一种低分子量蜂花粉蛋白肽及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种低分子量蜂花粉蛋白肽及其制备方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 花粉是植物的雄性细胞，是植物的"精子"。蜜蜂采集回巢的花粉，称为蜂花粉。蜂 花粉中除含有一般花粉的成分外，还含有蜜蜂在采集进加进去的少量花粉蜜与分泌物，因 此蜂花粉与一般花粉的成分略有差异。其外观形状也不同于粉末状的花粉粒，而是经蜜蜂 加工过的多为扁圆形的花粉团。花粉粒直径多在10 - 50微米之间，花粉粒表面有各种不 规则的沟纹，并有明显的萌发孔。
[0003] 现有蜂花蛋白肽主要是通过酶解花粉而获得，如以蜂花粉为原料，将蜂花粉破 壁、脱脂，加入蛋白酶进行酶解反应，所得酶解物具有抗氧化等作用，可制成粉剂、片剂、胶 囊、冲剂等。但这种酶解产物产率低，蛋白功效较差，而且较易引起过敏。
【发明内容】
[0004] 本发明第一目的是提供一种低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，所得蜂花粉蛋白 肽分子量低、色泽均一，可用于食品、药品、化妆品和保健品中。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] -种低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
[0007] 1)将破壁蜂花粉加入稀盐酸溶液中，再加入胃蛋白酶，35_38°C下反应3?5h，得 到体系1 ;
[0008] 2)将体系1的pH值调至6.0?8.0,加入中性蛋白酶，48-51°C反应2?3h，得到 体系2 ;
[0009] 3)维持体系2的pH值不变，加入菠萝蛋白酶，53-56 °C反应3?5h，再升温至 88-90°C，维持10?20min，得到体系3 ;
[0010] 4)将体系3进行抽滤（抽滤膜孔径0.45pm)，所得滤液经脱苦脱色、真空浓缩、喷 雾干燥，得到蜂花粉蛋白肽。
[0011] 本发明通过胃蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶三步酶解法，对破壁蜂花粉进行酶 解，可以获得分子量在3000Da以下的低分子量蜂花粉蛋白肽。
[0012] 其中，所述破壁蜂花粉与稀盐酸的质量体积比为1 :5?15 (g/mL)，所述稀盐酸质 量体积百分数为〇. 2?0. 4% ;
[0013] 其中，所述胃蛋白酶的活力单位为2500?4000u/g;胃蛋白酶：破壁蜂花粉的质量 比为 0? 25 ?0? 3:100 ;
[0014] 其中，所述中性蛋白酶的活力单位为3万?6万u/g;中性蛋白酶：破壁蜂花粉的 质量比为〇? 45?0? 5:100 ;
[0015] 其中，所述菠萝蛋白酶的活力单位为40万?80万u/g;萝蛋白酶：破壁蜂花粉的 质量比为0.8?1:100 ;
[0016] 其中，所述脱苦脱色是指在滤液中加入活性炭，室温下搅拌l-3h后，过滤除去活 性碳的过程。
[0017] 作为本发明优选的实施方式，所述步骤4)中，体系3进行抽滤（抽滤膜孔径 0. 45ym)，所得滤液选用分子截留量为2kd的超滤膜进行超滤，收集滤液，经脱苦脱色、 真空浓缩、喷雾干燥，即得蜂花粉蛋白肽。经过进一步的超滤处理，可以获得分子量小于 l〇〇〇Da的低分子量蜂花粉蛋白肽。
[0018] 本发明第二目的是提供上述制备方法所得的蜂花粉蛋白肽。
[0019] 采用本发明所述的技术方案制得的蜂花粉蛋白肽分子量低，抗氧化效果好，无异 味，可用于食品、药品、化妆品和保健品中。
【附图说明】
[0020] 图1是本发明所述蜂花粉蛋白肽制备方法的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0021] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市购获得的常规产品。
[0022] 实施例1 一种低分子量蜂花粉蛋白肽制备
[0023] 步骤如下：
[0024] 1)取100克破壁蜂花粉加入1L浓度为0.3 %的稀盐酸溶液中，再加入0.3克比活 为3500u/g的胃蛋白酶，37°C反应3h，得到体系1;
[0025] 2)将体系lpH值调至6. 8,加入0. 5克比活为5万u/克的中性蛋白酶，升温至50°C 继续反应2h，得到体系2;
[0026] 3)维持体系2pH值不变，加入0.8克比活为80万u/g的菠萝蛋白酶，升温至55°C 反应5h，反应结束后，将体系升温至90°C，保持15min，使酶灭活，得到体系3;
[0027] 4)体系3经0. 45ym滤膜抽滤后，滤液直接经脱苦脱色、真空浓缩后、喷雾干燥后 即得的低分子量蜂花粉蛋白肽。
[0028] 实施例2-种低分子量蜂花粉蛋白肽制备
[0029] 采用与实施例1相同的方法制备蜂花粉蛋白肽，区别在于：
[0030] 步骤4)体系3经0.45ym滤膜抽滤后，滤液先经过截留量为2kd的超滤膜进行超 滤后，再将滤液进行脱苦脱色、真空浓缩、喷雾干燥后得到低分子量蜂花粉蛋白肽。
[0031] 实施例3 -种低分子量蜂花粉蛋白肽制备
[0032] 步骤如下：
[0033] 1)取100克破壁蜂花粉，加入1.5L浓度为0.4%的稀盐酸溶液中，再加入0.25克 比活为4000u/g的胃蛋白酶，37°C反应5h，得到体系1;
[0034] 2)将体系lpH值调至7.0,加入0.45克比活为6万u/克的中性蛋白酶，升温至 50°C继续反应3h，得到体系2;
[0035]3)维持体系2pH值不变，加入1克比活为80万u/g的菠萝蛋白酶，升温至55°C反 应3h，反应结束后，将体系升温至90C，保持15min，使酶灭活，得到体系3 ;
[0036] 4)体系3经0. 45ym滤膜抽滤后，滤液直接经脱苦脱色、真空浓缩后、喷雾干燥后 即得的低分子量蜂花粉蛋白肽。
[0037]实施例4 一种低分子量蜂花粉蛋白肽制备
[0038] 采用与实施例3相同的方法制备蜂花粉蛋白肽，区别在于：
[0039] 步骤4)体系3经0. 45ym滤膜抽滤后，滤液先经过截留量为2kd的超滤膜进行超 滤，再将滤液进行脱苦脱色、真空浓缩、喷雾干燥，得到低分子量蜂花粉蛋白肽。
[0040] 实验例1分子量测定
[0041] 测定方法：通过凝胶层析法测定分子量，试验过程中选用0.lmol/L的Tris-HCl洗 脱液平衡处理SPhedexG-25凝胶柱后，在220nm的波长下，检测浓度为2mg/ml的标准物质： 还原性谷胱甘肽（307Da)、缩宫素（1007Da)、胰高血糖素（348?a)、和胰岛素（5808Da)，根 据标准物质分子量对数和洗脱体积，拟合得回归方程为：
[0042]y= -39. 865x+203. 53 (R2 = 0. 9917)
[0043] 其中，y为洗脱体积，x为相应分子量的对数值。
[0044] 将实施1-4所得蛋白肽分别配制浓度为5mg/ml的溶液，在上述条件下分别进样洗 脱，将出峰体积带入标准曲线，即可得样品分子量及其分布范围，通过峰面积归一法，确定 不同分子量蛋白肽的相对百分含量，所得结果如表1所示。
[0045] 对照品：采用实施例4的方法制备蜂花粉蛋白酶，区别在于，将步骤1)、步骤3)蛋 白酶替换为碱性蛋白酶。
[0046] 表1不同样品分子量分布
【主权项】
1. 一种低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)将破壁蜂花粉加入稀盐酸溶液中，再加入胃蛋白酶，35-38°C下反应3?5h，得到体 系1 ; 2)将体系1的pH值调至6.0?8.0,加入中性蛋白酶，48-51°C反应2?3h，得到体系 2 ； 3)维持体系2的pH值不变，加入菠萝蛋白酶，53-56°C反应3?5h，再升温至88-90°C， 维持10?20min，得到体系3 ; 4) 将体系3进行抽滤，所得滤液经脱苦脱色、真空浓缩、喷雾干燥，得到蜂花粉蛋白肽。
2. 根据权利要求1所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述破壁 蜂花粉与稀盐酸的质量体积比为1 :5?15(g/mL)。
3. 根据权利要求1所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述胃蛋 白酶的活力单位为2500?4000u/g。
4. 根据权利要求1所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述胃蛋 白酶：破壁蜂花粉的质量比为0. 25?0. 3:100。
5. 根据权利要求1所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述中性 蛋白酶的活力单位为3万?6万u/g。
6. 根据权利要求1所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述中性 蛋白酶：破壁蜂花粉的质量比为〇. 45?0. 5:100。
7. 根据权利要求1所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述菠萝 蛋白酶的活力单位为40万?80万u/g。
8. 根据权利要求1所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述菠萝 蛋白酶：破壁蜂花粉的质量比为0.8?1:100。
9.根据权利要求1-8任一所述的低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法，其特征在于，所 述步骤4)中，体系3进行抽滤，所得滤液选用分子截留量为2kd的超滤膜进行超滤，收集滤 液，经脱苦脱色、真空浓缩、喷雾干燥，即得蜂花粉蛋白肽。
10. 权利要求1-9任一所述低分子量蜂花粉蛋白肽的制备方法制得的蜂花粉蛋白肽。
【专利摘要】本发明涉及一种低分子量蜂花粉蛋白肽及其制备方法。所述低分子量蜂花粉蛋白肽按以下步骤制备而得：1)将破壁蜂花粉加入稀盐酸溶液中，再加入胃蛋白酶，35-38℃下反应3～5h，得到体系1；2)将体系1的pH值调至6.0～8.0，加入中性蛋白酶，48-51℃反应2～3h，得到体系2；3)维持体系2的pH值不变，加入菠萝蛋白酶，53-56℃反应3～5h，再升温至88-90℃，维持10～20min，得到体系3；4)将体系3进行抽滤，所得滤液经脱苦脱色、真空浓缩、喷雾干燥，得到蜂花粉蛋白肽。本发明所得蜂花粉蛋白肽分子量低，无异味，可用于食品、药品、化妆品和保健品中。
【IPC分类】C12P21-06, C07K1-34
【公开号】CN104593461
【申请号】CN201410849370
【发明人】陈 光, 敖建芳, 刘锐涛
【申请人】唯美度科技（北京）有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月29日