修饰型菊酸酯酶的制作方法

文档序号:26003729发布日期:2021-07-23 21:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种修饰型酯酶,具有在序列号1的氨基酸序列中包含以下的(1)~(23)中的任一个氨基酸取代的氨基酸序列或与该氨基酸序列显示90%以上同源性的氨基酸序列,与由序列号1的氨基酸序列构成的酯酶相比,对(1r,3s)-菊酸乙酯的反应性提高,其中,所述与该氨基酸序列显示90%以上同源性的氨基酸序列在所述氨基酸取代的位置以外的部分产生氨基酸序列的差异,

(1)变异点为f58,取代后的氨基酸为e、i、c、a、m或y,

(2)变异点为d227,取代后的氨基酸为i、s、a、w、h、g、f或v,

(3)变异点为i228,取代后的氨基酸为y、s、t或w,

(4)变异点为l229,取代后的氨基酸为y、f或v,

(5)变异点为l231,取代后的氨基酸为m、a或g,

(6)变异点为s244,取代后的氨基酸为f,

(7)变异点为a245,取代后的氨基酸为n或g,

(8)变异点为v297,取代后的氨基酸为r、w、q、a或i,

(9)变异点为f298,取代后的氨基酸为s,

(10)变异点为a328,取代后的氨基酸为n,

(11)变异点为a328,取代后的氨基酸为g,

(12)变异点为a328和f58,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点f58的取代后的氨基酸为l或e,

(13)变异点为a328和l151,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点l151的取代后的氨基酸为q、r、h、w、a、v、m、n、c、t或i,

(14)变异点为a328和f217,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点f217的取代后的氨基酸为w、g、a、d、t、r、e、v或y,

(15)变异点为a328和s220,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点s220的取代后的氨基酸为q、l、n或g,

(16)变异点为a328和a221,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点a221的取代后的氨基酸为f、m、l、v、e、r、g或s,

(17)变异点为a328和d227,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点d227的取代后的氨基酸为e或c,

(18)变异点为a328和i228,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点i228的取代后的氨基酸为l或g,

(19)变异点为a328和l229,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点l229的取代后的氨基酸为r、v、i或h,

(20)变异点为a328和v297,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点v297的取代后的氨基酸为c或l,

(21)变异点为a328、a221和d326,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点a221的取代后的氨基酸为f、变异点d326的取代后的氨基酸为v,

(22)变异点为a328、a221、d326和f298,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点a221的取代后的氨基酸为f、变异点d326的取代后的氨基酸为v、变异点f298的取代后的氨基酸为l,

(23)变异点为a328、a221、d326、f298和n222,变异点a328的取代后的氨基酸为g、变异点a221的取代后的氨基酸为f、变异点d326的取代后的氨基酸为v、变异点f298的取代后的氨基酸为l、变异点n222的取代后的氨基酸为d。

2.根据权利要求1所述的修饰型酯酶,其中,(1)的取代后的氨基酸为e、i、c、a或m,

(2)的取代后的氨基酸为i、s、a、w、h或g,

(3)的取代后的氨基酸为y或s,

(4)的取代后的氨基酸为y或f,

(5)的取代后的氨基酸为m或a,

(8)的取代后的氨基酸为r、w或q,

(12)的变异点f58的取代后的氨基酸为l,

(13)的变异点l151的取代后的氨基酸为q或r,

(14)的变异点f217的取代后的氨基酸为w、g、a、d、t、r或e,

(15)的变异点s220的取代后的氨基酸为q或l,

(16)的变异点a221的取代后的氨基酸为f、m、l、v、e、r或g,(19)的变异点l229的取代后的氨基酸为r、v或i。

3.根据权利要求1所述的修饰型酯酶,其中,(4)的取代后的氨基酸为y,

(5)的取代后的氨基酸为m,

(8)的取代后的氨基酸为r或w,

(13)的变异点l151的取代后的氨基酸为q,

(14)的变异点f217的取代后的氨基酸为w、g、a、d或t,

(16)的变异点a221的取代后的氨基酸为f、m、l、v、e或r。

4.根据权利要求1所述的修饰型酯酶,其中,氨基酸取代为(11)~(23)中的任一个,对(1r,3s)-菊酸乙酯的选择性提高。

5.根据权利要求4所述的修饰型酯酶,其中,氨基酸取代为a328g、a328g/f217w、a328g/a221m、a328g/a221l、a328g/a221v或a328g/i228l。

6.根据权利要求4所述的修饰型酯酶,其中,氨基酸取代为a328g/a221f,特异性地作用于(1r,3s)-菊酸乙酯。

7.根据权利要求4所述的修饰型酯酶,其中,氨基酸取代为a328g/a221f/d326v。

8.根据权利要求4所述的修饰型酯酶,其中,氨基酸取代为a328g/a221f/d326v/f298l。

9.根据权利要求4所述的修饰型酯酶,其中,氨基酸取代为a328g/a221f/d326v/f298l/n222d。

10.根据权利要求1~9中任一项所述的修饰型酯酶,其中,所述同源性为95%以上。

11.根据权利要求1所述的修饰型酯酶,由序列号2~11中的任一氨基酸序列构成。

12.一种基因,编码权利要求1~11中任一项所述的修饰型酯酶。

13.根据权利要求12所述的基因,其中,包含序列号13~22中的任一碱基序列。

14.一种重组dna,包含权利要求12或13所述的基因。

15.一种微生物,保有权利要求14所述的重组dna。

16.一种酶剂,包含权利要求1~11中任一项所述的修饰型酯酶。

17.一种修饰型酯酶的制备方法,包括以下的步骤(i)~(iii):

(i)准备编码权利要求1~11中任一项的修饰型酯酶的氨基酸序列的核酸的步骤,

(ii)使所述核酸表达的步骤,以及

(iii)回收表达产物的步骤。

18.根据权利要求17所述的制备方法,其中,所述氨基酸序列为序列号2~11中的任一氨基酸序列。

19.根据权利要求17所述的制备方法,其中,所述核酸包含序列号13~22中的任一碱基序列。

20.一种(1r,3s)-菊酸的制造方法,其特征在于,使权利要求1~11中任一项的修饰型酯酶作用于(1r,3s)-菊酸乙酯。

21.根据权利要求20所述的制造方法,其中,(1r,3s)-菊酸乙酯为与(1r,3r)-菊酸乙酯、(1s,3s)-菊酸乙酯和(1s,3r)-菊酸乙酯共存的状态。


技术总结
本发明的课题在于提供对于(1R,3S)‑菊酸的制造有用的酯酶。在来自节杆菌属微生物的酯酶中,公开了对提高反应性有效的多个氨基酸取代,所述反应性是对(1R,3S)‑菊酸乙酯的反应性。

技术研发人员:大野笃;吉田和典
受保护的技术使用者:天野酶制品株式会社
技术研发日:2019.11.29
技术公布日:2021.07.23
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