一种用于检测恶性肿瘤、肿瘤转移和类型的标志物及其应用的制作方法

本发明涉及生物技术领域，涉及基因诊断领域，涉及一种检测肿瘤的标志物，具体涉及一种用于检测恶性肿瘤、肿瘤转移和类型的标志物及其应用。

背景技术：

癌症是人类生命的重大威胁，全世界每年新增1400万癌症患者，同时有820万患者死于癌症。无限增殖和转移是癌细胞的重要特性，大部分癌症患者都是由于癌细胞广泛转移，引起器官衰竭等并发症而导致死亡。很多癌症在早期就会开始发生转移，此时从癌灶转移出来的癌细胞数量还较少，尚未形成稳定的转移灶，如果能够及时使用有效的化疗药物，将能够消灭转移的癌细胞，对防止病人术后复发和延长生命具有重要意义。目前对于癌症是否发生早期转移，通常是通过形态学观察癌灶附近的淋巴结中是否存在癌细胞来判定，但是形态学观察对病理医生的经验要求非常高，同时癌细胞在发生转移时会发生一些形态学上的变化，很容易造成漏诊，因此急需开发一种能够在早期发现癌细胞转移的检测技术。

基因组印记是表观遗传学中基因调控的一种方式。其特点是，通过甲基化来自特定亲代的等位基因，使某个基因只有一个等位基因表达，而另一个则陷入基因沉默状态。该种类的基因，被称为印迹(记)基因。印迹缺失是印迹基因去甲基化导致沉默状态的等位基因被激活并且开始基因表达的一种表观遗传改变。大量研究表明，该现象(印迹缺失)普遍存在于各类癌症并且发生时间早于细胞和组织形态改变。与此同时，在健康细胞中，印迹缺失比例极低，与癌细胞成鲜明对比。所以，印迹基因的甲基化状态可以作为病理标记，通过特定分子检测技术，对细胞异常状态进行分析。

由于印迹基因的功能涵盖细胞信号传递、细胞周期调控、细胞内外物质运输、细胞外基质形成等多个方面，所以在不同的癌症中印迹基因所表现的作用有所不同，表达的量也相差很大，故而形成了不同的敏感性和特异性，对肿瘤发生发展中的浸润和转移及预后起了巨大的作用。同时，不同印记基因的组合也可以对肿瘤的亚型进行区分。

基于上述原因，目前的肿瘤的转移、肿瘤类型并没有明显区分的诊断标志物，解析肿瘤的转移、肿瘤类型在细胞层面上存在的分子标记物变化，以此提供更精确的预诊和诊断信息，并为治疗方案的选择作出指导。

技术实现要素：

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供了一种用于检测恶性肿瘤、肿瘤转移和类型的标志物及其应用，通过采用印记基因的检测，能够判断甲状腺肿瘤和乳腺肿瘤的转移性，区分肺癌的类型，作为恶性肿瘤的标志物，早期诊断胃癌，诊断非实体肿瘤，为后续的各种恶性肿瘤的治疗提供依据。

为达上述目的，本发明提供如下技术方案：

第一方面，本发明提供一种甲状腺癌转移标志物，所述标志物为印记基因grb10。

本发明中，甲状腺癌是一种惰性癌症，一般情况下鲜有转移，但通过对印记基因grb10的总表达量、印记基因缺失表达量和印记基因拷贝数异常表达量的计算，发现印记基因grb10表达量增加、印记基因缺失表达量增加和印记基因拷贝数异常表达量增加的时候与甲状腺癌转移显著相关。

根据本发明，所述印记基因的总表达量、印记基因缺失表达量和印记基因拷贝数异常表达量的公式如下：

总表达量＝(b+c+d)/(a+b+c+d)×100％；

正常印记基因表达量＝b/(b+c+d)×100％；

印记基因缺失基因表达量＝c/(b+c+d)×100％；

印记基因拷贝数异常的基因表达量＝d/(b+c+d)×100％；

其中，所述a为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内不存在标记，印记基因没有表达的细胞核；所述b为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内存在一个红色/棕色标记，印记基因存在的细胞核；所述c为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内存在两个红色/棕色标记，印记基因缺失的细胞核；所述d为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内存在两个以上红色/棕色标记，印记基因拷贝数异常的细胞核；

根据本发明，所述印记基因grb10的总表达量大于10％、印记基因缺失表达量大于10％和印记基因拷贝数异常表达量大于0.5％，则判断为甲状腺癌具有转移属性或甲状腺癌已转移。

第二方面，本发明提供一种乳腺癌前哨淋巴结转移标志物，所述标志物为印记基因grb10。

根据本发明，所述印记基因grb10的总表达量大于11％、印记基因缺失表达量大于5％和印记基因拷贝数异常表达量大于0.5％，则判断为乳腺癌前哨淋巴结具有转移属性或乳腺癌前哨淋巴结已转移。

第三方面，本发明提供一种用于区分肺癌类型的标志物，所述标志物为印记基因peg3和印记基因slc38a4。

根据本发明，所述印记基因peg3的总表达量大于45％、印记基因peg3的印记基因缺失表达量大于20％且印记基因peg3的拷贝数异常表达量大于15％或所述印记基因slc38a4的总表达量不小于50％、印记基因slc38a4的印记基因缺失表达量不小于20％且印记基因slc38a4的拷贝数异常表达量不小于10％中任意一种情况，则判断为小细胞癌。

根据本发明，所述印记基因peg3同时满足：总表达量不大于45％、印记基因peg3的印记基因缺失表达量不大于20％、印记基因peg3的拷贝数异常表达量不大于15％且所述印记基因slc38a4的总表达量为0、印记基因slc38a4的印记基因缺失表达量为0、印记基因slc38a4的拷贝数异常表达量为0，则判断为非小细胞癌。

本发明中，所述非小细胞癌包括肺腺癌、肺鳞癌、肺大细胞癌、肺类癌或肺癌组织类型未定中的任意一种或至少两种的组合。

第四方面，本发明提供一种恶性肿瘤标志物，所述标志物为印记基因gnas、印记基因igf2、印记基因peg10、印记基因igf2r、印记基因mest、印记基因plagl1、印记基因dcn、印记基因dlk1、印记基因gatm、印记基因grb10、印记基因peg3、印记基因sgce、印记基因slc38a4、印记基因diras3或印记基因snrpn/snurf中的任意一种或至少两种的组合。

本发明中，通过对印记基因gnas，igf2，peg10，igf2r，mest，plagl1，dcn，dlk1，gatm，grb10，peg3，sgce，slc38a4，diras3和snrpn/snurf的总表达量、印记基因缺失表达量和印记基因拷贝数异常表达量进行计算，发现印记基因gnas，igf2，peg10，igf2r，mest，plagl1，dcn，dlk1，gatm，grb10，peg3，sgce，slc38a4，diras3和snrpn/snurf对于同一个癌症的表达也有不同的表达通道，具体表现如下：

根据本发明，所述印记基因gnas的总表达量小于10％或印记基因gnas的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因gnas与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因igf2的总表达量小于10％或印记基因igf2的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因igf2与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因peg10的总表达量小于10％或印记基因peg10的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因peg10与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因igf2r的总表达量小于10％或印记基因igf2的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因igf2与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因mest的总表达量小于10％或印记基因mest的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因mest与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因plagl1的总表达量小于10％或印记基因plagl1的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因plagl1与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因dcn的总表达量小于10％或印记基因dcn的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因dcn与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因dlk1的总表达量小于10％或印记基因dlk1的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因dlk1与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因gatm的总表达量小于10％或印记基因gatm的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因gatm与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因grb10的总表达量小于10％或印记基因grb10的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因grb10与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因peg3的总表达量小于10％或印记基因peg3的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因peg3与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因sgce的总表达量小于10％或印记基因sgce的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因sgce与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因slc38a4的总表达量小于10％或印记基因slc38a4的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因slc38a4与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因diras3的总表达量小于10％或印记基因diras3的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因diras3与恶性肿瘤相关性不高；

优选地，所述印记基因snrpn/snurf的总表达量小于10％或印记基因snrpn/snurf的拷贝数异常的基因表达量小于1％中的任意一种情况，所述印记基因snrpn/snurf与恶性肿瘤相关性不高。

本发明中，所述与恶性肿瘤相关性不高意味着在进行肿瘤诊断的时候，无需考虑相关性不高的印记基因，无需将相关性不高的印记基因与其他印记基因进行联合诊断。

本发明中，所述印记基因snrpn和印记基因snurf在染色体区域上有重叠，所以无法区分。

根据本发明，所述印记基因gnas的总表达量大于10％且印记基因gnas的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因gnas与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因igf2的总表达量大于10％且印记基因igf2的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因igf2与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因peg10的总表达量大于10％且印记基因peg10的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因peg10与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因igf2r的总表达量大于10％且印记基因igf2r的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因igf2r与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因mest的总表达量大于10％且印记基因mest的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因mest与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因plagl1的总表达量大于10％且印记基因plagl1的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因plagl1与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因dcn的总表达量大于10％且印记基因dcn的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因dcn与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因dlk1的总表达量大于10％且印记基因dlk1的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因dlk1与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因gatm的总表达量大于10％且印记基因gatm的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因gatm与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因grb10的总表达量大于10％且印记基因grb10的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因grb10与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因peg3的总表达量大于10％且印记基因peg3的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因peg3与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因sgce的总表达量大于10％且印记基因sgce的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因sgce与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因slc38a4的总表达量大于10％且印记基因slc38a4的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因slc38a4与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因diras3的总表达量大于10％且印记基因diras3的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因diras3与恶性肿瘤相关性高；

优选地，所述印记基因snrpn/snurf的总表达量大于10％且印记基因snrpn/snurf的拷贝数异常的基因表达量大于1％，所述印记基因snrpn/snurf与恶性肿瘤相关性高。

本发明中，所述与恶性肿瘤相关性高意味着在进行肿瘤诊断的时候，必须要考虑相关性高的印记基因，需要将相关性高的印记基因用于诊断肿瘤良恶性程度，其也可以与其他相关性高的印记基因联合实现诊断。

本发明中，所述印记基因snrpn和印记基因snurf在染色体区域上有重叠，所以无法区分。

第五方面，本发明提供一种早期胃癌诊断的标志物，所述标志物为印记基因snrpn和印记基因gnas。

其中，所述早期胃癌为胃癌的tnm等级达到iii级之前的胃癌。

本发明中，印记基因snrpn在间质、上皮细胞中均匀表达，在早期胃癌中，特别是在上皮内瘤变时期，75％样本的印记基因snrpn总表达量>30％、印记缺失表达量>15％、拷贝数异常表达量增高明显>2.5％，但是随着癌症恶化，94％的样本的印记基因snrpn的总表达量<30％、印记缺失表达量<15％、拷贝数异常表达量<2.5，均明显降低，在胃癌的tnm等级达到iii级或以上时，90％以上的印记基因snrpn的印记表达为正常。所以，snrpn联合gnas基因，对早期胃癌的诊断，特别是低级别上皮内瘤变到胃癌的转变过程，是一个很好的诊断标记物，但在晚期胃癌中则不能用snrpn。

第六方面，本发明提供一种非实体肿瘤的标志物，所述标志物为印记基因gnas、印记基因igf2、印记基因peg10、印记基因igf2r、印记基因mest、印记基因plagl1、印记基因dcn、印记基因dlk1、印记基因gatm、印记基因grb10、印记基因peg3、印记基因sgce、印记基因slc38a4、印记基因diras3或印记基因snrpn/snurf中的任意一种或至少两种的组合。优选地，所述非实体瘤包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。

本发明中，发明人发现在非实体肿瘤中，印记基因也存在表达量增加，印记基因缺失基因表达量增加和印记基因拷贝数异常的基因表达量增加的情况，说明印记基因同样也可以用于检测非实体肿瘤的良恶性程度。

第七方面，本发明提供如第一方面到第六方面所述的标志物用于制备诊断和/或筛查癌症的药物或试剂。

本发明中，本发明检测方法区别于免疫组化方法、dna测序方法、dna甲基化分析和fish等方法，减少了假阳性和其他负面作用。

本发明中，作为本领域技术人员应当知晓，随着样本量的增多，其标准也会随着浮动，所述标志物的总表达量和的拷贝数异常表达量与甲状腺癌和乳腺癌的转移、肺癌类型的区分、早期胃癌、非实体肿瘤的关系会存在上下15％的浮动，其也是在本申请的范围之内的。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明标志物可以在早期准确检测出具有转移属性或已经发生转移的甲状腺癌和乳腺癌，对甲状腺癌和乳腺癌手术是否需要淋巴结清扫，以及是否需要放化疗具有指导作用，可以减少手术后的复发和转移；

(2)本发明标志物可以在早期准确检测出小细胞肺癌，对是否进行手术，以及放化疗药物的选择具有指导作用，可以减少治疗后的复发和转移；

(3)本发明标志物可以很敏感地检测出早期胃癌，指导医生及时进行治疗，并对手术方式和药物选择具有指导作用，可以极大地提高胃癌患者的生存率；

(4)本发明标志物可以很敏感地检测出恶性非实体肿瘤，对治疗方式的选择具有重要作用，可以减少治疗后的复发和转移，极大地提高非实体肿瘤患者的生存率；

(5)本发明取材简单，可以在早期检测出恶性非实体肿瘤，用在早期普查和癌症术后随访，尤其是对于疑似复发病人的跟踪随访，可以争取时间，为挽救病人生命做出重大贡献；

(6)本发明检测方法区别于免疫组化方法、dna测序方法、dna甲基化分析和fish等方法，减少了假阳性和其他负面作用，不仅如此，通过发现的与甲状腺和乳腺癌转移、小细胞肺癌、早期胃癌和非实体瘤相关的印记基因缺失位点的致该基因沉默、剔除、重排的靶向药物或技术方法，可用于指导后期的治疗和用药。

附图说明

图1(a)为18例转移和非转移甲状腺癌样本印记基因grb10的印记缺失表达量比较，图1(b)为18例转移和非转移甲状腺癌样本印记基因grb10的拷贝数异常表达量比较，其中，loi为印记基因缺失基因表达量，cnv为印记基因拷贝数异常的基因表达量，te为印记基因总表达量；

图2(a)为16例转移和非转移乳腺癌前哨淋巴结样本印记基因grb10的印记缺失表达量比较，图2(b)为16例转移和非转移乳腺癌前哨淋巴结样本印记基因grb10的拷贝数异常表达量比较，其中，loi为印记基因缺失基因表达量，cnv为印记基因拷贝数异常的基因表达量，te为印记基因总表达量；

图3(a)为小细胞肺癌细胞系和非小细胞肺癌样本印记基因peg3的检测结果比较，图3(b)为小细胞肺癌细胞系和非小细胞肺癌样本印记基因slc38a4的检测结果比较，其中，loi为印记基因缺失基因表达量，cnv为印记基因拷贝数异常的基因表达量，te为印记基因总表达量，nsclc(最高值)为非小细胞肺癌组织样本中印记基因peg3和/或slc38a4的印记基因缺失基因表达量、印记基因拷贝数异常的基因表达量和印记基因总表达量的最高值；

图4(a)为良性皮肤肿瘤中印记基因dcn的检测结果，图4(b)为皮肤癌样本中印记基因dcn的检测结果；

图5(a)为胃癌不同发展阶段的样本中印记基因gnas的检测结果，图5(b)为胃癌不同发展阶段的样本中印记基因snrpn/snurf的检测结果；

图6(a)为良性淋巴瘤中15个印记基因的检测结果，图6(b)为恶性淋巴瘤样本中15个印记基因的检测结果；

图7(a)为健康人外周血中15个印记基因的检测结果，图7(b)为白血病患者外周血样本中15个印记基因的检测结果。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。

实施例118例转移和非转移甲状腺癌样本的印记基因检测

通过穿刺获取18例甲状腺癌样本，包括转移和非转移的样本，按如下步骤进行印记基因检测：

(1)通过穿刺获取甲状腺癌样本，放入10％中性福尔马林溶液中进行固定，以防rna降解，固定时间为24小时，粘附到玻片上，所述玻片需要用正电荷防脱载玻片，在37℃烤箱烘烤3h以上；

(2)按照rnascope的样品处理方法封闭样本中内源性过氧化物酶活性，增强通透性并暴露出rna分子；

(3)设计探针：根据印记基因序列设计特异性引物；

所述设计探针是根据印记基因grb10进行设计的，具体在基因的内旋子内选择一段序列作为探针，具体的探针由advancedcelldiagnostics公司设计。

(4)将步骤(3)的探针与待测样本通过试剂盒进行rnascope原位杂交；

(5)信号扩增和苏木精染色，用显微镜成像分析印记基因的表达情况；

所述模型中的计算印记基因总表达量、印记基因缺失表达量和印记基因拷贝数异常表达量的公式如下：

总表达量＝(b+c+d)/(a+b+c+d)100％；

正常印记基因表达量＝b/(b+c+d)100％；

印记基因缺失基因表达量(loi)＝c/(b+c+d)100％；

印记基因拷贝数异常的基因表达量(cnv)＝d/(b+c+d)100％；

其中，所述a为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内不存在标记，印记基因没有表达的细胞核；所述b为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内存在一个红色/棕色标记，印记基因存在的细胞核；所述c为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内存在两个红色/棕色标记，印记基因缺失的细胞核；所述d为将细胞进行苏木素染色后，细胞核内存在两个以上红色/棕色标记，印记基因拷贝数异常的细胞核。

从图1(a)可以看出，非转移甲状腺癌样本的印记基因grb10印记缺失表达量都低于10％，转移甲状腺癌样本的印记基因grb10印记缺失表达量部分高于10％；从图1(b)可以看出，非转移甲状腺癌样本的印记基因grb10拷贝数异常表达量大部分都低于0.5％，转移甲状腺癌样本的印记基因grb10拷贝数异常表达量大部分都高于0.5％。

实施例216例转移和非转移乳腺癌前哨淋巴结穿刺样本的印记基因检测

通过穿刺获取16例乳腺癌前哨淋巴结样本，包括转移和非转移的样本，其他检测方法同实施例1。

从图2(a)可以看出，非转移乳腺癌前哨淋巴结样本的印记基因grb10印记缺失表达量大部分低于5％，转移乳腺癌前哨淋巴结样本的印记基因grb10印记缺失表达量大部分高于5％；从图2(b)可以看出，非转移乳腺癌前哨淋巴结样本的印记基因grb10拷贝数异常表达量都低于0.5％，转移乳腺癌前哨淋巴结样本的印记基因grb10拷贝数异常表达量大部分高于0.5％。

实施例3小细胞肺癌细胞系和非小细胞肺癌样本的印记基因检测

获取h446、h69和dms114三种培养的小细胞肺癌细胞系，通过穿刺获取非小细胞肺癌样本，根据印记基因peg3和slc38a4设计探针，其他检测方法同

实施例1。

从图3(a)可以看出，小细胞肺癌细胞系h69和dms114中印记基因peg3的印记缺失表达量大于20％，拷贝数异常表达量大于15％，总表达量大于45％，非小细胞癌样本中印记基因peg3的印记缺失表达量最高值稍高于20％，拷贝数异常表达量最高值小于15％，总表达量最高值小于45％；从图3(b)可以看出，小细胞肺癌细胞系h446和dms114中印记基因slc38a4的印记缺失表达量大于20％，拷贝数异常表达量大于10％，总表达量大于50％，非小细胞癌样本中印记基因slc38a4几乎不表达。

实施例4皮肤肿瘤样本的印记基因检测

通过穿刺获取皮肤良性肿瘤样本和皮肤癌样本，根据印记基因dcn设计探针，其他检测方法同实施例1。

从图4(a)可以看出，皮肤良性肿瘤中印记基因dcn在大部分细胞中都不表达，但在个别细胞中出现印记缺失和拷贝数异常；从图4(b)可以看出，皮肤癌中印记基因dcn在大部分细胞中都表达，并存在大量印记缺失和拷贝数异常的细胞。

实施例5胃肿瘤样本的印记基因检测

获取良性胃组织、上皮内瘤变和早期胃癌组织、中晚期胃癌组织，根据印记基因gnas和snrpn/snurf设计探针，其他检测方法同实施例1。

从图5(a)可以看出，随着恶性程度的增加，胃肿瘤组织中印记基因gnas的印记缺失表达量、拷贝数异常表达量和总表达量都逐渐上升；从图5(b)可以看出，上皮内瘤变和早期胃癌组织中印记基因snrpn/snurf的印记缺失表达量、拷贝数异常表达量和总表达量都比良性胃组织升高，但是晚期胃癌中印记基因snrpn/snurf的印记缺失表达量、拷贝数异常表达量和总表达量却发生下降。

实施例6非实体肿瘤的印记基因检测

通过穿刺获取良性和恶性淋巴瘤样本，获取健康人和白血病患者的外周血样本，根据印记基因gnas，igf2，peg10，igf2r，mest，plagl1，dcn，dlk1，gatm，grb10，peg3，sgce，slc38a4，diras3和snrpn/snurf设计探针，其他检测方法同实施例1。

从图6(a)可以看出，良性淋巴瘤中15个印记基因的总表达量较低，在个别细胞中出现印记缺失和拷贝数异常；从图6(b)可以看出，恶性淋巴瘤中15个印记基因的总表达量较高，并存在大量印记缺失和拷贝数异常的细胞。

从图7(a)可以看出，健康人外周血中15个印记基因的总表达量较低，在个别细胞中出现印记缺失和拷贝数异常；从图7(b)可以看出，白血病患者的外周血中15个印记基因的总表达量较高，并存在大量印记缺失和拷贝数异常的细胞。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。