1.一种来自属于节杆菌(arthrobacter)属的微生物的酮糖3-差向异构酶,其特征在于:
利用sds-page测得的分子量为36kda,具有下述(a)和(b)的底物特异性,
(a)具有使d-或l-酮糖的3位差向异构化并生成对应的d-或l-酮糖的活性,
(b)在d-或l-己酮糖中对于d-阿卢糖的3位的差向异构化活性最高。
2.如权利要求1所述的酮糖3-差向异构酶,其特征在于:
具有下述(c)和(d)的物理化学性质,
(c)反应最佳ph为6~8,
(d)反应最佳温度为60℃。
3.如权利要求1或2所述的酮糖3-差向异构酶,其特征在于:
底物特异性的顺序为d-阿卢糖、d-塔格糖、l-塔格糖、d-果糖、l-阿卢糖。
4.如权利要求1~3中任一项所述的酮糖3-差向异构酶,其特征在于:
属于节杆菌属的微生物为噬组氨醇节杆菌(arthrobacterhistidinolovorans)。
5.如权利要求1~4中任一项所述的酮糖3-差向异构酶,其特征在于:
属于节杆菌属的微生物为在国际专利生物保藏中心以保藏编号nitebp-02813保藏的噬组氨醇节杆菌y586-1株。
6.一种蛋白质,其为以下(a)或(b)所述的蛋白质:
(a)包含序列编号1所示的氨基酸序列的蛋白质,
(b)包含与序列编号1所示的氨基酸序列具有70%以上同一性的氨基酸序列的、具有下述(a)和(b)的酮糖3-差向异构酶活性、且在反应温度为70℃和50℃中的酮糖3-差向异构酶活性的比(t70/t50)为1.55以上的蛋白质,
(a)具有使d-或l-酮糖的3位差向异构化并生成对应的d-或l-酮糖的活性,
(b)在d-或l-己酮糖中对于d-阿卢糖的3位的差向异构化活性最高。
7.一种蛋白质,其为以下(a)或(b)所述的蛋白质:
(a)包含序列编号1所示的氨基酸序列的蛋白质,
(b)包含与序列编号1所示的氨基酸序列具有70%以上同一性的氨基酸序列的、具有下述(a)和(b)的酮糖3-差向异构酶活性,且在60℃保温1小时后的残留活性为31%以上的蛋白质,
(a)具有使d-或l-酮糖的3位差向异构化并生成对应的d-或l-酮糖的活性,
(b)在d-或l-己酮糖中对于d-阿卢糖的3位的差向异构化活性最高。
8.一种蛋白质,其特征在于:
其为由包含序列编号1所示的氨基酸序列的蛋白质的氨基酸取代突变体构成的蛋白质,所述突变体在序列编号1所示的氨基酸序列中选自h56、t59、a60、p77、l94、l97、d101、a109、a128、v129、v132、s144、s167、p172、e199、a200、k202、s218中的至少1个部位具有氨基酸取代,具有下述(a)和(b)的酮糖3-差向异构酶活性,并且,与包含序列编号1所示的氨基酸序列的蛋白质相比,在反应温度70℃和50℃的酮糖3-差向异构酶活性的比(t70/t50)更高,或者在60℃保温1小时后的残留活性更高,
(a)具有使d-或l-酮糖的3位差向异构化并生成对应的d-或l-酮糖的活性,
(b)在d-或l-己酮糖中对于d-阿卢糖的3位的差向异构化活性最高。
9.编码权利要求6~8中任一项所述的蛋白质的dna。
10.一种dna,其特征在于:
包含序列编号2所示的碱基序列或与其互补的序列。
11.如权利要求9所述的dna,其特征在于:
为下述(a)~(c)中任一项所述的dna:
(a)由包含序列编号2所示的碱基序列或与其互补的序列的一部分或全部序列构成的dna,
(b)与由序列编号2所示的碱基序列构成的dna的互补链在严格条件下杂交的dna,和
(c)与由序列编号2所示的碱基序列构成的dna具有70%以上的序列同一性的dna。
12.含有权利要求9~11中任一项所述的dna的重组载体。
13.利用权利要求12所述的重组载体转化得到的转化宿主细胞。
14.一种噬组氨醇节杆菌,其特征在于:
其为在国际专利生物保藏中心以保藏编号nitebp-02813保藏的噬组氨醇节杆菌y586-1株,生产权利要求1~3中任一项所述的酮糖3-差向异构酶。
15.一种固定化酶,其特征在于:
在载体上固定有权利要求1~5中任一项所述的酮糖3-差向异构酶。
16.一种固定化酶,其特征在于:
在载体上固定有酮糖3-差向异构酶粗酶,所述酮糖3-差向异构酶粗酶为存在于生产权利要求1~5中任一项所述的酮糖3-差向异构酶的节杆菌属微生物的菌体破碎物中的酮糖3-差向异构酶粗酶。
17.如权利要求15或16所述的固定化酶,其特征在于:
所述载体为离子交换树脂、有机高分子载体和/或无机载体。
18.一种固定化蛋白质,其特征在于:
在载体上固定有权利要求6~8中任一项所述的蛋白质。
19.如权利要求18所述的固定化蛋白质,其特征在于:
所述载体为离子交换树脂、有机高分子载体和/或无机载体。
20.一种酮糖3-差向异构酶的制造方法,其特征在于:
将生产权利要求1~5中任一项所述的酮糖3-差向异构酶的节杆菌属微生物在培养基中进行培养,在微生物菌体中蓄积该酮糖3-差向异构酶,收集该酮糖3-差向异构酶。
21.如权利要求20所述的酮糖3-差向异构酶的制造方法,其特征在于:
所述培养基为添加有d-阿卢糖的无机盐培养基。
22.一种具有酮糖3-差向异构酶活性的蛋白质的制造方法,其特征在于:
将权利要求13所述的转化宿主细胞在培养基中进行培养,从培养物中收集具有酮糖3-差向异构酶活性的蛋白质。
23.一种酮糖的制造方法,其特征在于:
在含有选自d-或l-酮糖中的1种以上的溶液中,使权利要求1~5中任一项所述的酮糖3-差向异构酶、权利要求6~8中任一项所述的蛋白质、权利要求15~17中任一项所述的固定化酶、或权利要求18或19所述的固定化蛋白质发生作用,使该酮糖的3位发生差向异构化,生成对应的酮糖并将其收集。