一种降低肝素钠260nm吸光度的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物技术领域，特别涉及一种降低肝素钠260nm吸光度的方法。
【背景技术】
[0002]肝素钠是目前世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物，它是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，多糖类物质往往与蛋白，核酸物质等以复合物的形式存在于生物大分子中，而这些蛋白与核酸在260nm处有最大吸收，从而影响了肝素钠的产品质量。因此，为了降低肝素钠260nm的吸光值，必须要将这些杂质去除。
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，本发明与已有技术相比具有以下显著特点和积极效果:本发明使用热乙醇沉淀将蛋白质、核酸等杂质带入到废乙醇中，降低了肝素钠中间体的260nm吸光度，方法简单，操作方便，采用本发明方法得到的肝素钠中间体性质稳定，260nm吸光度< 0.1。
[0004]本发明采用如下技术方案予以实现:
一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，包括如下步骤:
(1)取肝素钠粗品酶解后的溶液，按18~25g/L比例加入氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调节PH值9.5-11.5，边搅边加入95%的乙醇沉淀，沉淀度数为40~45% (20°C)
(2)将上层废乙醇抽到乙醇回收罐，下层沉淀加纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调节pH值10~12，按2~4%比例加入双氧水氧化8~10小时。
[0005](3)氧化结束后，按15~20g/L比例加入氯化钠溶解，用盐酸溶液调节pH值为
5.0-6.0，边搅边加入95%热乙醇沉淀，乙醇沉淀度数45~50%( 20°C )，沉淀温度为40~45°C，沉淀时间10~12小时。
[0006](4)将上层废乙醇抽到乙醇回收罐。下层沉淀，取样检测。
【具体实施方式】
[0007](I)取肝素钠粗品酶解后的溶液500L，加入10 kg氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调节PH值9.5-11.5，边搅边加入400L的95%的乙醇沉淀10小时。
[0008](2)将上层废乙醇抽到乙醇回收罐，下层沉淀加纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调节pH值10~12，加入双氧水15L氧化8小时。
[0009](3)氧化结束后，加入氯化钠10 kg溶解，用盐酸溶液调节pH值为5.0-6.0，边搅边加入560L的95%热乙醇沉淀，沉淀温度为45°C，沉淀时间10小时。
[0010](4)将上层废乙醇抽到乙醇回收罐。下层沉淀，取样检测。
【主权项】
1.一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于包括如下步骤: 取肝素钠粗品酶解后的溶液，加入氯化钠适量，搅拌溶解后，用盐酸溶液调节PH值，边搅边加入95%的乙醇沉淀； 将上层废乙醇抽到乙醇回收罐，下层沉淀加纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调节PH值，加入双氧水氧化； 氧化结束后，加入氯化钠适量，用盐酸溶液调节pH值，边搅边加入95%热乙醇沉淀； 将上层废乙醇抽到乙醇回收罐； 下层沉淀，取样检测。
2.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(I)所述的氯化钠使用量为18~25g/L。
3.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(I)所述的溶液PH值为9.5-11.5。
4.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(I)所述的乙醇沉淀度数为40~45% (20°C)，沉淀时间10~12小时。
5.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(2)所述的pH值为10~12。
6.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(2)所述的氧化条件为:双氧水用量为溶液体积的2~4%，氧化时间8~10小时。
7.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(3)所述的氯化钠用量为15~20g/L。
8.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(3)所述的pH值为5.0~6.0。
9.根据权利要求1所述的一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，其特征在于:步骤(3)所述的沉淀条件为:乙醇沉淀度数45~50%(20°C )，沉淀温度为40~45°C，沉淀时间10~12小时。
【专利摘要】本发明公开了一种降低肝素钠260nm吸光度的方法，肝素钠粗品酶解后的溶液经过一步沉淀，氧化后用热乙醇沉淀，能有效去除产品中含量极低的核酸，蛋白等杂质，降低产品260nm吸光度。本发明操作简单，效果明显，适于工业化生产。
【IPC分类】C08B37-10
【公开号】CN104530261
【申请号】CN201410813615
【发明人】刘冠男, 王洪见, 夏衬来
【申请人】青岛九龙生物医药有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月24日