岩藻糖基化寡糖LNFP-V的合成的制作方法

文档序号:26003811发布日期:2021-07-23 21:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种能够从乳糖产生lnfp-v的重组微生物,优选细菌细胞,更优选大肠杆菌,其包含:

-基因组整合的异源核酸序列,其编码具有β1,3-n-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的多肽,

-基因组整合的异源核酸序列,其编码具有β1,3-半乳糖基转移酶活性的多肽,和

-基因组整合的异源核酸序列,其编码具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽,

其中所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽选自:

-多肽,其包含与seqidno.1的氨基酸序列具有至少90%的序列同一性的氨基酸序列或由其组成,和

-多肽,其包含与seqidno.3的氨基酸序列具有至少90%的序列同一性的氨基酸序列或由其组成。

2.根据权利要求1所述的微生物,其中所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽选自:

-蛋白质,其包含由seqidno.1表征的氨基酸序列,优选由其组成,

-蛋白质,其包含由seqidno.3表征的氨基酸序列,优选由其组成,

-蛋白质,其包含由seqidno.4表征的氨基酸序列,优选由其组成,和

-蛋白质,其包含由seqidno.7表征的氨基酸序列,优选由其组成。

3.根据权利要求1所述的微生物,其中所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽是一种蛋白质,其包含由seqidno.7表征的氨基酸序列,优选由其组成。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的微生物,其包含功能性gdp-岩藻糖生物合成途径。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的微生物,其中所述β1,3-n-乙酰氨基葡萄糖转移酶由脑膜炎奈瑟氏球菌053442的igta基因或其密码子优化版本编码,和/或所述β1,3-半乳糖基转移酶是由seqidno.6表征的蛋白质。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的微生物,其中所述异源核酸序列在根据seqidno.5的glp启动子变体的控制下表达。

7.根据权利要求6所述的微生物,其中所述glp启动子是glpf或其根据seqidno.5的变体。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的微生物,其中每个异源核酸序列以单个拷贝整合到所述微生物的基因组中。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的微生物,其中所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽是一种蛋白质,所述蛋白质包含由seqidno.7表征的氨基酸序列,优选由其组成,并且其编码核酸序列以至少两个拷贝整合到所述微生物的基因组中,以及其中所述β1,3-半乳糖基转移酶是由seqidno.6表征的蛋白质,并且其编码核酸序列以至少两个拷贝整合到所述微生物的基因组中。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的微生物,其中至少一个、优选每个异源核酸序列整合到与糖代谢有关的操纵子的位点中。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的微生物,其中所述gdp-岩藻糖生物合成途径包含在lac启动子的控制下表达的重组mana、manb、manc、gmd和wcag基因。

12.根据权利要求11所述的微生物,其中在glp启动子,优选glpf或其根据seqidno.5的变体的控制下,参与所述gdp-岩藻糖生物合成途径的基因的额外拷贝整合到所述微生物的基因组中。

13.根据权利要求12所述的微生物,其中所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽是一种蛋白质,所述蛋白质包含由seqidno.7表征的氨基酸序列,优选由其组成,并且其编码核酸序列以单个拷贝整合到所述微生物的基因组中。

14.一种在重组微生物中生产lnfp-v的方法,所述方法包括:

a)提供根据权利要求1-13中任一项所述的遗传修饰的微生物,

b)在乳糖存在下培养所述微生物,和

c)从所述微生物、从培养基或从两者分离lnfp-v。

15.一种蛋白质,其包含由seqidno.7表征的氨基酸序列或由其组成。

16.具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽在生产lnfp-v中的用途,所述多肽选自:

-多肽,其包含与seqidno.1的氨基酸序列具有至少90%的序列同一性的氨基酸序列或由其组成,和

-多肽,其包含与seqidno.3的氨基酸序列具有至少90%的序列同一性的氨基酸序列或由其组成。

17.根据权利要求16所述的用途,其中所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽选自:

-蛋白质,其包含由seqidno.1表征的氨基酸序列,优选由其组成,

-蛋白质,其包含由seqidno.3表征的氨基酸序列,优选由其组成,

-蛋白质,其包含由seqidno.4表征的氨基酸序列,优选由其组成,和

-蛋白质,其包含由seqidno.7表征的氨基酸序列,优选由其组成。

18.根据权利要求16所述的用途,其中所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽是一种蛋白质,所述蛋白质包含由seqidno.7表征的氨基酸序列,优选由其组成。

19.根据权利要求16-18中任一项所述的用途,其中编码所述具有α1,3/4-岩藻糖基转移酶活性的多肽的核酸序列包含在能够从乳糖生产lnfp-v的微生物,优选细菌细胞,更优选大肠杆菌中。

20.根据权利要求19所述的用途,其中所述微生物在权利要求1-13的任一项中定义。


技术总结
本发明提供了一种通过使用重组细菌细胞生物技术生产LNFP‑V的方法。LNFP‑V通过使用具有α1,3/4‑岩藻糖基转移酶活性的多肽来生产,该多肽包含与SEQ ID No.1或3的氨基酸序列具有至少90%的序列同一性的氨基酸序列或由其组成。

技术研发人员:M·帕帕扎基斯;M·彼得森
受保护的技术使用者:格礼卡姆股份公司
技术研发日:2019.12.04
技术公布日:2021.07.23
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