专利名称:一种苹果梨杂交植株的培育方法
技术领域：
本发明涉及一种苹果梨杂交植株的培育方法，属于植物杂交的方法。
背景技术：
梨属蔷薇科植物，梨果鲜美，肉脆多汁，酸甜可口，风味芳香优美。富含糖、蛋白质、脂肪、碳水化合物及多种维生素，对人体健康有重要作用。
苹果属蔷薇科植物，果实圆形，味甜或略酸，是常见水果，具有丰富营养成分，有食疗、辅助治疗功能。
苹果味道酸甜,风味独特,但汁水较少,而梨果鲜美，肉脆多汁。
要想得到味美且多汁的水果，需要把两种果树杂交。目前的苹果梨是从朝鲜咸镜南道北青郡引入6株梨树的接穗，与中国吉林省延边朝鲜族自治州龙井市桃源乡小箕村的北方耐寒山梨砧木嫁接而成的。
植物杂交主要是克服植物远缘杂交的不亲和障碍，将已有的物种进一步的繁殖。就是说把一种植物的性状与另一种植物的性状相结合培养出可以表现出来的两种性状。植物杂交方法主要有人工授粉以及细胞融合两种方法。人工授粉即通过人工的方法将植物花粉传送到柱头上，这种方法具体实施起来比较繁琐，而且成功率较低。细胞融合主要用融合诱导剂诱导细胞融合，例如公开号为CN1592787，名称“非线性振幅介电电泳波形用于细胞融合”所述首先用相对低振幅，长持续时间融合前电场波形使生物细胞首先被排列，然后用相对高振幅，短持续时间融合前电场波形压缩，使细胞融合前细胞膜接触提高，从而使细胞融合。这种方法使细胞核内的遗传物质混合，得到杂种植株的成功率低，植株受干扰多，长势不好。
梨果的多汁与其细胞质内的遗传物质有很大的关系，所以本发明用Y射线处理梨细胞核中的遗传物质，使其失去效用，而留下细胞质中的遗传物质让其继续发挥效用，这样减小了细胞核遗传物质的干扰，同时也增加了杂交植株的存活率。
发明内容
本发明围绕制备一种既有苹果味道酸甜，风味独特，又有梨果肉脆多汁特点的水果，提供了一种苹果梨植株的制备方法，用本发明制得的植株能够结出味道酸甜且多汁的果实。
本发明采用的技术方案是
(1)分别切取一小片未成熟的梨肉和苹果肉，在温度为30°C 35°C下用纤维素酶和果胶酶处理IOmin 15min ； (2)用活性剂对苹果肉细胞进行处理，用Y射线照射梨肉细胞细胞核；
(3)把梨肉细胞和苹果肉细胞放到一起，用活性剂和融合剂对其进行处理，再施加电压，形成电脉冲使细胞融合；
(4)通过植物组织培养液培养，经筛选后得到杂种植株。[0010]所述的活性剂为卵磷脂，酵母提取物，甘油三脂，环戊烷多氢菲中的两种或三种。
所述的融合剂为聚丙烯酰胺，NaNO3，烯醇，糖基酰基甘油，N-脂酰硝氨醇中的两种或二种。
所述的活性剂中以质量百分比计为卵磷脂35% 50%，酵母提取物35% 50%，甘油三脂35% 50%，环戊烷多氢菲35% 50%。
所述的融 合剂中以质量百分比计为聚丙烯酰胺35% 50%，NaNO3 35% 50%，烯醇35% 50%，糖基酰基甘油35% 50%，N-脂酰硝氨醇35% 50%。
所述的植物组织培养液中以质量百分比计为NH4NO3 10% 15%，蔗糖10% 15%，FeSO4 7H20 5% 10%，氰钴胺5% 10%，赖氨酸2% 5%，天冬氨酸2% 5%，吲哚乙酸10% 15%，玉米素10% 15%，赤霉素10% 15%，去离子水10% 30%。
本发明与现有方法相比所具有的优点及效果是
(1)本发明制备的植株能结出既有苹果风味又多汁的果实；
(2)本发明的方法直接利用了梨肉细胞的细胞质遗传，成功率高，效果好。
具体实施方式
实例I
活性剂中以质量计，卵磷脂35g，酵母提取物35g，甘油三脂40g。
融合剂中以质量计，聚丙烯酰胺40g，糖基酰基甘油35g，NaNO3 35g。
植物组织培养液中以质量计，NH4NO3 10g，蔗糖10g，FeSO4 *7H20 5g，氰钴胺5g，赖氨酸2g，天冬氨酸2g，吲哚乙酸10g，玉米素10g，赤霉素10g，去离子水30g。
杂交植株的培育方法为
首先分别切取一小片未成熟的梨肉和苹果肉，在温度为30°C下用纤维素酶和果胶酶处理IOmin ;再用活性剂对苹果肉细胞进行处理，用Y射线照射梨肉细胞细胞核；然后再把梨肉细胞和苹果肉细胞放到一起，用活性剂和融合剂对其进行处理，再施加电压，形成电脉冲使细胞融合；
最后通过植物组织培养液培养，经筛选后得到杂种植株。
实例2
活性剂中以质量计，卵磷脂35g，酵母提取物35g，环戊烷多氢菲37g。
融合剂中以质量计，聚丙烯酰胺37g，糖基酰基甘油35g，N_脂酰硝氨醇35g。
植物组织培养液中以质量计，NH4NO3 15g，蔗糖15g，FeSO4 7H20 10g，氰钴胺10g,赖氨酸5g,天冬氨酸5g,卩引哚乙酸15g,玉米素IOg,赤霉素IOg,去离子水15g。
杂交植株的培育方法为
首先分别切取一小片未成熟的梨肉和苹果肉，在温度为35°C下用纤维素酶和果胶酶处理15min ;再用活性剂对苹果肉细胞进行处理，用Y射线照射梨肉细胞细胞核；然后再把梨肉细胞和苹果肉细胞放到一起，用活性剂和融合剂对其进行处理，再施加电压，形成电脉冲使细胞融合；
最后通过植物组织培养液培养，经筛选后得到杂种植株。
实例3
活性剂中以质量计，卵磷脂40g，酵母提取物36g，环戊烷多氢菲37g。[0025]融合剂中以质量计，聚丙烯酰胺40g，糖基酰基甘油35g，N_脂酰硝氨醇35g。
植物组织培养液中以质量计，NH4NO3 13g，蔗糖13g，FeSO4 *7H20 7g，氰钴胺7g，赖氨酸3g，天冬氨酸2g，吲哚乙酸15g，玉米素Sg，赤霉素7g，去离子水25g。
杂交植株的培育方法为
首先分别切取一小片未成熟的梨肉和苹果肉，在温度为33°C下用纤维素酶和果胶酶处理13min ;再用活性剂对苹果肉细胞进行处理，用Y射线照射梨肉细胞细胞核；然后再把梨肉细胞和苹果肉细胞放到一起，用活性剂和融合剂对其进行处理，再施加电压，形成电脉冲 使细胞融合；最后通过植物组织培养液培养，经筛选后得到杂种植株。
权利要求
1.种苹果梨杂交植株的培育方法，其特征在于制备方法为 (1)分别切取一小片未成熟的梨肉和苹果肉，在温度为30°C 35°C下用纤维素酶和果胶酶处理IOmin 15min ； (2)用活性剂对苹果肉细胞进行处理，用Y射线照射梨肉细胞细胞核； (3)把梨肉细胞和苹果肉细胞放到一起，用活性剂和融合剂对其进行处理，再施加电压，形成电脉冲使细胞融合； (4)通过植物组织培养液培养，经筛选后得到杂种植株。
2.根据权利要求
I所述的一种苹果梨杂交植株的培育方法，其特征在于所述的活性剂为卵磷脂，酵母提取物，甘油三脂，环戊烷多氢菲中的两种或三种。
3.根据权利要求
I所述的一种苹果梨杂交植株的培育方法，其特征在于所述的融合剂为聚丙烯酰胺，NaNO3,烯醇，糖基酰基甘油，N-脂酰硝氨醇中的两种或三种。
4.根据权利要求
I所述的一种苹果梨杂交植株的培育方法，其特征在于所述的活性剂中以质量百分比计为卵磷脂35% 50%，酵母提取物35% 50%，甘油三脂35% 50%，环戊烷多氢菲35% 50%。
5.根据权利要求
I所述的一种苹果梨杂交植株的培育方法，其特征在于所述的融合剂中以质量百分比计为聚丙烯酰胺35% 50%，NaNO3 35% 50%，烯醇35% 50%，糖基酰基甘油35% 50%，N-脂酰硝氨醇35% 50%。
6.根据权利要求
I所述的一种苹果梨杂交植株的培育方法，其特征在于所述的植物组织培养液中以质量百分比计为NH4NO3 10% 15%，蔗糖10% 15%，FeSO4 7H20 5% 10%，氰钴胺5% 10%，赖氨酸2% 5%，天冬氨酸2% 5%，吲哚乙酸10% 15%，玉米素10% 15%，赤霉素10% 15%，去离子水10% 30%。
专利摘要
本发明公开了一种苹果梨杂交植株的培育方法，属于植物杂交的方法。本发明苹果梨的培育步骤为先取未成熟的梨肉细胞和苹果肉细胞，接着用纤维素酶和果胶酶对它们进行处理，再用活性剂对苹果肉细胞进行处理，同时用γ射线照射梨肉细胞细胞核，然后把梨肉细胞和苹果肉细胞放到一起，用活性剂和融合剂对其进行处理，并且施加电压形成电脉冲使细胞融合，最后用植物组织培养液培养，经筛选后得到杂种植株。用本发明制得的杂交植株结出的果实既有苹果的风味又有梨果多汁的特点，具有显著的经济效益和社会效益，广阔的应用前景。
文档编号C12N15/05GKCN102634505SQ201210136459
公开日2012年8月15日 申请日期2012年5月5日
发明者包铠, 雷思宇, 雷春生 申请人:常州亚环环保科技有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan