一种蜂乳蛋白多肽的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及蛋白多肽领域，具体涉及了一种蜂乳蛋白多肽。
【背景技术】
[0002] 蜂王浆（RoyalJelly)，又名蜂皇浆、蜂乳，蜂王乳，是蜜蜂巢中培育幼虫的青年工 蜂咽头腺的分泌物，呈白色或带微黄色，具粘性的半流动浆状物。蜂王浆含有丰富的蛋白 质、脂肪酸、糖类、激素、矿物质和微量元素等，其中蛋白质含量占到干物质50%左右。
[0003] 蜂王浆蛋白中，清蛋白约占2/3,球蛋白约占1/3,这和人体血清中清蛋白和球蛋 白的比例大致相同，对人体最有价值的必须氨基酸，在蜂王浆中都可以找到。蜂王浆含有18 种氨基酸，其中脯氨酸含量最高，占总氨基酸的60. 0%以上。蜂王浆蛋白因其生理功能性一 直备受科学家的青睐，在食品、保健品和化妆品中有着广阔的应用前景。
[0004] 市售的以蜂乳球蛋白作为功能性成分的护肤品中，将蜂乳蛋白直接经皮给药，然 而这种方式使营养成分难以通过皮肤而被机体吸收，因此，其潜在功效难以充分发挥。目 前，亟需将蜂乳蛋白以小分子量多肽的形式进行应用，以充分发挥其功效。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的克服现有技术的缺陷，提供一种以蜂王浆为原料提取而成的蜂乳蛋 白多肽，该所述蜂乳蛋白多肽的分子量小，且拥有优异抗氧化、抗衰老活性。
[0006] 本发明提供了一种蜂乳蛋白多肽，所述蜂乳蛋白多肽以蜂王浆为原料，由包括以 下步骤的方法提取得到：
[0007] 1)取蜂王浆，加入饱和氯化钠溶液，静置，离心后取上清液；用盐酸将上清液pH值 调至3. 8?4. 2,静置，离心后弃上清，用pH3. 8?4. 2的盐酸洗涤沉淀物，即得蜂乳蛋白；
[0008] 2)在步骤1)所得述蜂乳蛋白中，以体积比1:10?20加入浓度0. 3?0. 4%的稀 盐酸溶液，得蜂乳蛋白溶液；
[0009] 3)将步骤2)所述蜂乳蛋白溶液置于36?38°C水浴中，加入胃蛋白酶，充分酶解， 得胃蛋白酶酶解液；
[0010] 4)将步骤3)所得胃蛋白酶酶解液的pH调至6. 0?8. 0,将水浴温度调节至48? 52°C，加入中性蛋白酶，反应3?5h;将水浴温度调节至53?57°C，加入菠萝蛋白酶，反应 3?5h，即得酶解液；
[0011] 5)取步骤4)所得酶解液，在70?73°C的水浴中放置10?20min;依次使用0.4? 0. 5ym的滤膜和截留分子量为4?5kD的超滤膜过滤，加入活性炭脱苦脱色，真空浓缩，干 燥，即得蜂乳蛋白多肽。
[0012] 本发明步骤1)为从蜂王浆中提取蜂乳蛋白的步骤，该步骤具体为：取蜂王浆，按 重量比1:5?10加入饱和氯化钠溶液，重量比优选为1:8 ;静置1?2h后，4800?5200rpm 条件下离心3?8min，取上清液；用盐酸将上清液pH值调至3. 8?4. 2,调节后的pH值 优选为4. 0 ;静置1?2h后，7800?8200rpm条件下离心8?12min，弃上清；用pH3. 8? 4. 2的盐酸洗绦沉淀物，盐酸的pH值优选为4. 0,洗绦次数优选为3?5次，每次洗绦后，在 7800?8200rpm条件下离心8?12min，弃上清，该洗绦步骤可将用于沉淀的氯化钠充分去 除，从而提高蜂乳蛋白的纯度；充分去盐后，即得蜂乳蛋白。该步骤提取得到的蜂乳蛋白富 含蜂王衆中的营养成分。
[0013] 本发明步骤3)中，所述胃蛋白酶的加入量为0. 2?0. 4g/ml，优选为0. 3g/ml，所 述胃蛋白酶的比活为2500?4000U/g。
[0014] 本发明步骤4)中，所述中性蛋白酶的加入量为0. 3?0. 5g/ml，优选为0. 4g/ml， 所述中性蛋白酶的比活为30000?60000U/g。
[0015] 本发明步骤4)中，所述菠萝蛋白酶的加入量为0. 8?1.2g/ml，优选为1.0g/ml， 所述菠萝蛋白酶的比活为400000?800000U/g。
[0016] 本发明步骤5)中，所述脱苦脱色具体为：加入活性炭，室温低速搅拌1?3h后，过 滤除去活性炭。
[0017] 作为优选方案，本发明所述蜂乳蛋白多肽由包括以下步骤的方法制备而成：
[0018] 1)取蜂王衆，按重量比1:5?10加入饱和氯化钠溶液，静置1?2h，4800? 5200rpm条件下离心3?8min，取上清液；用盐酸将上清液pH值调至3. 8?4. 2,静置1? 2h，7800?8200rpm条件下离心8?12min，弃上清；用pH3. 8?4. 2的盐酸洗绦沉淀物3? 5次，每次洗绦后，在7800?8200rpm条件下离心8?12min，弃上清，即得蜂乳蛋白；
[0019] 2)在步骤1)所得述蜂乳蛋白中，以体积比1:10?20加入浓度0. 3?0. 4%的稀 盐酸溶液，得蜂乳蛋白溶液；
[0020] 3)将步骤2)所述蜂乳蛋白溶液置于36?38 °C水浴中，以浓度0. 2?0. 4g/ml加 入比活为2500?4000U/g的胃蛋白酶，充分酶解，得胃蛋白酶酶解液；
[0021] 4)将步骤3)所得胃蛋白酶酶解液的pH调至6. 0?8. 0,将水浴温度调节至48? 52°C，以浓度0. 3?0. 5g/ml加入比活为30000?60000U/g的中性蛋白酶，反应3?5h; 将水浴温度调节至53?57°C，以浓度0. 8?1. 2g/ml加入比活为400000?800000U/g的 菠萝蛋白酶，反应3?5h，即得酶解液；
[0022] 5)取步骤4)所得酶解液，在70?73°C的水浴中放置10?20min;依次使用0. 4? 0. 5ym的滤膜和截留分子量为4?5kD的超滤膜过滤，加入活性炭，室温低速搅拌1?3h 后，过滤除去活性炭，真空浓缩，喷雾干燥，即得蜂乳蛋白多肽。
[0023] 为了保证制备得到的蜂乳蛋白多肽的活性，除了酶解反应对温度的特别要求外， 本发明各个步骤的操作温度均优选为〇?4°c。
[0024] 本发明进一步保护所述蜂乳蛋白多肽在制备化妆品、食品、保健品、药品中的应 用。
[0025] 与现有技术相比，本发明提供的技术方案可以取得显著的效果。本发明将蜂乳蛋 白以小分子量多肽的形式进行应用，促使其功效的充分发挥，经检测，本发明提供的蜂乳蛋 白多肽的DPPH清除率可达80%以上，具有优异的清除自由基效果，并且可以促进皮肤弹性 的改善，具有抗衰老功效。
【具体实施方式】
[0026] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0027] 实施例1
[0028] 蜂乳蛋白多肽的制备：
[0029] 1)取100g蜂王浆，加入800g饱和氯化钠溶液，静置1. 5h，5000rpm条件下离心 5min，取上清液；用盐酸将上清液pH值调至4. 0,静置1. 5h，8000rpm条件下离心lOmin，弃 上清；用PH4. 0的盐酸洗涤沉淀物4次，每次洗涤后，在8000rpm条件下离心lOmin，弃上清， 即得蜂乳蛋白；
[0030] 2)在步骤1)所得述蜂乳蛋白中，加入15倍体积的浓度0. 35%的稀盐酸溶液，得 蜂乳蛋白洛液；
[0031] 3)将步骤2)所述蜂乳蛋白溶液置于37°C水浴中，加入比活为3000U/g的胃蛋白 酶，使胃蛋白酶的终浓度为〇. 3g/ml，充分酶解，得胃蛋白酶酶解液；
[0032] 4)将步骤3)所得胃蛋白酶酶解液的pH调至7. 0,将水浴温度调节至50°C，加入比 活为50000U/g的中性蛋白酶，使终浓度为0. 4g/ml，反应4h;将水浴温度调节至55°C，加入 比活为600000U/g的菠萝蛋白酶，使其终浓度为1.Og/ml，反应4h，即得酶解液；
[0033] 5)取步骤4)所得酶解液，在72°C的水浴中放置15min;依次使用0. 44ym的滤膜 和截留分子量为4kD的超滤膜过滤，加入活性炭，室温低速搅拌2h后，过滤除去活性炭，真 空浓缩，喷雾干燥，即得蜂乳蛋白多肽。
[0034] 实施例2
[0035] 蜂乳蛋白多肽的制备：
[0036] 1)取100g蜂王衆，加入500g饱和氯化钠溶液，静置lh，4800rpm条件下离心3min， 取上清液；用盐酸将上清液pH值调至3. 8,静置lh，7800rpm条件下离心8min，弃上清；用 pH3. 8的盐酸洗绦沉淀物3次，每次洗绦后，在7800rpm条件下离心8min，弃上清，即得蜂乳 蛋白；
[0037] 2)在步骤1)所得述蜂乳蛋白中，加入10倍体积的浓度0. 30%的稀盐酸溶液，得 蜂乳蛋白洛液；
[0038] 3)将步骤2)所述蜂乳蛋白溶液置于36°C水浴中，加入比活为2500U/g的胃蛋白 酶，使胃蛋白酶的终浓度为〇. 2g/ml，充分酶解，得胃蛋白酶酶解液；
[0039] 4)将步骤3)所得胃蛋白酶酶解液的pH调至6. 0,将水浴温度调节至48°C，加入比 活为30000U/g的中性蛋白酶，使终浓度为0. 3g/ml，反应3h;将水浴温度调节至53°C，加入 比活为400000U/g的菠萝蛋白酶，使其终浓度为0. 8g/ml，反应3h，即得酶解液；
[0040] 5)取步骤4)所得酶解液，在70°C的水浴中放置10min;依次使用0. 4ym的滤膜 和截留分子量为4kD的超滤膜过滤，加入活性炭，室温低速搅拌lh后，过滤除去活性炭，真 空浓缩，喷雾干燥，即得蜂乳蛋白多肽。
[0041] 实施例3