一种检测高油酸花生的方法及其应用与流程

文档序号:20200778发布日期:2020-03-27 20:37阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测高油酸花生的方法,其特征在于:具体步骤如下:

(1)设计花生fad2基因(fad2a或fad2b)特异性引物;

(2)分别提取普通花生和可能的高油酸花生的dna,利用步骤(1)中的引物进行pcr扩增;

(3)利用celi酶进行酶切,根据琼脂糖凝胶电泳的结果进行判断。

2.根据权利要求1所述的检测高油酸花生的方法,以检测fad2b基因为例,

其特征在于:所述步骤(1)中花生fad2b基因特异性引物的序列为:

上游引物fad2b-f:ctcatatgttgtctatgatctcttaa

下游引物fad2b-r:gcgtatcagttatatgatgaaatgcc。

3.根据权利要求1所述的检测高油酸花生的方法,其特征在于:所述步骤(2)中pcr反应的条件为90~98℃预变性5分钟;90~98℃变性30秒,50~60℃退火30秒,68~72℃30秒,40个循环;68~72℃后延伸10分钟;退火预变性90~99℃10分钟,70~90℃20秒,95个退火循环。

4.根据权利要求3所述的检测高油酸花生的方法,其特征在于:所述退火循环为从80℃开始,每个循环下降0.3℃,每个温度7秒。

5.根据权利要求1所述的检测高油酸花生的方法,其特征在于:所述步骤(3)中酶切的具体方法为:将celi酶和pcr产物、双蒸水放入切割缓冲液中,在40~50℃下,酶切25~30分钟,加入反应终止液edta。

6.根据权利要求1所述的检测高油酸花生的方法,其特征在于:所述步骤(3)中根据琼脂糖凝胶电泳的判断方法为:设计的引物扩增片段大小为c,而产生变异的位点将c分成了a和b,从而经琼脂糖凝胶电泳,如果待检测花生为高油酸花生,可产生大小为a、b和c的条带,如果不是高油酸花生,则只产生c大小的条带。

7.根据权利要求1所述的检测方法在检测大豆、油菜等高油酸种质、品系或品种的应用。

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