1.一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母,其特征在于,包括ppic9k载体、β-甘露聚糖酶基因以及α-半乳糖苷酶基因,所述β-甘露聚糖酶基因以及α-半乳糖苷酶基因组成融合基因,融合基因两端包含ecori和not1酶切位点序列和载体ppic9k的同源臂序列。
2.根据权利要求1所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母,其特征在于,所述毕赤酵母的表达质粒包括ppic9k载体和ecori酶切位点以及not1酶切位点之间的全长融合基因。
3.一种如权利要求1-2任一所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
s1、化学合成改良的β-甘露聚糖酶与α-半乳糖苷酶的融合基因;
s2、酶切s1中所得融合基因与酶切线性化的毕赤酵母表达载体连接或重组,得融合基因表达质粒;
s3、将s2中构建好的融合基因表达质粒酶切线性化后,转化入毕赤酵母感受态细胞中;
s4、通过his缺陷和g418抗性筛选出有融合基因插入的毕赤酵母菌。
4.根据权利要求4所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法,其特征在于,所述s2中融合基因序列与酶切线性化的毕赤酵母表达载体通过t4连接酶或2xclonexpressmix连接或重组。
5.根据权利要求3所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法,其特征在于,所述s3中表达质粒采用sacl酶切线性化。
6.根据权利要求3所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法,其特征在于,所述表达质粒线性化后跑1%的agarose琼脂糖凝胶确认重组质粒完全线性化。
7.根据权利要求3所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法,其特征在于,将完全线性化的所述表达质粒转化入毕赤酵母感受态细胞中,220rpm条件下进行摇床培养1.5h。
8.根据权利要求5所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法,其特征在于,将所述整合有β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的融合基因的毕赤酵母菌株跑sds-page胶鉴定分泌蛋白,挑选得β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的融合基因表达量高的菌株。
9.一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的应用,其特征在于,包括如下步骤:
将毕赤酵母工程菌株转接入含有10-15mlbmgy培养基带透气塞的50ml离心管,在28℃,220rpm条件下进行摇床培养至od600=2-5;
菌体重悬于bmm培养基,220rpm条件下进行摇床培养,每24h加0.5%甲醇诱导,培养4-5天;
c、应用:将β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的融合酶作为饲料添加剂应用于降解饲料中的抗营养因子半乳甘露聚糖。