一种检测手足口病病原体核酸的试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:20200829发布日期:2020-03-27 20:37阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于rna恒温扩增-多生物素信号放大技术联合检测肠道病毒通用型、柯萨奇病毒a组16型及肠道病毒71型核酸的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:

1)扩增反应液:含40mmtris-hcl(ph8.0),12mmmgcl2,70mmkcl,15%dmso,5mmdtt,每种dntp各1mm,每种ntp各2mm,扩增引物各0.2μm;其中扩增引物包括四对:肠道病毒通用型ev-u、肠道病毒71型、柯萨奇病毒a组16型和作为内参指标的人类18srrna基因,具体如表1所示;

表1扩增引物序列

2)rna恒温扩增中需要的三种酶:包含三种,逆转录酶、t7rna聚合酶和rnaseh;优选地,所述逆转录酶为amv或m-mlv;

3)细胞裂解液:购至美国signosis公司,货号cl-0001;

4)放大探针fdp:一种标有生物素的核酸序列,该探针可以和特异探针les系列的一端结合,具体序列(5’-3’)为:agaaggcgtccgtctttgaggc-biotin-acccgatggataggtcggtgaa-biotin-taagcatcgtgccctttcgcag-biotin-accacgttcgcgttctcacatg;

5)特异探针:每个指标特异探针有两种,分别为ces系列和les系列,其中ces系列和les系列又可以设计多条,具体探针序列如表2所示;

表2特异探针序列(5’-3’)

6)微孔板:每个微孔中包被包被探针,该包被探针可以和每个指标的ces系列探针一端序列互补配对结合,具体序列(5’-3’)为:acatacatacgtacag;

7)hrp-链霉亲和素酶联物:标记有链霉亲和素的hrp酶联物,该酶联物可以和放大探针上生物素结合;

8)配制杂交液、洗液a(5×)、洗液b(5×)、封闭液、底物稀释液,杂交液:含0.1%sds的5×ssc;洗液a(5×):含0.5%sds的5×ssc;洗液b(5×):含0.5%sds的5×pbs;封闭液:含0.5%bsa、1×pbs;底物稀释液:50mmph8.5tris-hcl;

9)底物:购至thermofisher,货号37075的鲁米诺化学发光底物,遇到hrp酶催化后能够产生化学发光信号,被仪器检测到。

2.权利要求1所述的试剂盒在制备肠道病毒通用型、柯萨奇病毒a组16型及肠道病毒71型检测试剂中的应用。

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