1.一种基于ddpcr及egfr热点突变检测人循环肿瘤细胞的引物组,其特征在于,其中所述egfr热点突变的位点包括l858r、19del和t790m,所述引物组包括:
检测egfr热点突变位点t790m的第一引物对,包括第一引物和第二引物,且所述第一引物的序列如seqidno.1所示,所述第二引物的序列如seqidno.2所示;
检测egfr热点突变位点19del的第二引物对,包括第三引物和第四引物,且所述第三引物的序列如seqidno.3所示,所述第四引物的序列如seqidno.4所示;
检测egfr热点突变位点l858r的第三引物对,包括第五引物和第六引物,且所述第五引物的序列如seqidno.5所示,所述第六引物的序列如seqidno.6所示。
2.一种基于ddpcr及egfr热点突变检测人循环肿瘤细胞的探针组,其特征在于,其中所述egfr热点突变的位点包括l858r、19del和t790m,所述探针组包括:
检测egfr热点突变位点t790m的第一探针,其序列如seqidno.7所示;
检测egfr热点突变位点19del的第二探针和第三探针,其序列分别如seqidno.8、seqidno.9所示;
检测egfr热点突变位点l858r的第四探针,其序列如seqidno.10所示。
3.一种基于ddpcr及egfr热点突变检测人循环肿瘤细胞的试剂盒,其特征在于包括至少一引物组和至少一探针组,其中一引物组为权利要求1所述的引物组,一探针组为权利要求2所述的探针组。
4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于还包括荧光标记基团cy3、fam、hex和cy5。
5.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于还包括pcr扩增检测的常规组件;优选的,所述pcr扩增检测的常规组件包括pcr反应用缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合液和dna聚合酶。
6.权利要求3-5中任一项所述的试剂盒于制备基于ddpcr检测人循环肿瘤细胞egfr热点突变的产品中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于,应用所述产品基于ddpcr检测人循环肿瘤细胞egfr热点突变的方法包括:
提供待检测的dna样本;
使所述待检测的dna样本与所述试剂盒的pcr扩增检测的常规组件混合,形成混合液;
采用数字pcr检测技术,利用所述试剂盒所包含的引物组与探针组对所述混合液进行pcr扩增;
对pcr扩增产物进行检测,判断dna样本是否包含突变的egfr基因。
8.根据权利要求7所述的用途,其特征在于:所述待检测的dna样本来源于受试者循环肿瘤细胞。
9.一种包含权利要求3-5中任一项所述的试剂盒的产品,所述产品应用于基于ddpcr检测人循环肿瘤细胞egfr热点突变的方法,所述方法包括:
提供待检测的dna样本;
使所述待检测的dna样本与所述试剂盒的pcr扩增检测的常规组件混合,形成混合液;
采用数字pcr检测技术,利用所述试剂盒所包含的引物组与探针组对所述混合液进行pcr扩增;
对pcr扩增产物进行检测,判断dna样本是否包含突变的egfr基因。
10.根据权利要求9所述的产品,其特征在于:所述待检测的dna样本来源于受试者循环肿瘤细胞。