I)中得到的紫甘薯浆经0.7 mmol*L-l Triton X-100处理10~20 min，50~60Mpa的高流体静压处理5 min后，接种:黑曲霉6%、红曲霉6%、乳酸菌0.6%、地衣芽孢杆菌2%、粘红酵母6%、黄孢原毛平革菌3%、蜡状芽孢杆菌4%、啤酒酵母1.0%，添加L-苯丙氨酸30 mg/L，L-酪氨酸5 mg/L，培养基配方:鹿糖0.4%，蛋白胨1.2%，葡萄糖 0.4%，玉米浆 2.0%，豆饼粉 2.0%，NaCl 0.6%，KH2PO4 0.4%，pH 值 3.5，28。C 培养 7 天，收集培养液，上述百分比浓度为质量百分比浓度，L-苯丙氨酸与L-酪氨酸的添加质量比为1:1 ; (3)提取混合物的分离与浓缩:将步骤(2)的培养液至llOOOr/min室温条件下离心15min，弃沉淀，收集上清液；在压力为0.3MPa，温度30° C下，将上清液进行超滤，收集滤液，得到花青素粗提液；(4)分离、纯化:将步骤(3)得到的花青素粗提液置于AB-8吸附树脂层析柱中进行动态吸附，用4-6倍柱体积的去离子水洗涤柱子，除去水溶性杂质，再用30-50%乙醇洗脱液等浓度洗脱柱子，流速为2-4ml/min，得到纯度较高的花青素洗脱液；
(5)干燥:旋转蒸发回收乙醇，真空冷冻干燥得纯度为99.01%的花青素粉末成品。
[0017]实施例3
(I)原料预处理:取新鲜、无腐烂的紫甘薯为原料，经清洗、机械捣碎至浆状后备用；
(2)紫甘薯细胞培养:将步骤(I)中得到的紫甘薯浆经0.7 mmol*L-l Triton X-100处理10-20 min,50~60Mpa的高流体静压处理5 min后，接种:黑曲霉5_7%、红曲霉7%、乳酸菌
0.8%、地衣芽孢杆菌3%、粘红酵母7%、黄孢原毛平革菌5%、蜡状芽孢杆菌5%、啤酒酵母1.2%，添加L-苯丙氨酸40 mg/L, L-酪氨酸8 mg/L，培养基配方:鹿糖0.6%，蛋白胨2.0%，葡萄糖 0.6%，玉米浆 3.0%，豆饼粉 3.0%，NaCl 0.8%，KH2PO4 0.6%，pH 值 4.5，30。C 培养 8 天，收集培养液，上述百分比浓度为质量百分比浓度，L-苯丙氨酸与L-酪氨酸的添加质量比为1:1 ; (3)提取混合物的分离与浓缩:将步骤(2)的培养液至12000r/min室温条件下离心20min，弃沉淀，收集上清液；在压力为0.6MPa，温度40° C下，将上清液进行超滤，收集滤液，得到花青素粗提液；(4)分离、纯化:将步骤(3)得到的花青素粗提液置于AB-8吸附树脂层析柱中进行动态吸附，用4-6倍柱体积的去离子水洗涤柱子，除去水溶性杂质，再用30-50%乙醇洗脱液等浓度洗脱柱子，流速为2-4ml/min，得到纯度较高的花青素洗脱液；
(5)干燥:旋转蒸发回收乙醇，真空冷冻干燥得纯度为99.33%的花青素粉末成品。
【主权项】
1.一种紫甘薯花青素高效合成提取方法，其特征在于按以下步骤操作进行:(I)原料预处理:取新鲜、无腐烂的紫甘薯为原料，经清洗、机械捣碎至浆状后备用；(2)紫甘薯细胞培养:将步骤(I)中得到的紫甘薯浆经0.7 mmol.!/1 Triton X-100处理10~20 min，50~60Mpa的高流体静压处理5 min后，接种:黑曲霉5_7%、红曲霉5_7%、乳酸菌0.5-0.8%、地衣芽孢杆菌1_3%、粘红酵母5-7%、黄孢原毛平革菌2-5%、蜡状芽孢杆菌2-5%、啤酒酵母0.8-1.2%，添加L-苯丙氨酸20~40 mg/L，L-酪氨酸3~8 mg/L，培养基配方:鹿糖0.3-0.6%，蛋白胨 1.0-2.0%，葡萄糖 0.3-0.6%，玉米浆 1.0-3.0%，豆饼粉 1.0-3.0%，NaCl0.3-0.8%, KH2PO4 0.2-0.6%，pH 值 2.1-4.5，25-30° C 培养 6~8 天，收集培养液，上述百分比浓度为质量百分比浓度，L-苯丙氨酸与L-酪氨酸的添加质量比为1:1; (3)提取混合物的分离与浓缩:将步骤(2)的培养液至10000-12000r/min室温条件下离心10_20min，弃沉淀，收集上清液；在压力为0.1-0.6MPa，温度25-40° C下，将上清液进行超滤，收集滤液，得到花青素粗提液；(4)分离、纯化:将步骤(3)得到的花青素粗提液置于AB-8吸附树脂层析柱中进行动态吸附，用4-6倍柱体积的去离子水洗涤柱子，除去水溶性杂质，再用30-50%乙醇洗脱液等浓度洗脱柱子，流速为2-4ml/min，得到纯度较高的花青素洗脱液；(5)干燥:旋转蒸发回收乙醇，真空冷冻干燥得高纯度的花青素粉末成品。
2.根据权利要求1所述的紫甘薯花青素高效合成提取方法，其特征在于步骤(2)中，菌种选择黑曲霉6%、红曲霉6%、乳酸菌0.6-0.7%、地衣芽孢杆菌1.5-2.5%、粘红酵母6%、黄孢原毛平革菌3-4%、蜡状芽孢杆菌3-4%、啤酒酵母1.0%等微生物中的一种或几种的组合进行生物降解和合成。
3.根据权利要求1所述的紫甘薯花青素高效合成提取方法，其特征在于步骤(2)中，培养基配方:蔗糖0.4-0.5%，蛋白胨1.2-1.8%，葡萄糖与玉米浆的添加的质量比为1:2。
4.根据权利要求1所述的紫甘薯花青素高效合成提取方法，其特征在于步骤(4)中，超滤采用截留分子量500Da的超滤装置。
【专利摘要】本发明公开了一种高效合成提取紫甘薯中花青素的方法，具体为紫甘薯花青素合成提取制备技术。采用高流体静压辅助微生物发酵培养紫甘薯细胞，超滤层析提取紫甘薯中花青素。利用高流体静压辅助微生物代谢产物对紫甘薯果实细胞壁破坏，使花青素充分释放；同时添加L苯丙氨酸和粘红酵母等产酶促进紫甘薯中未转化成花青素前体合成花青素。发酵液经离心、超滤分离、层析纯化、真空冷冻干燥等处理，获得纯度为96.34%的花青素，增加花青素提取量的15%-30%。本发明操作简单、生成过程清洁无害、成本低、花青素得率大、纯度高，不需要人体肠道微生物降解，医疗保健价值高，适合规模化生产应用，具有极大的市场前景。
【IPC分类】C12P17-06, C12R1-10, C12R1-085, C12R1-685, C12P39-00, C12R1-865, C12R1-645, C07D311-62
【公开号】CN104531822
【申请号】CN201510037773
【发明人】叶澄
【申请人】温州泓呈祥科技有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2015年1月26日