-c6的烷基取代的氨基，c1-c6的烷基酰氨基，游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基，c1-c6的烷基亚磺酰基，c1-c6的磺酰基，c1-c6的烷基酰基，氨基甲酰基，被单个或两个c1-c6的烷基取代的氨基甲酰基，c1-c3的亚烷基二氧基的取代基；
r2和r3相同或不同，r2和r3分别独立地选自氢、c1-c10的烷基、c3-c7的环烷基、c2-c10的烯基或c2-c10的炔基；
或r2、r3和与r2、r3所连接的氮原子一起形成5～10元杂环基或5～10元杂芳基，且所述r2、r3的杂环基或杂芳基上含有1～3个相同或不同的取代基r4，r4为苄基、c1-c4的烷基、c1-c4的烷氧基、卤素、羟基、羧基或者酯基；
ar为c6-c10的芳基或者5～10元杂芳基，其中，所述ar的杂芳基中含有1～3个选自n、o和/或s的杂原子。
优选的，x为o、nh或者nhnhconh；n为1-4之间的整数；r1为h或为1～3个选自羟基、卤素、c1-c4的烷基、c1-c4的烷氧基、三氟甲基和三氟甲氧基的取代基；
r2和r3相同或不同，r2和r3分别独立地选自c1-c6的烷基或c3-c6的环烷基；
或r2、r3和与r2、r3所连接的氮原子一起形成5～6元杂环基，且所述r2、r3的杂环基上含有1～3个相同或不同的取代基r4，r4为苄基、c1-c4的烷基、c1-c4的烷氧基、卤素、羟基、羧基或者酯基；
ar为苯基，萘基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，咪唑基，吡唑基，噻唑基，异噻唑基，恶唑基，异恶唑基，1,2,3-三氮唑基，1,2,4-三氮唑基，吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，吲哚基，苯并咪唑基，苯并吡唑基，苯并噻唑基，苯并恶唑基，喹啉基，异喹啉基，苯并嘧啶基，苯并哒嗪基，苯并吡嗪基，噻吩并嘧啶基，吡咯并嘧啶基，噻吩并吡啶基或者噻吩并吡啶基；r5为氢，卤素，三氟甲基，三氟甲氧基，氨基，硝基，c1-c4的烷基，c1-c4的炔基，c1-c4的烷氧基或c1-c4的烷硫基。
优选的，x为nh或者nhnhconh；n为1；r1为羟基或者甲氧基；
r2和r3取相同的取代基，r2和r3分别选自c1-c6的烷基；
或者r2、r3和与r2、r3所连接的氮原子一起形成5～6元杂环基，且所述r2、r3的杂环基上含有1～3个相同或不同的取代基r4，r4为c1-c4的烷基；
ar为苯基，吡咯基，噻吩基，咪唑基，吡唑基，噻唑基，1,2,3-三氮唑基，1,2,4-三氮唑基，吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，吲哚基，苯并咪唑基，苯并吡唑基，苯并噻唑基，苯并恶唑基，苯并嘧啶基或者噻吩并嘧啶基；r5为氢，卤素，三氟甲基，三氟甲氧基，氨基或者c1-c4的烷基。
优选的，x为nh或者nhnhconh；n为1；r1为羟基或甲氧基；
式i中的
ar为苯基或者苯并噻唑基；r5为氢，卤素，三氟甲基，三氟甲氧基，氨基或者c1-c4的烷基。
优选的，该用作caspase-3激活剂的香豆素类衍生物选自：
n-[2-(6-(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[2-(6-(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[2-(6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[2-(6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[2-(6-(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[2-(6-(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，
n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[6-(二乙胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[6-(二乙胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
n-[6-(二甲胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，
或n-[6-(二甲胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺。
此外，本发明还包括本发明衍生物的前药。本发明衍生物的前药是通式i的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
本发明中“卤素”是指氟、氯、溴或碘代；“烷基”是指直链或支链的烷基；“亚烷基”是指直链或支链的亚烷基；“芳基”是指无取代基或连有取代基的苯基；“杂芳基”是指含有一个或多个选自n、o、s杂原子的单环或多环的环状体系，环状体系是芳香性的，如噻唑基，咪唑基、吡啶基、吡唑基、(1,2,3)-和(1,2,4)-三唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基，苯并噻唑基，噁唑基，异噁唑基，萘基，喹啉基，异喹啉基，苯并咪唑基和苯并噁唑基等。
一种用作caspase-3激活剂的香豆素类衍生物的制备方法，按照路线1的方法由相应的中间体a和相应的中间体b反应制备得到具有如式i所示的结构通式的化合物：
其中，中间体a的制备方法如路线2所示，取代基r1如上述所定义：
当x为nh，ar为苯基，n为1时，中间体b-1的制备方法如路线3，取代基r2和r3如上述所定义：
当x为nh，ar为苯并噻唑基，n为1时，中间体b-2的制备方法如路线4，取代基r2和r3如上述所定义：
当x为nhnhconh，ar为苯基，n为1时，中间体b-3的制备方法如路线5，取代基r2和r3如上述所定义：
当x为nhnhconh，ar为苯并噻唑基，n为1时，中间体b-4的制备方法如路线6，取代基r2和r3如上述所定义：
该用作caspase-3激活剂的香豆素类衍生物在制备治疗和/或预防癌症和其它增生性疾病的药物中的应用。
采用上述技术方案后，本发明一种用作caspase-3激活剂的香豆素类衍生物，在同类产品中并未见到类似的结构设计和使用，具有显著的caspase-3激活作用，在制备治疗和/或预防癌症和其它增生性疾病的药物领域具有应用前景。
具体实施方式
为了进一步解释本发明的技术方案，下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐述。
一、合成例：
各实施例所用试剂均为分析纯或化学纯，合成的化合物的核磁共振氢谱用brukerarx-400测定，质谱用agilent1100lc/msd测定。
实施例1
步骤a、8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸的制备：
将0.1mol的2,3-二羟基苯甲醛和0.11mol的麦氏酸加入到80ml水中，80℃反应搅拌2h，反应完毕后冷却，抽滤，得到产物中间体a，收率92.5％，ms(esi)m/z(％):205.1[m-h]-；1hnmr(400mhz,dmso)δ10.35(s,1h),8.68(s,1h),7.35–7.29(m,1h),7.24–7.18(m,2h)。
步骤b、n-乙基-n-(4-硝基苄基)乙胺(1)的制备
将20g的对硝基溴苄(0.092mol)和14.14g的二乙胺(0.19mol)加入到80ml乙腈中，室温搅拌5h，反应完毕后，向反应液中加入200ml水和200ml二氯甲烷，萃取，得到有机层，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，收率73.1％，ms(esi)m/z(％):208.4[m+h]+；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21–8.13(d,j＝8.6hz,2h),7.56(d,j＝8.6hz,2h),3.69(s,2h),2.57(q,j＝7.2hz,4h),1.07(t,j＝7.2hz,6h)。
步骤c、4–(二乙基氨基甲基)苯胺(b-1)的制备：
将20g的n-乙基-n-(4-硝基苄基)乙胺(0.096mol)溶于80ml90％乙醇中，搅拌升温至60℃，加入6.07g的六水合三氯化铁(0.022mol)及微量活性炭，滴加53.5g水合肼(1.05mol)，结束后升温至80℃，回流反应，反应结束后趁热抽滤，向滤液中加入250ml水，再加入100ml二氯甲烷，萃取两遍，把二氯甲烷层加入到饱和氯化钠再萃取一遍，然后用无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，收率66.2％，ms(esi)m/z(％):178.6[m+h]+；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.13(d,j＝8.4hz,2h),6.66(d,j＝8.4hz,2h),3.63(s,2h),3.50(s,2h),2.53(q,j＝7.2hz,4h),1.06(t,j＝7.2hz,6h)。
步骤d、6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)的制备：
将6.5g的4–(二乙基氨基甲基)苯胺(0.036mol)、13.9g的硫氰化铵(0.182mol)溶于50ml乙酸中，搅拌0.5h，降温至10℃以下，缓慢滴加2.25ml溴的乙酸溶液，室温反应5h，反应完毕后，将反应液倒入200ml水中，用naoh溶液调节ph至碱性，抽滤除去不溶物，将滤液继续用naoh溶液调节ph至10，有固体析出，抽滤，得黄色固体，收率58.9％，ms(esi)m/z(％):236.0[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ7.55(s,1h),7.37(s,2h),7.26(d,j＝8.4hz,1h),7.14(dd,j＝8.4,1.2hz,1h),3.52(s,2h),2.45(q,j＝7.2hz,4h),0.97(t,j＝7.2hz,6h)。
步骤e、n-[2-(6-(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺的制备：
将2.9g的8-羟基基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸(0.009mol)，0.16mldipea和6.9ghatu(0.018mol)溶于20mldmf中，搅拌2h后，加入1.6g的6-(二乙基氨基甲基)-苯并[d]噻唑-2-胺(0.009mol)，室温反应1h，反应完毕后，将反应液倒入30ml水中，有固体析出，室温搅拌2h，抽滤，用甲醇洗涤滤饼，搅拌4h后抽滤，得黄色固体，结构见表1，收率：45.1％；ms(esi)m/z(％):424.1[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ9.00(s,1h),7.97(s,1h),7.75(d,j＝8.4hz,1h),7.49–7.45(m,1h),7.45–7.41(m,1h),7.31(s,1h),7.30(s,1h),3.68(s,2h),2.58–2.51(m,4h),1.02(t,j＝7.2hz,6h)；13cnmr(101mhz,dmso)δ161.01,160.85,156.99,149.90,148.01,145.15,143.24,132.27,127.77,125.98,122.00,121.62,120.99,120.94,119.79,117.92,57.18,46.59,11.94。
实施例2
参照实施例1中的步骤a，以2-羟基3-甲氧基苯甲醛为原料，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸，收率88.7％，ms(esi)m/z(％):219.1[m-h]-；1hnmr(400mhz,dmso)δ8.71(s,1h),7.46–7.43(m,1h),7.43–7.39(m,1h),7.37–7.30(m,1h),3.93(s,3h)。
参照实施例1中的步骤b、步骤c、步骤d，制备得到6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)为原料，制备得到n-[2-(6-(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率：46.2％；ms(esi)m/z(％):437.0[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ9.02(s,1h),8.20(s,1h),7.98–7.85(m,1h),7.65–7.53(m,2h),7.53–7.47(m,1h),7.46–7.37(m,1h),4.41(s,2h),3.97(s,3h),3.22–3.02(d,j＝7.0hz,4h),1.26(t,j＝7.0hz,6h)。
实施例3
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例1中的步骤b，以对硝基溴苄和4-甲基哌啶为原料，制备得到4-甲基-1-(4-硝基苯基)哌啶(1)，参照实施例1的步骤c，以4-甲基-1-(4-硝基苯基)哌啶为原料，制备得到4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺(b-1)，参照实施例一中的步骤d的方法，以4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺为原料，制备得到6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)，收率：85.3％；ms(esi)m/z(％):262.1[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ7.75(s,1h),7.65(s,2h),7.38(d,j＝8.0hz,1h),7.30(d,j＝8.0hz,1h),4.22(s,2h),3.33(m,2h),2.77(m,2h),1.77(m,2h),1.56(m,1h),1.29(m,2h),0.90(d,j＝5.4hz,3h)。
最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)为原料，制备得到n-[2-(6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率：55.7％；ms(esi)m/z(％):450.2[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ9.00(s,1h),7.94(s,1h),7.75(d,j＝8.4hz,1h),7.47(t,j＝4.8hz,1h),7.41(dd,j＝8.4,1.6hz,1h),7.31(s,1h),7.30(s,1h),3.57(s,2h),2.87–2.73(m,2h),2.04–1.90(m,2h),1.64–1.51(m,2h),1.39–1.29(m,1h),1.19–1.10(m,2h),0.89(d,j＝6.4hz,3h)；13cnmr(101mhz,dmso)δ161.04,160.84,157.32,157.06,149.90,148.07,145.14,144.49,143.25,140.05,132.26,129.11,127.98,127.17,125.99,123.99,122.26,121.62,121.24,121.00,120.93,119.79,118.69,117.95,62.72,53.70,34.32,30.70,22.27。
实施例4
参照实施例1中的步骤a，以2-羟基3-甲氧基苯甲醛为原料，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例3中的步骤b、步骤c、步骤d，制备得到6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)为原料，制备得到n-[2-(6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率：61.3％；ms(esi)m/z(％):464.3[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ8.87(s,1h),7.61–7.51(m,3h),7.49–7.43(m,2h),7.43–7.37(m,1h),4.16(s,2h),3.96(s,3h),3.30–3.17(m,2h),2.93–2.75(m,2h),1.83–1.67(m,2h),1.63–1.51(m,1h),1.51–1.32(m,2h),0.90(d,j＝5.4hz,3h)。
实施例5
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例1中的步骤b，以对硝基溴苄和二甲胺为原料，制备得到n-甲基-n-(4-硝基苄基)甲胺(1)，参照实施例1的步骤c，以n-甲基-n-(4-硝基苄基)甲胺为原料，制备得到4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)，参照实施例1中的步骤d的方法，以4–(二甲基氨基甲基)苯胺为原料，制备得到6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和6–((二甲基氨基)甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)为原料，制备得到n-[2-(6-(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率：51.1％；ms(esi)m/z(％):396.1[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ9.01(s,1h),8.17(d,j＝1.2hz,1h),7.92(d,j＝8.4hz,1h),7.60(dd,j＝8.4,1.6hz,1h),7.50–7.45(m,1h),7.32(d,j＝4.4hz,2h),4.38(s,2h),2.76(s,6h)；13cnmr(101mhz,dmso)δ161.38,160.79,158.59,150.04,149.70,145.14,143.25,132.60,129.69,126.70,126.05,125.19,121.70,121.60,121.05,119.76,117.89,60.29,42.37。
实施例6
参照实施例1中的步骤a，以2-羟基3-甲氧基苯甲醛为原料，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例5中的步骤b、步骤c、步骤d，制备得到6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)为原料，制备得到n-[2-(6-(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑基)]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率：53.2％；ms(esi)m/z(％):409.8[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ9.04(s,1h),8.22(s,1h),7.88(d,j＝8.4hz,1h),7.67(dd,j＝8.4,1.4hz,1h),7.61–7.56(m,1h),7.52(d,j＝7.2hz,1h),7.44(t,j＝8.0hz,1h),4.36(s,2h),3.97(s,3h),2.72(s,6h)；13cnmr(101mhz,dmso)δ161.24,160.52,158.42,149.77,149.56,146.89,143.92,132.50,129.76,126.93,125.99,125.15,122.06,121.50,119.34,118.27,117.60,60.03,56.84,42.16。
实施例7
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例3中的步骤b、步骤c，制备得到4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺(b-1)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率：61.4％；ms(esi)m/z(％):464.0[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ8.87(s,1h),7.61–7.51(m,3h),7.49–7.43(m,2h),7.43–7.37(m,1h),4.16(s,2h),3.96(s,3h),3.30–3.17(m,2h),2.93–2.75(m,2h),1.83–1.67(m,2h),1.63–1.51(m,1h),1.51–1.32(m,2h),0.90(d,j＝5.4hz,3h)。
实施例8
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例3中的步骤b、步骤c，制备得到4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺(b-1)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率：55.7％；ms(esi)m/z(％):450.1[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ9.00(s,1h),7.94(s,1h),7.75(d,j＝8.4hz,1h),7.47(t,j＝4.8hz,1h),7.41(dd,j＝8.4,1.6hz,1h),7.31(s,1h),7.30(s,1h),3.57(s,2h),2.87–2.73(m,2h),2.04–1.90(m,2h),1.64–1.51(m,2h),1.39–1.29(m,1h),1.19–1.10(m,2h),0.89(d,j＝6.4hz,3h)；13cnmr(101mhz,dmso)δ161.04,160.84,157.32,157.06,149.90,148.07,145.14,144.49,143.25,140.05,132.26,129.11,127.98,127.17,125.99,123.99,122.26,121.62,121.24,121.00,120.93,119.79,118.69,117.95,62.72,53.70,34.32,30.70,22.27。
实施例9
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例1中的步骤b、步骤c，制备得到4–(二乙基氨基甲基)苯胺(b-1)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和4–(二乙基氨基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率:51％；ms(esi)m/z(％):381.0[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ8.90(s,1h),7.85(d,j＝8.4hz,2h),7.58–7.53(m,3h),7.49(dd,j＝8.4,1.2hz,1h),7.45–7.39(m,1h),4.30(d,j＝5.2hz,2h),3.97(s,3h),3.19–2.96(m,4h),1.24(t,j＝7.2hz,6h)；13cnmr(101mhz,dmso)δ160.60,160.58,148.28,146.83,143.71,139.40,132.34,128.28,125.76,121.70,120.55,120.40,119.48,116.85,112.63,56.74,55.01,46.37,8.92。
实施例10
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
照实施例1中的步骤b、步骤c，制备得到4–(二乙基氨基甲基)苯胺(b-1)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和4–(二乙基氨基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率:57％；ms(esi)m/z(％):367.8[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ8.85(s,1h),7.78(d,j＝8.4hz,2h),7.72–7.56(m,2h),7.43–7.34(m,2h),7.26(t,j＝8.0hz,1h),4.17(s,2h),2.95(s,4h),1.23(s,6h)。
实施例11
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例5中的步骤b，步骤c、制备得到4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率:49％；ms(esi)m/z:393.6[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ8.98(s,1h),7.87–7.82(m,1h),7.80(d,j＝7.0hz,2h),7.58(t,j＝8.0hz,1h),7.48(d,j＝7.0hz,2h),7.29–7.26(m,1h),4.13(s,2h),3.26–3.17(m,2h),2.86–2.66(m,2h),1.81–1.71(m,2h),1.57(s,1h),1.38–1.23(m,2h),0.92(d,j＝6.4hz,3h)。
实施例12
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例5中的步骤b，步骤c，制备得到4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-甲酰胺，结构见表1，收率:57％；ms(esi)m/z:407.60[m+h]+；1hnmr(400mhz,dmso)δ8.90(s,1h),7.84(d,j＝8.4hz,2h),7.58–7.54(m,1h),7.51(d,j＝8.4hz,2h),7.48(s,1h),7.45–7.38(m,1h),4.26(s,2h),3.97(s,3h),3.39–3.34(m,2h),3.01–2.81(m,2h),1.89–1.70(m,3h),1.69–1.52(m,2h),1.37–1.21(m,2h),0.92(d,j＝6.4hz,3h)；13cnmr(101mhz,dmso)δ160.62,160.58,148.27,146.84,143.72,139.49,132.67,125.78,121.71,120.48,119.49,116.89,59.33,56.77,52.12,31.28,28.58,21.53。
实施例13
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
步骤f、n-[4-(二乙氨基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(2)的制备：
将5g的4-(二乙氨基甲基)苯胺(0.02mol)溶于20ml二氯甲烷中，搅拌再加入4.27ml吡啶(0.053mol)，降温到0℃以下，滴加1.94g氯甲酸苯酯(0.028mol)，滴毕逐渐升温到室温，反应完毕后，蒸干溶剂，然后加水搅拌，抽滤，得到固体产物，收率70.1％，ms(esi)m/z(％):298.9[m+h]+。
步骤g、n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)的制备：
将5g的n-[4-(二乙氨基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(0.015mol)溶于30ml二氧六环中，搅拌滴加1.45ml水合肼(0.03mol)，升温到80℃反应5h，反应完毕后，停止加热，冷却，蒸干溶剂，加入乙醚搅拌2h，抽滤得白色固体,收率55.2％，ms(esi)m/z(％):236.8[m+h]+。
按照步骤e的方法，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和步骤g制备得到的n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]氨基甲酰肼为原料，制备得到n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，结构见表1，收率：49.9％；ms(esi)m/z(％):425.2[m+h]+。
实施例14
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
照实施例13中的步骤f、步骤g，制备得到n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)为原料，制备得到n-[4-(二乙胺基甲基)苯基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，收率：58.9％；ms(esi)m/z(％):439.0[m+h]+，结构见表1。
实施例15
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例3中的步骤b、步骤c，制备得到4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺(b-1)，参照实施例13中的步骤f，以4–(4-甲基哌啶基甲基)苯胺(b-1)为原料制备得到n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(2)，参照实施例13中的步骤g，以n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(2)为原料制备得到n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)为原料，制备得到n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，结构见表1，收率：62.1％；ms(esi)m/z(％):451.1[m+h]+。
实施例16
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例15中的步骤b、步骤c、步骤f、步骤g，制备得到n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)为原料，制备得到n-[4-(4-甲基哌啶基甲基)苯基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，结构见表1，收率：68.2％；ms(esi)m/z(％):465.1[m+h]+。
实施例17
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例5中的步骤b、步骤c，制备得到4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)，参照实施例13中的步骤f，以4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(二甲氨基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(2)，参照实施例13中的步骤g，以n-[4-(二甲氨基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(2)为原料，制备得到n-[4-(二甲氨基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[4-(二甲氨基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)为原料，制备得到n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，结构见表1，收率：50.2％；ms(esi)m/z(％):397.0[m+h]+。
实施例18
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例5中的步骤b、步骤c，制备得到4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)，参照实施例13中的步骤f，以4–(二甲基氨基甲基)苯胺(b-1)为原料，制备得到n-[4-(二甲氨基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(2)，参照实施例13中的步骤g，以n-[4-(二甲氨基甲基)苯基]氨基甲酸苯酯(2)为原料，制备得到n-[4-(二甲基氨基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[4-(二甲氨基甲基)苯基]氨基甲酰肼(b-3)为原料，制备得到n-[4-(二甲胺基甲基)苯基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，结构见表1，收率：62.1％；ms(esi)m/z(％):411.0[m+h]+。
实施例19
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例1中的步骤b、步骤c、步骤d，制备得到6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)。
步骤h、n-(6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基)甲酸苯酯(3)的制备：
将5g的6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(0.02mol)溶于20ml二氯甲烷中，搅拌再加入4.27ml吡啶(0.053mol)，降温到0℃以下，滴加1.94g氯甲酸苯酯(0.028mol)，滴毕逐渐升温到室温，反应完毕后，蒸干溶剂，然后加水搅拌，抽滤，得到固体产物，收率82.4％，ms(esi)m/z(％):335.8[m+h]+。
步骤i、n-[6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)的制备：
将5g的n-(6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基)甲酸苯酯(0.015mol)溶于30ml二氧六环中，搅拌滴加1.45ml水合肼(0.03mol)，升温到80℃反应5h，反应完毕后，停止加热，冷却，蒸干溶剂，加入乙醚搅拌2h，抽滤得白色固体，收率64.5％，ms(esi)m/z(％):294.8[m+h]+。
参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和步骤i制备得到的n-[6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼为原料，制备得到n-[6-(二乙胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，结构见表1，收率：49.9％；ms(esi)m/z(％):482.1[m+h]+。
实施例20
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例19中的步骤b、步骤c、步骤d，步骤h、步骤i，制备得到n-[6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[6–(二乙基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)为原料，制备得到n-[6-(二乙胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，收率：55.7％；ms(esi)m/z(％):496.9[m+h]+，结构见表1。
实施例21
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例3中的步骤b、步骤c、步骤d，制备得到6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)，参照实施例19中的步骤h，以6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)为原料，制备得到n-(6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基)甲酸苯酯(3)，参照实施例19中的步骤i，以n-(6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基)甲酸苯酯为原料，制备得到n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)为原料，制备得到n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，收率：45.9％；ms(esi)m/z(％):508.9[m+h]+，结构见表1。
实施例22
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例21中的步骤b、步骤c、步骤d、步骤h、步骤i，制备得到n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基甲酰肼(b-4)为原料，制备得到n-[6-(4-甲基哌啶基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，收率：51.6％；ms(esi)m/z(％):522.8[m+h]+，结构见表1。
实施例23
参照实施例1中的步骤a，制备得到8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例5中的步骤b、步骤c、步骤d，制备得到6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)，参照实施例19中的步骤h，以6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(b-2)为原料，制备得到n-(6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基)甲酸苯酯(3)，参照实施例19中的步骤i，以n-(6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基)甲酸苯酯(3)为原料，制备得到n-[6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)为原料，制备得到n-[6-(二甲胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-羟基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，收率：43.1％；ms(esi)m/z(％):454.8[m+h]+，结构见表1。
实施例24
参照实施例2中的步骤a，制备得到8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸。
参照实施例23中的步骤b、步骤c、步骤d、步骤h、步骤i，制备得到n-[6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)，最后参照实施例1中的步骤e，以8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羧酸和n-[6–(二甲基氨基甲基)苯并[d]噻唑-2-氨基]甲酰肼(b-4)为原料，制备得到n-[6-(二甲胺基甲基)苯并噻唑-2-基]-2-(8-甲氧基-2-氧代-2h-苯并吡喃-3-羰基)肼-1-甲酰胺，收率：50.9％；ms(esi)m/z(％):468.8[m+h]+，结构见表1。
表1各实施例的化学名称及结构式
二、对实施例1～24制备得到的具有式i结构的化合物进行了体外caspase-3激活活力筛选测试，具体过程如下。
u-937悬浮细胞培养在无酚红的rpmi-1640完全培养基(50000细胞/孔)中，将100μlu937细胞悬浮液分别接种到两块96孔板中，然后在37℃下，5％co2培养箱中培养15小时。各化合物(包括实施例1～24中化合物，pac-1)分别使用完全培养基配置成3x终浓度(以3％dmso为空白对照)，同时向两块96孔板中对应的孔中加入50μl化合物，每个化合物设置六次重复。向第一块96孔板中，加入50μl双功能细胞裂解/半胱天冬酶活性缓冲液，采用酶标仪，每隔2分钟读取荧光强度(ex.400nm,em.505nm)，持续读取1小时，斜率表示caspase-3活力，该值为化合物处理之前的u937细胞的caspase活力。第二块96孔板在37℃下，5％co2环境下，继续孵育15小时，之后加入50μl双功能细胞裂解/半胱天冬酶活性缓冲液，同样每隔2分钟读取荧光强度(ex.400nm,em.505nm)，持续读取1小时，减去化合物处理之前的u937细胞的caspase活力，最终计算出化合物处理16h时后细胞的caspase活力，以阳性对照pac-1的caspase活力为100％，最终求出各个化合物相对于pac-1的激活率百分比，结果见表2，其中，+表示caspase-3激活程度在10％～50％之间，++表示caspase-3激活程度在50％～70％之间，++表示caspase-3激活程度在70％～100％之间。
表2具有式i结构的化合物的体外caspase-3激活活力测试结果
从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的式ⅰ的化合物具有显著的caspase-3激活活性，相当或优于对照药pac-1。
上述实施例并非限定本发明的产品形态和式样，任何所属技术领域的普通技术人员对其所做的适当变化或修饰，皆应视为不脱离本发明的专利范畴。