全谷物膳食下脂质合成能力的miRNA标志物的制作方法

本发明涉及全谷物膳食下脂质合成能力的mirna标志物，尤其是全谷物膳食下脂质合成能力的血清或血浆mirna标志物，属于生物医药与食品营养和健康领域。
背景技术：
：长期以来，超重和肥胖作为世界范围的流行性疾病，一直是人们广泛关注的健康问题，且近年来逐步呈现出年轻化趋势—儿童和青少年超重或肥胖的患病率逐年增加。此外，超重和肥胖还会引起一系列包括糖尿病和心血管疾病在内的代谢性疾病，严重威胁人类的健康。由于其作用机制复杂，控制体内脂质代谢平衡对于人类的健康十分重要。现有的检测人体脂质代谢情况的方法，主要是是检测血液中的血脂含量，例如检测血液中的胆固醇、甘油三酯的含量。但是，这种方法往往存在一定的滞后性。通常是在人体的脂质代谢能力已经出现异常、体内已经积累偏高量的脂质后，才能体现到血检结果中。micrornas(mirnas)作为内源性的调节性非编码微小rna，其可以通过碱基互补配对的原则与靶基因的3'utr调控位点结合，从而阻断靶基因的转录，抑制蛋白质的翻译，促使蛋白合成下降。mirnas存在于血液循环中，有报道称，脂肪来源的mirnas可以调节机体不同组织中的基因表达，从而成为新的脂肪调控因子。我们日常摄入的主食，多由加工过的精米、精面制成。全谷物指的是完整的谷物种子或籽粒，包含麸皮、胚芽和胚乳三个部分。全谷物膳食是指以全糙米或全麦为主的饮食模式，例如，全糙米粉或全麦粉所占质量比为40％-60％。目前，全谷物膳食已被证明是一种有效且健康的改善脂质代谢的膳食模式。与非全谷物或精制谷物相比，全谷物食品并未经历大刀阔斧的加工环节，保留了富含膳食纤维、矿物质、维生素和其他植物素的胚芽和麸皮，因此具有更高的营养价值。越来越多的证据表明，食用全谷物可以降低超重或肥胖的风险。在随机交叉试验和动物实验研究中，全谷物饮食能够显著地控制体重，降低血脂以及肝脏脂质的沉积。并且，随着全球肥胖患病率的迅速增加，在欧美及亚洲在内的国家居民饮食指南中，建议增加全谷物的摄入。然而，目前还没有完善的评价体系来评估全谷物膳食的功能特性，也没有相应的生物标志物来指示全谷物膳食对脂质代谢的调控。技术实现要素：[技术问题]现有技术中缺少能够用于检测或诊断脂质合成能力的micrornas。[技术方案]本发明提供了一种可用于检测或诊断机体的脂质合成能力的血清或血浆microrna标志物mir-27a-3p。这种新的血清或血浆microrna标志物，能够用于快速反应机体的脂质合成情况。也能够用于检测判断市场上的全谷物膳食是否是对机体脂质合成具有调控能力。所述机体包括：人、鼠、猩猩等。所述脂质合成能力是指：肝脏和肠道中胆固醇和甘油三酯的合成水平及积累水平。所述可用于检测或诊断机体的脂质合成能力的血清或血浆mirna选自：(1)序列如seqidno.:1所示的mirna；(2)与(1)中所示mirna序列互补的mirna；(3)含有(1)或(2)中序列片段的mirna。本发明提供了应用所述microrna标志物检测或诊断机体的脂质合成能力的方法，包括如下步骤：(a)检测研究样本血清中microrna标志物(mir-27a)的表达水平；(b)如果，所测样本中microrna标志物表达水平显著高于正常样本血清中的表达水平，则判定该样本所述机体的脂质合成能力较高；如果，所测样本中microrna标志物表达水平显著高于正常样本血清中的表达水平，则判定该样本所述机体的脂质合成能力较低。所述“显著”是指p<0.05。所述正常样本可以是不食用全谷物食品或者全谷物摄入量占比比较低的膳食模式下的样本。所述正常样本血清中的表达水平也可以是基于大数据统计得到的健康人群的血清中的表达水平。本发明提供了所述microrna标志物在开发用于治疗肥胖等相关疾病的药物中的应用，mir-27a-3p可以作为靶向药物的靶点。本发明还提供了用于检测机体的脂质代谢能力的芯片或试剂盒，含有microrna芯片，所述microrna芯片包括固相载体，以及有序固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性检测seqidno.:1所示的序列。所述寡核苷酸探针含有互补结合区、与固相载体相连的连接区。在另一优选例中，所述的mirna分离自小鼠。人、鼠均具有该mirna序列，且属于保守型mirna。本发明提供的可用于检测或诊断机体的脂质代谢能力的血清或血浆mirna，还可以用于一种评估全谷物膳食改善脂质代谢的方法，所述全谷物膳食是指以全糙米或全麦为主的饮食模式，例如，全糙米粉或全麦粉所占质量比为40％-60％，所述方法包括步骤：(a)提供一测试组和一对照组，其中在所述测试组中将全谷物膳食施用于测试组的动物，并测定施用后所述测试组血清中mir-27a的表达水平，而所述的对照组采用与测试组相同的条件，但不将全谷物膳食施用于对照组的动物；(b)将测试组血清中的mir-27a与对照组血清中的mir-27a的表达水平进行比较；当测试组血清中的mir-27a的表达水平显著低于对照组的表达水平时，则表明全谷物膳食改善了机体的脂质代谢。类似地，mir-27a-3p可以用于指示机体食用全谷物膳食后肝脏甘油三酯、胆固醇的水平含量、评估机体食用全谷物膳食后肝脏脂肪合成情况、评估机体食用全谷物膳食后肝脏脂肪堆积情况、评估机体食用全谷物膳食后肠道脂肪合成情况、判断机体是否食用全谷物膳食。本发明还提供了一种用于评估全谷物膳食改善脂质代谢的试剂盒，包括：用于抽提血清mirna的试剂、用于rna反转录的试剂、用于实时定量pcr检测seqidno:1所示的mirna含量的试剂。所述全谷物膳食是指以全糙米或全麦为主的饮食模式。可选的，用于反转录seqidno:1所示序列的引物如seqidno：2所示。可选的，用于pcr扩增seqidno:1所示序列的引物如seqidno：3、seqidno：4所示。[有益效果]本发明提供的机体脂质合成能力标志物—mir-27a，相比于血液中的甘油三酯、胆固醇，mir-27a能够更早地发现机体脂质合成能力的变化。当待测血液样本中的mir-27a的含量高于正常样本时，提示待测血液样本所述机体的脂质合成能力较高；当待测血液样本中的mir-27a的含量低于正常样本时，提示待测血液样本所述机体的脂质合成能力较低。本发明提供的机体脂质合成能力标志物—mir-27a，可以用于评价市面上的“全谷物”膳食是否真的是全谷物的。如果，与食用常规膳食的小鼠相比，食用“全谷物”膳食的小鼠的血液样本中的mir-27a的含量下降，则说明，该“全谷物”膳食确实是能够调控机体脂质合成的、全谷物的膳食。本发明提供的机体脂质合成能力标志物—mir-27a，还可以作为开发用于治疗肥胖等相关疾病的药物，作为靶向药物的靶点。附图说明通过参照以下附图，本发明的特征、目的和优点将会变得更明显。图1全谷物膳食干预中小鼠血清、肝脏甘油三酯、胆固醇的变化。(a)血清中甘油三酯的变化；(b)血清中胆固醇的变化；(c)肝脏中甘油三酯的变化；(d)肝脏中胆固醇的变化；cs:玉米淀粉组；br:糙米组；ww:全麦组。图2全谷物膳食干预中小鼠肝脏中脂肪堆积的变化。(a)he染色；(b)油红o染色。cs:玉米淀粉组；br:糙米组；ww:全麦组。图3全谷物膳食干预中小鼠肝脏中脂肪合成的变化。(a)hmgcr、fasn的mrna表达变化；(b)hmgcr、fasn的蛋白表达变化及定量分析。cs:玉米淀粉组；br:糙米组；ww:全麦组。图4全谷物膳食干预中小鼠肠道中脂肪合成的变化。(a)hmgcr、fasn的mrna表达变化；(b)hmgcr、fasn的蛋白表达变化及定量分析。cs:玉米淀粉组；br:糙米组；ww:全麦组。图5全谷物膳食干预中小鼠组织器官中mir-27a-3p的变化。(a)血清中mir-27a-3p的变化；(b)白色脂肪中mir-27a-3p的变化；(c)肝脏中mir-27a-3p的变化；(d)肠道中mir-27a-3p的变化；(e)褐色脂肪中mir-27a-3p的变化；(f)骨骼肌中mir-27a-3p的变化。cs:玉米淀粉组；br:糙米组；ww:全麦组。图6mir-27a-3p通过靶向hmgcr和fasn抑制肝脏、肠道脂质的合成。(a)mir-27a-3p与hmgcr3'-utr序列比对；(b)mir-27a-3p抑制含有hmgcr3’-utr的报告基因的活性；(c)mir-27a-3p与fasn3'utr序列比对；(d)mir-27a-3p抑制含有fasn3’-utr的报告基因的活性。cs:玉米淀粉组；br:糙米组；ww:全麦组。图7血清中甘油三脂、胆固醇以及mir-27a-3p在全谷物膳食干预不同时间点下的变化。(a)全谷物膳食干预2周时，血清中甘油三脂、胆固醇以及mir-27a-3p的变化；(b)全谷物膳食干预4周时，血清中甘油三脂、胆固醇以及mir-27a-3p的变化；(c)全谷物膳食干预8周时，血清中甘油三脂、胆固醇以及mir-27a-3p的变化。cs:玉米淀粉组；br:糙米组；ww:全麦组。图8mir-27a-3p在高血脂小鼠血清中的表达。(a)高脂饮食小鼠血清中甘油三酯水平变化；(b)高脂饮食小鼠血清中胆固醇水平变化；(c)高脂饮食小鼠血清中mir-27a-3p水平变化；(d)正常饮食ob/ob小鼠血清中甘油三酯水平变化；(e)正常饮食ob/ob小鼠血清中胆固醇水平变化；(f)正常饮食ob/ob小鼠血清中mir-27a-3p水平变化。具体实施方式实验材料与方法(1)小鼠全谷物膳食配方表1膳食配方注：本全谷物膳食配方参考美国营养学会ain-93标准饲料进行制作。糙米组、全麦组是全谷物膳食组，玉米淀粉组是对照组(即正常样本)。(2)血清样品收集与指标的检测实验中所用的c57bl/6小鼠购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，此研究经过江南大学动物伦理委员会审核通过。小鼠在三种不同膳食模式干预下饲养8周，然后采集血清、组织进行指标检测。利用日本wako公司甘油三酯、胆固醇试剂盒检测血清、肝脏中甘油三酯和胆固醇的含量。(3)肝脏he染色和油红o染色(a)肝脏he染色固定：将新鲜的肝脏浸泡在4％中性甲醛固定液中进行固定，一般固定24h以上。脱水：将肝脏分别装入已标记的包埋盒中，依次置于75％乙醇i、ii，85％乙醇i、ii，95％乙醇i、ii，100％乙醇i、ii中进行梯度脱水，各1h/次。透明：将脱水完成的肝脏依次置于二甲苯i、ii中，使肝脏中的乙醇能被二甲苯充分置换出来，以保证石蜡浸透肝脏，各1h/次。浸蜡：分别准备三份熔点在50～60℃之间的固体石蜡，将其置于60℃烘箱中进行融化，然后将已透明处理的肝脏依次置于融化的石蜡i、ii、iii中浸渗，各1h/次。包埋：将融化的石蜡滴入到包埋模具至模具底部铺满石蜡，用加热后的镊子将待包埋的肝脏固定在包埋模具底部，然后迅速将包埋盒盖在包埋模具上，用石蜡溶液淹没肝脏至包埋盒内气体全部排出。待石蜡溶液略微凝固后，慢慢将其移至冰台使其凝固。待石蜡溶液完全凝固后，将嵌有肝脏的包埋盒取下，置于-20℃冰箱中备用。切片：将嵌有肝脏的包埋盒固定在石蜡切片机上，先将嵌有样本的蜡块进行粗切，直至刀片切到肝脏为止。然后将切片机厚度量程调至3μm，进行细切。取出完好的样本石蜡切片，用镊子将其平置于37℃水面上，待样本切片完全展平后，即可进行分片和捞片。烤片：挑选完全展开的样本切片，用做好标记的载玻片将其捞起，置于烘片机上进行烤片，使载玻片上的水分完全蒸发，烤片温度40～50℃，烤片结束后将样本切片置于室温下保存，待肝脏组织形态学检测分析。脱蜡透明：将肝脏切片依次置于二甲苯i、ii中进行脱蜡，每次3min。然后经高浓度到低浓度乙醇(100％、90％、80％)将二甲苯置换完全，每次2min，最后置于蒸馏水中备用染色。h&e染色：将已脱蜡完全的切片置于苏木素染色液中染色20s，具体染色时间根据预实验时镜下观察的染色程度调整。染完苏木素后，用蒸馏水洗去切片上多余的染色剂，以同样的方式进行伊红染色。脱水透明：将染色后的片子快速经低浓度到高浓度乙醇(80％、90％、100％)进行梯度脱水，最后经二甲苯i、ii使切片透明，每个染色缸脱水5sec。封片：待切片干燥后，将中性树脂滴在载玻片上，用盖玻片从一侧轻轻封片。待完全干燥后，即可在显微镜下观察拍照。(b)肝脏油红o染色将新鲜肝脏用oct包埋剂包埋后至于液氮内急速冷冻，然后进行切片、烤片，最后进行油红o染色。染色流程：切片用甲醛―钙固定5分钟；蒸馏水洗；60％异丙醇浸洗；油红o染液5分钟；60％异丙醇分色至背景无色；蒸馏水洗；苏木精复染；自来水洗(蓝化)1～3分钟；蒸馏水洗；封片。结果：组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。(4)rna的抽提与实时定量pcr检测血清mirna通过上海碧云天公司的血清mirna抽提试剂盒抽提。rna反转录通过颈环结构的反转方法转录，其他组织中的rna利用常规trizol试剂进行提取，rna反转录采用takara常规反转录酶进行转录。最后通过实时定量pcr检测血清及其他组织中mirna及其他mrna的表达变化。(5)组织蛋白质的提取与westernblot分析组织中的蛋白利用上海碧云天公司的ripa进行提取，利用bca试剂盒进行蛋白浓度检测，hmgcr、fasn相关抗体分别购于武汉三鹰生物技术有限公司和cellsignalingtechnology公司，利用westernblot技术分析小鼠肝脏、肠道中hmgcr、fasn的蛋白表达。(6)统计方法比较两组实验组的差异分析通过t-test分析，p值小于0.05的被认为具有显著变化。实施例1血清标志物筛选(1)血清mirna的选择从血清mirna表达谱芯片筛选出在全谷物膳食干预中有显著差异的mirnas，通过mirnas相关数据库及在线数据分析软件等分析参与脂质代谢的mirnas，筛选出mirna为mir-27a-3p。(2)血清mirna的抽提将收集的血浆4℃静置30分钟，然后4℃，4000×rpm离心15min取血清，-80℃保存备用。血清中mirna的抽提利用碧云天公司的rnaeasytm动物rna抽提试剂盒(离心柱式)进行提取，具体步骤如下：a.样品处理：在200μl血清中加入200μl裂解液进行裂解。b.加入等体积结合液至离心管中，轻轻颠倒混匀3-5次。室温放置5min，使得核酸蛋白复合物完全分离。c.4℃14,000g离心2分钟，将上清液移至新的rnase离心管中。d.将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内，12,000g离心30秒，倒弃收集管内液体。e.加入600μl洗涤液i，12,000g离心30秒，倒弃收集管内液体。f.加入600μl洗涤液ii，12,000g离心30秒，倒弃收集管内液体。g.重复步骤f一次。h.最高速(约14,000-16,000g)离心2分钟，去除残留的液体。i.将rna纯化柱置于本试剂盒提供的rna洗脱管中，加入30-50μl洗脱液，室温放置2-3分钟，最高速离心30秒，所得溶液即为纯化的rna。-80℃保存备用。(3)qrt-pcr检测a.反转录本实验中mirna反转录使用的是stem-loop反转录体系。从mirbase：http://www.mirbase.org/index.shtml中查找出序列如下：mir-27a-3p：uucacaguggcuaaguuccgc，然后设计此mirna的反转录引物和通用pcr引物以及hmgcr和fasn引物序列如下表所示，u6与gapdh为内参。mir-27a反转录引物序列：ctcaactggtgtcgtggagtcggcaattcagttgaggcggaact(seqidno.2)；mir-27a正向引物序列(5’-3’)：acactccagctgggttcacagtggcta(seqidno.3)；mir-27a反向引物序列(5’-3’)：ctcaagtgtcgtggagtcggcaa(seqidno.4)。表2引物序列配制pcr反应体系:rt-pcr反应程序:142℃15min242℃1min342℃0min反转录完成后，将cdna稀释10倍，混匀，保存在-20℃备用。b.real-timepcr相对定量中血清mirna所使用的内参为u6。反应体系及程序:实施例2肝脏、肠道脂质合成相关蛋白的表达检测将小鼠在三种不同膳食模式(cs、br、ww)干预下饲养8周，然后采集血清、组织进行指标检测。利用日本wako公司甘油三酯、胆固醇试剂盒检测血清、肝脏中甘油三酯和胆固醇的含量。(1)肝脏及肠道组织蛋白的提取：收集细胞或一定量的小鼠肝脏组织在含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的ripa裂解液中裂解或匀浆。冰上放置30分钟，14,000rpm，4℃离心20分钟，收集上清溶液即为组织的总蛋白质；ripa裂解液：50mmtris-hcl，ph＝7.4；150mmnacl；1mmedta；1％tritonx-100；蛋白酶抑制剂；磷酸酶抑制剂。(2)制样：用bca试剂盒测定蛋白浓度后，将蛋白调整至同样浓度。加入上样缓冲液，并于100℃煮5分钟，可存放于-80℃或上样电泳；(3)电泳：配置10％的sds聚丙烯酰胺凝胶，以每个样本40μg-80μg的蛋白量上样。140v恒压电泳，至前端溴酚蓝跑出胶底部；(4)转膜：pvdf膜用甲醇浸泡1分钟后，然后和胶一起放在转膜液中平衡5分钟，然后按照阳极-海绵-两层滤纸-pvdf膜-胶-两层滤纸-海绵-阴极的顺序安放好，放到湿转转膜仪中，将转膜仪包埋于冰中，300ma转膜3小时；(5)封闭：取出pvdf膜，放入丽春红染液中染色，然后用去离子水洗掉多余染料，观察蛋白转膜效果，并按相应位置剪膜。5％脱脂牛奶封闭1小时；(6)一抗：加入用5％bsa合适比例稀释的抗体，4℃水平摇床摇过夜；(7)洗膜：回收抗体，将膜用tbst洗3次，每次5分钟；(8)二抗：加入5％脱脂牛奶稀释的相应二抗(1:3000)室温孵育1小时；(9)洗膜：去掉二抗，将膜用tbst洗3次，每次5分钟；(10)利用蛋白凝胶成像系统进行拍照保存。注：此环节选用hmgcr、fasn和gapdh的一抗抗体，gapdh作为内参。实验结果1.全谷物膳食降低小鼠血清、肝脏中甘油三酯和胆固醇的水平含量收集不同膳食模式的小鼠的血清、肝脏样本，并利用试剂盒检测其中的甘油三酯和胆固醇含量。如图1、表3所示，与cs组相比，血清中甘油三酯(图1(a))、胆固醇(图1(b))在br和ww组中的水平含量显著降低，分别降低了29.0％、21.5％和11.7％、22.2％。与此同时，肝脏中甘油三酯(图1(c))、胆固醇(图1(d))在br和ww组中的水平含量也是显著降低的，分别降低了24.5％、23.2％和18.3％、20.4％。表3全谷物膳食对小鼠血清及肝脏中甘油三酯、胆固醇的影响2.全谷物膳食降低小鼠肝脏中脂质的积累收集了不同膳食组的小鼠的肝脏样本，通过对其进行he染色、油红o染色观察到在全谷物膳食干预下肝脏的组织形态学发现，cs组视野内有大量脂肪液泡和脂滴分散，br组和ww组反而较少(图2(a))。油红o染色进一步证实了这一结果。与cs组比较，br组和ww组油红o染色的红色区域均明显缩小(图2(b))。这些直观的结果显示全谷物膳食与脂质代谢有关，并且能够改善肝脏脂质沉积。3.全谷物膳食减少了小鼠肝脏、肠道中脂肪的合成肝脏和肠道是甘油三酯和胆固醇合成的主要场所，而hmgcr是胆固醇生物合成的限速酶，fasn是脂肪酸合成的关键酶。通过qrt-pcr和westernblot分析发现，与cs组相比，br组和ww组肝脏中hmgcr和fasn的mrna和蛋白表达均明显下降(图3(a)&图3(b))，肠道中hmgcr和fasn的表达也明显下降(图4(a)&图4(b))。因此，全谷物膳食在一定程度上可能通过抑制脂肪合成来改善脂质代谢。4.血清mir-27a-3p与机体脂质合成的相关性收集全谷物膳食干预下小鼠的血清，通过小鼠血清mirnas测序以及mirnas相关数据库查询资料，筛选出全谷物膳食调控脂代谢的血清mirnas生物标志物。通过血清mirnas测序我们筛选出了136个mirnas在全谷物膳食中发生显著变化。进一步的分析发现，其中的16个mirnas同时在br和ww组内出现相同的变化趋势。接下来，我们通过在线mirnas相关的分析软件diana-mirpathv3.0(http://www.microrna.gr/mirpathv3)对这16个mirnas进行kegg和go分析发现，在全谷物膳食干预下，mir-27a-3p和mir-690参与调控脂质代谢。通过在线metaboanalystsoftware(version4.0；https://www.metaboanalyst.ca/)对mirnas进行pls-da分析发现，mir-27a-3p的vip得分高于mir-690，因此，mir-27a-3p对于全谷物膳食调控机体脂质代谢的贡献度更大，mir-27a-3p可以用于检测小鼠脂质代谢能力。5.血清mir-27a-3p作为机体脂质合成能力标志物的评估在全谷物膳食干预下，通过qrt-pct分析发现，与cs组相比，br和ww组中的mir-27a-3p在血清、白色脂肪中显著降低(图5(a)&图5(b))，而在肝脏、肠道中显著升高(图5(c)&图5(d))，在褐色脂肪和骨骼肌中无显著变化(图5(e)&图5(f))。进一步地研究发现，通过targetscanhuman(http://www.targetscan.org/vert_72/)分析发现，hmgcr和fasn的3'utr中均含有高度保守的mir-27a-3p结合位点(图6(a)&图6(c))。通过研究mir-27a-3p对hek293t细胞中含有hmgcr和fasn3’-utr的荧光素酶报告物活性发现，mir-27a-3p模拟转染分别抑制了hmgcr和fasn3’-utr两个报告者的荧光素酶活性(图6(b)、图6(d))。因此，血清mir-27a-3p可能被肝脏中的受体细胞利用，进而抑制胆固醇和脂肪酸的合成，从而调控脂质代谢，血清mir-27a-3p是全谷物膳食调控脂质合成的一个新的生物标记物。实施例3mir-27a-3p用于检测评估小鼠不同时间点的脂质代谢能力将小鼠在三种不同膳食模式(cs、br、ww)干预下饲养8周。(a)分别在全谷物膳食干预2周、4周、8周时，检测样本血清或血浆中mir-27a-3p的表达水平以及甘油三酯、胆固醇水平含量。(b)根据步骤(a)的检测结果，判断所检测的样本食用全谷物膳食后血清或血浆中甘油三酯、胆固醇以及mir-27a-3p在不同时间点的水平(含量)，评估mir-27a-3p对脂质代谢的灵敏度。判断方法为：在全谷物膳食干预2周、4周、8周时分别检测血清或血浆中mir-27a-3p的表达水平以及甘油三酯、胆固醇水平含量，并分别与对照组(玉米淀粉组)进行比较，检验p值的变化趋势(p值越小说明变化越明显)。如果，mir-27a-3p能够在较早的时间节点时mir-27a-3p能够检测出降低，而甘油三酯、胆固醇在较早的时间节点时并未出现显著性变化时，却在较晚时间节点检测时出现降低，说明mir-27a-3p对于全谷物膳食调控脂质代谢的灵敏性更高，能在较早时间内检测出机体脂质的变化。具体地，如图7(a)所示，在全谷物膳食干预2周时，所述样本血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本的6.2％或5.6％时(p<0.05)，其血清中甘油三酯水平含量仅降低0.5％或2.7％，血清中胆固醇水平含量仅降低0.4％或2.9％(p>0.05)；如图7(b)所示，在全谷物膳食干预4周时，所述样本血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本的5.5％或5.0％时(p<0.01)，其血清中甘油三酯水平含量才显著降低4.0％或4.2％(p<0.05)，血清中胆固醇水平含量才显著降低4.6％或4.3％(p<0.05)；如图7(c)所示，在全谷物膳食干预8周时，所述样本血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本的57.9％或42.8％时(p<0.01或p<0.001)，其血清中甘油三酯水平含量显著降低28.7％或22.0％(p<0.01)，血清中胆固醇水平含量显著降低11.8％或22.2％(p<0.01)。综上数据可以发现，血清中mir-27a-3p能够在更早的时间点检测出机体的脂质代谢的变化趋势，灵敏度比检测血清中的甘油三脂、胆固醇要高。实施例4mir-27a-3p在高血脂小鼠血清中的表达检测高脂饮食以及肥胖小鼠血清中mir-27a-3p以及甘油三酯、胆固醇的变化，评估mir-27a-3p在高血脂小鼠血清中的表达情况。具体地，在对照实验中，对照组小鼠饲养普通正常饲料，实验组饲养60％高脂肪饲料，膳食干预8周后，收集小鼠血清，检测血清中的mir-27a-3p表达情况以及甘油三酯、胆固醇的水平变化。结果发现，与正常饮食小鼠比较，高脂饮食小鼠血清中甘油三酯和胆固醇含量分别升高了17.1％和78.5％(图8(a)&图8(b))，而血清中mir-27a-3p水平含量并未降低，而是升高了13.1％(图8(c))；而在正常饲料喂养8周后的普通小鼠和ob/ob小鼠中发现，与普通野生型小鼠比较，ob/ob小鼠血清中甘油三酯和胆固醇含量分别升高了43.7％和107.6％(图8(d)&图8(e))，而血清中mir-27a-3p水平含量并未降低，而是升高了71.8％(图8(f))。实施例5用于检测机体的脂质代谢能力的芯片或试剂盒用于检测机体的脂质代谢能力的芯片或试剂盒，含有microrna芯片，所述microrna芯片包括固相载体，以及有序固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性检测seqidno.:1所示的序列。所述寡核苷酸探针含有互补结合区、与固相载体相连的连接区。实施例6一种评估全谷物膳食改善机体脂质代谢的方法(a)提供一测试组和一对照组，其中在所述测试组中将全谷物膳食施用于测试组的动物，并测定施用后所述测试组血清中mir-27a-3p的表达水平，而所述的对照组采用与测试组相同的条件，只是不将全谷物膳食施用于对照组(cs)的动物；(b)将测试组血清中的mir-27a与对照组血清中的mir-27a-3p的表达水平进行比较；当测试组血清中的mir-27a-3p的表达水平显著低于对照组的表达水平时，则表明全谷物膳食改善了机体的脂质代谢。实施例7mir-27a-3p用于指示机体食用全谷物膳食后血清或血浆中甘油三酯、胆固醇的水平含量变化的方法(a)检测样本血清中mir-27a-3p的表达水平；(b)根据步骤(a)的检测结果，判断检测的样本食用全谷物膳食后血清或血浆中甘油三酯、胆固醇的水平含量，判断方法为：如果测试组血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本血清中的表达水平，则判定该检测样本食用全谷物膳食后血清中甘油三酯、胆固醇的水平含量显著降低。具体地，所述样本血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本的42.8％或57.9％时，其血清或血浆中甘油三酯水平含量显著降低21.5％或29.0％，血清或血浆中胆固醇水平含量显著降低22.2％或11.7％。实施例8应用mir-27a-3p指示机体食用全谷物膳食后肝脏甘油三酯、胆固醇的水平含量的方法(a)检测样本血清中mir-27a-3p的表达水平；(b)根据步骤(a)的检测结果，判断检测的样本食用全谷物膳食后肝脏中甘油三酯、胆固醇的水平含量，判断方法为：如果测试组血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本血清中的表达水平，则判定该检测样本食用全谷物膳食后肝脏中甘油三酯、胆固醇的水平含量显著降低。具体地，所述样本血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本的42.8％或57.9％时，其肝脏中甘油三酯水平含量显著降低20.4％或20.6％，肝脏中胆固醇水平含量显著降低23.2％或24.5％。实施例9mir-27a-3p用于评估机体食用全谷物膳食后肝脏脂肪合成的方法(a)检测样本血清中mir-27a的表达水平；(b)根据步骤(a)的检测结果，判断检测的样本食用全谷物膳食后肝脏中脂肪合成的变化，判断方法为：如果测试组血清中mir-27a表达水平显著低于正常样本血清中的表达水平，则判定该检测样本食用全谷物膳食后肝脏中脂肪合成水平显著降低。具体地，所述样本血清中mir-27a表达水平显著低于正常样本的42.8％或57.9％时，其肝脏中脂肪合成相关的酶(如hmgcr、fasn)表达水平显著降低，表明肝脏中脂肪合成水平显著下降。实施例10mir-27a-3p用于评估机体食用全谷物膳食后肝脏脂肪堆积的方法(a)检测样本血清中mir-27a-3p的表达水平；(b)根据步骤(a)的检测结果，评估机体食用全谷物膳食后肝脏脂肪堆积情况，评估方法为：如果测试组血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本血清中的表达水平，则判定该检测样本食用全谷物膳食后肝脏中脂肪堆积显著减少。具体地，所述样本血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本的42.8％或57.9％时，通过he染色或油红o染色发现，其肝脏中脂肪空泡减少，脂滴含量降低，表明肝脏中脂肪堆积减少。实施例11mir-27a-3p用于评估机体食用全谷物膳食后肠道脂肪合成的方法，包括步骤：(a)检测样本血清中mir-27a-3p的表达水平；(b)根据步骤(a)的检测结果，判断检测的样本食用全谷物膳食后肠道中脂肪合成的变化，判断方法为：如果测试组血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本血清中的表达水平，则判定该检测样本食用全谷物膳食后肠道中脂肪合成水平显著降低。具体地，所述样本血清中mir-27a-3p表达水平显著低于正常样本的42.8％或57.9％时，其肠道中脂肪合成相关的酶(如hmgcr、fasn)表达水平显著降低，表明肠道中脂肪合成水平显著下降。实施例12mir-27a-3p用于判断机体是否食用全谷物膳食的方法(a)检测样本血清中mir-27a-3p的表达水平；(b)根据步骤(a)的检测结果，判断检测的样本是否食用全谷物膳食，判断方法为：如果测试组血清中mir-27a-3p表达水平低于正常样本血清中的表达水平，则判定该检测样本食用全谷物膳食。具体地，如果所述样本血清中mir-27a-3p表达水平低于正常样本的42.8％，较佳地低于正常样本的57.9％，则判定该检测样本食用全谷物膳食。实施例13一种用于评估全谷物膳食改善脂质代谢的试剂盒一种用于评估全谷物膳食改善脂质代谢的试剂盒，包括：用于抽提血清mirna的试剂、用于rna反转录的试剂、用于实时定量pcr检测seqidno:1所示的mirna含量的试剂。所述全谷物膳食是指以全糙米或全麦为主的饮食模式。用于反转录seqidno:1所示序列的引物如seqidno：2所示。用于pcr扩增seqidno:1所示序列的引物如seqidno：3、seqidno：4所示。虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。sequencelisting<110>江南大学<120>全谷物膳食下脂质合成能力的mirna标志物<130>baa200885a<160>15<170>patentinversion3.3<210>1<211>21<212>dna<213>小鼠<400>1uucacaguggcuaaguuccgc21<210>2<211>44<212>dna<213>人工序列<400>2ctcaactggtgtcgtggagtcggcaattcagttgaggcggaact44<210>3<211>27<212>dna<213>人工序列<400>3acactccagctgggttcacagtggcta27<210>4<211>23<212>dna<213>人工序列<400>4ctcaagtgtcgtggagtcggcaa23<210>5<211>44<212>dna<213>人工序列<400>5ctcaactggtgtcgtggagtcggcaattcagttgaggcggaact44<210>6<211>44<212>dna<213>人工序列<400>6ctcaactggtgtcgtggagtcggcaattcagttgagaaaatatg44<210>7<211>27<212>dna<213>人工序列<400>7acactccagctgggttcacagtggcta27<210>8<211>30<212>dna<213>人工序列<400>8acactccagctgggcgcaaattcgtgaagc30<210>9<211>23<212>dna<213>人工序列<400>9ctcaagtgtcgtggagtcggcaa23<210>10<211>21<212>dna<213>人工序列<400>10agcttgcccgaattgtatgtg21<210>11<211>23<212>dna<213>人工序列<400>11tctgttgtgaaccatgtgacttc23<210>12<211>21<212>dna<213>人工序列<400>12ggaggtggtgatagccggtat21<210>13<211>21<212>dna<213>人工序列<400>13tgggtaatccatagagcccag21<210>14<211>20<212>dna<213>人工序列<400>14acatcatccctgcatccact20<210>15<211>19<212>dna<213>人工序列<400>15gtcctcagtgtagcccaag19当前第1页12