脑信号蛋白-4d结合分子在促进中风后的神经发生中的用图
【专利说明】脑信号蛋白-4D结合分子在促进中风后的神经发生中的用 途
[0001] 相关申请的相互参引
[0002] 本申请要求2013年3月15日提交的美国非临时申请No. 13/842,523以及2012 年5月11日提交的美国临时申请No. 61/646, 119的优先权，各申请的内容以引证的方式整 体纳入本文。
[0003] 电子方式提交的序列表参引
[0004] 随本申请提交的以 ASCII text 文件（文件名："1843072PC01_SequenceListing· tXt"， 大小 7, 562 字节； 生成日期 ：2013 年 5 月 10 日） 电子提交的序列表的内容通过引证 的方式整体纳入本文。
【背景技术】
[0005] 脑信号蛋白4D(SEMA4D)，也称为⑶100,是属于脑信号蛋白基因家族的一种跨膜 蛋白（例如，SEQ ID N0:1(人）；SEQ ID N0:2(小鼠））。SEMA4D以同型二聚体在细胞 表面上表达，但在细胞活化时，SEMA4D可以经由蛋白水解裂解而从细胞表面释放，以产生 sSEMA4D，其为该蛋白质的一种可溶形式，也是具有生物活性的。参见Suzuki et al, Nature Rev. Immunol. 5:159-167 (2003) ；Kikutani et al, Nature Immunol. 9:17-23 (2008)〇
[0006] SEMA4D以高水平在淋巴器官（包括脾、胸腺和淋巴结）以及非淋巴器官（如脑、心 脏、和肾脏）中表达。在淋巴器官中，SEMA4D大量表达于静息T细胞，但仅微弱表达在静息 B细胞和抗原呈递细胞（APC)，例如树突细胞（DC)中。但是，其在这些细胞中的表达在通过 各种刺激活化后被上调。可溶性SEMA4D从免疫细胞的释放也被细胞活化增加。
[0007] SEMA4D与自身免疫性脱髓鞘疾病、如多发性硬化症和某些癌症的进展有关。哺乳 动物神经系统从损伤后的崩溃至完全再生是一个重大的临床问题。由于中风或脑部的外 伤，以及神经变性疾病如阿尔茨海默氏病所导致的神经损伤的结果，是死亡和残疾的首要 原因。虽然SEMA4D通过其受体（如神经丛蛋白-BI)的信号转导对血管生成的作用是已知 的，但SEMA4D信号转导对于促进神经再生的作用尚不清楚。因此，仍然需要提供一种方案 来解决对于神经再生治疗手段的未满足的医疗需要。
【发明内容】
[0008] 本文公开了使用脑信号蛋白-4D结合分子用于促进神经再生的方法。本文给出了 证据证明SEMA4D会损害神经细胞再生的能力。根据本文中示例的本发明的方面，提供了促 进表现出至少一种中枢神经系统病症症状的患者的神经组织中神经发生的方法，该方法包 括向有需要的受试者给药有效量的分离的结合分子，其特异性地结合至和/或抑制脑信号 蛋白-4D(SEMA4D)。
[0009] 根据本文中示例的本发明的方面，提供了一种增加患有中枢神经系统病症人受试 者中祖细胞数量的方法，包括向受试者给药有效量的分离的结合分子，其特异性地结合至 脑信号蛋白-4D(SEMA4D)，其中与SEMA4D的结合起到增加祖细胞数量的作用。
[0010] 根据本文中示例的本发明的方面，提供了一种促进表现出至少一种中枢神经系统 病症症状的患者中神经组织神经再生的方法，包括向受试者给药有效量的分离的结合分 子，其特异性地结合SEMA4D，其中所述结合分子竞争性地抑制选自VX15/2503或67的参比 单克隆抗体与SEMA4D的特异性结合。
[0011] 根据本文中示例的本发明的方面，提供了一种缓解患者的中枢神经系统的疾病或 病症（例如中风）的症状的方法，包括向受试者给药有效量的分离的结合分子，其特异性地 结合至和/或抑制脑信号蛋白-4D(SEMA4D)，其中与SEMA4D的结合起到缓解所述症状的作 用。
[0012] 附图简要说明
[0013] 图1 :示意性地示出了实施例中描述的大脑中动脉（MCA)阻塞的实验方案。
[0014] 图2A-2E :示出了在大脑中动脉阻塞（MCAO)后，用同型对照（"对照IgG"，2A和 2C)或MAb 67-2 ( "抗-Sema4D-Ab"，2B和2D)治疗的如2E中所示区域的巢蛋白/Sox2被 染色的脑样品中神经干细胞/祖细胞。脑样品在MCAO之后的7天制备。
[0015] 图3A-3D :示出了用同型对照（"对照IgG"）或MAb 67-2( "抗-SEMA4D"）处理的 MCAO小鼠脑组织的（A) RT-PCR的mRNA表达，以及（B) Sox2、（C)巢蛋白和（D) PLP相对于肌 动蛋白对照的定量分析。脑组织在MCAO后7天分离。巢蛋白和Sox2是神经干前体细胞的 标志物。PLP是髓鞘形成的标志物。
[0016] 图4A-4D :示出了用同型对照或MAb 67-2处理的MCAO小鼠中，大脑和纹状体在经 处理的和未处理的半球体中的相对总体积。测量在MCAO之后的30天进行。图4A-4B示出 了用NeuN染色的大脑切片，其来自（A)I种代表性的同型对照（"对照IgG"）小鼠，和（B)I 种代表性的用抗-SEMA4D抗体处理的（"抗-SEMA4D"）小鼠。脑体积由纹状体（实线）和 半球体（虚线）的体积表示。图4C-4D分别示出了同型对照（"IgG"）小鼠和抗SEMA4D抗 体处理的（"SEMA"）小鼠的纹状体与半球体积的计算比例（L/R)。
[0017] 图5A-5B示出MCAO后30天，成熟神经细胞标志物NeuN在⑷MAb 67-2( "Sema4D-Ab"）或⑶同型对照（"对照IgG"）的MCAO小鼠中的表达情况。脑梗死 的边缘部分的纹状体用箭头标记。
[0018] 图6A-C示出了在MCAO后的第30天，在MCAO小鼠和用同型对照（" IgG"）或Mb 67-2( "SEMA4D"）处理之后的小鼠，或用假手术治疗的（"SHAM"）小鼠在明亮和黑暗状态 下在敞箱实验中的活动能力。图6A-6B分别示出了在明亮和黑暗状态下的活动能力。图6C 示出了活动能力的明亮/黑暗状态比（D/L)。
[0019] 图7示出了实施例6中描述的实验方案的示意图。
【具体实施方式】
[0020] I.定义
[0021] 应理解，术语"一个"或"一种"实体是指一种或多种所述的实体；例如"一种 抗-SEMA4D抗体"应理解为代表一种或多种抗-SEMA4D抗体。因此，在本文中术语"一个"（或 "一种""一种或多种"以及"至少一种"可以互换使用。
[0022] 术语"神经发生"在本文中定义为神经细胞在体内或体外的增殖、分化、迀移和/ 或存活。在不同的实施方案中，神经细胞是成人、胎儿、或胚胎的神经干细胞或细胞群。细 胞可以位于动物或人类的中枢神经系统或其他地方。细胞也可以位于组织、例如神经组织 中。在一些实施方案中，神经细胞是成人、胎儿、或胚胎的祖细胞或细胞群，或者包含干细胞 和祖细胞的细胞群。神经细胞包括所有脑干细胞、所有脑祖细胞，以及所有脑前体细胞。神 经发生包括在正常发育期间发生的神经发生，以及在疾病、损伤或治疗性干预（例如本文 中所描述的治疗）之后发生的神经再生。
[0023] 术语"神经细胞"、"干细胞"、"神经干细胞"、"前体细胞"、"神经干/前体细胞 (NSPC) "或"神经干/祖细胞（NSPC) "可以互换使用，是指能够自我更新和分化成神经元、 星形胶质细胞和/或少突胶质细胞的未分化细胞。
[0024] 本文中使用的术语"祖细胞"（例如神经祖细胞）是指来自于干细胞但本身不是干 细胞的细胞。一些祖细胞可以产生能够分化成多于一种细胞类型的后代。神经祖细胞包括 神经元组细胞，其产生神经元，以及神经胶质祖细胞，其产生星形胶质细胞和/或少突胶质 细胞。
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