一种耐盐基团及包括该基因的重组载体的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学和生物技术领域。涉及一种盐地碱蓬基因及包括该基因的 重组载体。
【背景技术】
[0002] 土壤盐渍化是影响干旱半干旱地区农业可持续发展的重要因素。随着近年来国家 对盐碱地的开发和利用日益重视，对抗盐基因的分离与功能研宄成为生物学的热门研宄方 向。创制耐盐作物品种是在环球工业化的大背景下取得粮食产量稳定持续增长的重要手段 之一，但是由于缺乏对作物耐盐的分子机理以及与耐盐有关基因的了解，阻碍了耐盐作物 的培育。随着对植物盐胁迫应答的分子机理研宄不断深入，特别是以拟南芥为研宄对象，植 物在盐胁迫条件下的离子平衡和耐盐反应调节途径的研宄取得了突破性的进展。目前，对 抗盐基因的分离和应用是当前利用基因工程方法进行抗盐作物培育的首要任务。
[0003] 植物耐盐是一个涉及到从细胞渗透，离子胁迫及其继发胁迫，到整株协调等诸多 生化生理反应的复杂过程。这些反映的调节无疑都是建立在基因功能的基础上。而一些基 因又是某些反应的产物。基因形态和功能的多样性使耐盐机理研宄变得更为复杂。盐地碱 蓬则是耐盐机能研宄的强有力的模式生物。
[0004] 盐地碱蓬（Suaeda salsa)又名翅碱蓬、黄须菜，为藜科（Chenopodiaceae) -年生 草本真盐生植物，肉质化真盐生植物，生长于海涂或盐场的盐滩之上，具有耐盐碱、耐旱、耐 涝等特性；盐地碱蓬在我国分布极为广泛，多数生于滨海洼地以及渠岸或田边轻度盐碱化 土壤，具有抗盐碱和耐海水的特点，是广阔滩涂土地的一种指示植物。盐地碱蓬在改善并利 用盐碱地、降低土壤盐分、减少土壤水分蒸发、促进植物抗盐机制研宄、提供抗盐种质资源 和抗盐基因工程等方面有着非常重要的意义。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种耐盐基团。
[0006] 本发明的第二个目的是提供一种耐盐基团编码的蛋白质。
[0007] 本发明的第三个目的是提供含一种耐盐基团的重组载体。
[0008] 本发明的第四个目的是提供含一种耐盐基团的宿主细胞。
[0009] 本发明的第五个目的是提供一种耐盐基团的用途。
[0010] 本发明的技术方案概述如下：
[0011] 一种耐盐基团，该耐盐基因是SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
[0012] 上述一种耐盐基团编码的蛋白质，是SEQ ID No. 2所示的氨基酸序列。
[0013] 含一种耐盐基团的重组载体。
[0014] 含一种耐盐基团的宿主细胞，是将上述重组载体导入到农杆菌菌株中，得到转化 宿主细胞。
[0015] 一种耐盐基团增强杨树或拟南芥耐盐性能的用途。
[0016] 实验证明，一种耐盐基团使杨树或拟南芥耐盐的功能得到了明显的提升。
【附图说明】
[0017] 图1为一种耐盐基团克隆电泳示意图。
[0018] 图2为耐盐基团660bp插入表达载体pK2GW7(I)后示意图。
[0019] 图 3 为 pK2GW7 (I) _S. sa660bp 转化 C58 农杆菌后 PCR 结果。
[0020] 图4为pK2GW7(I)_S. sa660bp转化拟南芥后，T3纯合体半定量PCR测定表达水平 结果。
[0021] 图5为转基因拟南芥T3纯合体抗盐实验效果照片。其中A为未经盐水处理野生 型拟南芥，B⑶为IOOmM NaCl处理，其中B为野生型拟南芥；C为低表达量拟南芥；D为高表 达量拟南芥。
[0022] 图6为转耐盐基团杨树半定量PCR测定表达水平结果。
[0023] 图7为转基因杨树抗盐实验效果。其中A为未经盐水处理野生型杨树，B⑶为 IOOmMNaCl处理，其中B为野生型杨树；C为低表达量杨树；D为高表达量杨树。
【具体实施方式】
[0024] 实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件以及手册中所述的条 件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0025] 下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，本发明的实施例是为了使本领域 的技术人员能够更好地理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
[0026] 实施例1
[0027] 1. 一种耐盐基团的克隆：（盐地碱蓬简称S. sa)
[0028] 从盐地碱蓬整株（取自天津市滨海新区北塘口东海路沿线）中收获种子，把种子 分别播种于1/2MS和l/2MS+100mmol/LNaCl溶液的培养基中，将五周后分别获得的两种植 物幼苗送华大公司进行RNA Sequncing，将得到的数据序列比对，通过基因表达差异倍数筛 选得到了差异最大的基因序列660bp(SEQ ID No. 1)，见图1。使用植物RNeasy Plant Mini Kit (Trans gene Code#EP101_01 50rxns)提取总 RNA，并且利用 EasyScript Frist-Strand cDNA SynSgesis SuperMix(Trans gene Code#AE301_03 IOOrxns)反转录出 cDNA。根据 SEQ ID No. I 设计引物 SEQ ID No. 3F :5' -CTGCATGGGCTTGGCTTG-3' 和 SEQ ID No. 4R :
[0029] 5' -GCTCCCAGACATCAATGGTAAG-3'，获得一种耐盐基团全长cDNA序列，其具体步骤 如下：
[0030] DcDNA第一链的合成
[0031] 用反转录试剂盒TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver. 3.0,以盐地碱蓬总RNA为模板， Oligo(dT)为引物，在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA第一链，反转录体系如下：
[0032]
【主权项】
1. 一种耐盐基团，其特征是该耐盐基团是SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
2. 权利要求1的一种耐盐基团编码的蛋白质，其特征在于所述蛋白质是SEQ ID No. 2 所示的氨基酸序列。
3. 含权利要求1 一种耐盐基团的重组载体。
4. 含一种耐盐基团的宿主细胞，其特征是将权利要求3的重组载体导入到农杆菌菌株 中，得到转化宿主细胞。
5. -种耐盐基团增强杨树或拟南芥耐盐性能的用途。
【专利摘要】本发明公开了一种耐盐基团及包括该基因的重组载体，耐盐基团，是SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；耐盐基团编码的蛋白质，是SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；含一种耐盐基团的重组载体。实验证明一种耐盐基团能使杨树或拟南芥耐盐的功能得到了明显的提升。
【IPC分类】A01H5-00, C12N15-29, C12N15-84, C07K14-415
【公开号】CN104611346
【申请号】CN201510084395
【发明人】王洁华, 王蕊, 魏志蓉, 罗翠, 杨少辉
【申请人】天津大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月16日