细胞因子受体链的制作方法
【专利说明】细胞因子受体链
[0001] 本申请是1999年12月13日递交的申请号为99815591. 8,发明名称为"细胞因子 受体链"的分案申请。
[0002] 本发明是1997年4月30日提交的申请序列号No. 08/841，751申请的部分继续申 请，而序列号为No. 08/841，751的申请是1996年3月1日提交的序列号No. 08/609, 572申 请的分案申请。
[0003] 本发明的领域
[0004] 本发明涉及对IL-13具有亲和力的哺乳动物细胞因子受体蛋白质（包括但不限于 人类和鼠科动物受体蛋白质），其片段和用来表达这种蛋白质的重组多核苷酸和细胞。
[0005] 本发明的背景
[0006] 已有多种调节分子，称为细胞因子被确定，包括白细胞介素-13(IL-13)。IL-13 的多种蛋白质形式和编码多种形式的IL-13活性的DNA也在McKenzie等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90 :3735 (1993) ;Minty 等人，自然 362 :248 (1993);和 Aversa 等人， W094/04680中作了描述。因此，"IL-13"包括具有这些文献中所描述的序列和/或生物活 性的蛋白质，不论是通过重组基因工程技术制备的，从自然产生因子或用其他因子诱导产 生因子的细胞源中提纯的，或是通过化学技术合成的，或前述技术的组合中获得的。
[0007] IL-13是与几种生物活性的产生有关的细胞因子，包括诱导IgG4和IgE转换，包含 在人类未成熟B细胞中[Punnonen等人，免疫学期刊，152 :1094(1994)];在正常人类B细胞 中诱导种系 IgE 重链（ε )转录和 CD23 表达[Punnonen 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 : 3730 (1993)];在存在⑶40L或抗⑶40mAb情况下诱导B细胞增殖[Cocks等人，国际免疫学， 5 :657 (1993)]。尽管IL-13的许多活性与IL-4的活性相似，但与IL-4相反，IL-13对活化 的T细胞或T细胞克隆体没有生长促进作用[Zurawski等人，EMBO J. 12 :2663 (1993)]。
[0008] 如同多数细胞因子，IL-13通过与在靶细胞表面的IL-13受体（"IL-13R"）相互 作用表现出某些生物活性。IL-13R和IL-4受体（"IL-4R"）具有相同的组分，其是受体 活化所需的；然而，IL-13不与用130kD IL-4R转染的细胞结合（Zurawski等人，同上）。 因此，IL-13R必须含有至少一条其他配体结合链。细胞因子受体通常含有两条或三条链。 IL-13的一条配体结合链的克隆最近已有报道（Hilton等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 93 : 497-501)〇
[0009] 因此需要鉴别和克隆IL-13R的任何其他IL-13结合链的序列，以使IL-13R蛋白 质可为各种目的制备，包括制备治疗试剂，筛查IL-13结合受体的抑制剂和受体信号传递。
[0010] 本发明的概述
[0011] 依据本发明，公开了编码白细胞介素-13受体的IL-13结合链的多核苷酸，包括但 不限于鼠科动物和人类受体的多核苷酸。在某些实施方案中，本发明提供了包括从下列组 中选取的核苷酸序列的分离多核苷酸：
[0012] (a)从核苷酸256到核苷酸1404的SEQ ID NO :1核苷酸序列；
[0013] (b)从核苷酸103到核苷酸1242的SEQ ID NO :3核苷酸序列；
[0014] (c)由于遗传密码的简并从（a)或（b)定义的核苷酸序列的序列中变化而来的核 苷酸序列；
[0015] (d)在严格条件下能与（a)或（b)定义的核苷酸杂交的核苷酸序列；
[0016] (e)编码（a)或（b)定义的序列的物种同源体的核苷酸序列；
[0017] (f) (a)或（b)定义的核苷酸序列的等位基因变体。
[0018] 较好地，核苷酸序列编码具有人类IL-13受体生物活性的蛋白质。核苷酸序列可 操作地与表达控制序列结合。在较好的实施方案中，多核苷酸包括从核苷酸256到核苷酸 1404的SEQ ID NO :1的核苷酸序列；从核苷酸319到核苷酸1257的SEQ ID NO :1的核苷 酸序列；从核苷酸1324到核苷酸1404的SEQ ID NO :1的核苷酸序列；从核苷酸103到核 苷酸1242的SEQ ID NO :3的核苷酸序列；从核苷酸178到核苷酸1125的SEQ ID NO :3的 核苷酸序列；从核苷酸1189到核苷酸1242的SEQ ID NO :3的核苷酸序列。
[0019] 本发明还提供了含有编码包括在下列组中选取的氨基酸序列的肽或蛋白质的核 苷酸序列的分离多核苷酸：
[0020] (a) SEQ ID NO :2 的氨基酸序列；
[0021] (b)从氨基酸22到氨基酸334的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0022] (c)从氨基酸357到氨基酸383的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0023] (d) SEQ ID NO :4 的氨基酸序列；
[0024] (e)从氨基酸26到氨基酸341的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0025] (f)从氨基酸363到氨基酸380的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0026] (g)具有IL-13受体结合链生物活性的（a)-(f)的片段。
[0027] 其他较好的实施方案编码从氨基酸1到331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列和从氨 基酸26到331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列。
[0028] 本发明还提供了用多核苷酸转化的宿主细胞，较好地是哺乳动物细胞。
[0029] 在其他实施方案中，本发明提供了制备IL_13bc蛋白质的方法。该方法包括：
[0030] (a)在适当的培养介质中培养本发明的宿主细胞培养物；
[0031] (b)从培养物中提纯IL_13bc蛋白质。
[0032] 本发明还提供了包括在下列组中选取的氨基酸序列的分离IL_13bc蛋白质：
[0033] (a) SEQ ID NO :2 的氨基酸序列；
[0034] (b)从氨基酸22到氨基酸334的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0035] (c)从氨基酸357到氨基酸383的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；
[0036] (d) SEQ ID NO :4 的氨基酸序列；
[0037] (e)从氨基酸26到氨基酸341的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0038] (f)从氨基酸363到氨基酸380的SEQ ID NO :4的氨基酸序列；
[0039] (g)具有IL-13受体结合链生物活性的（a)-(f)的片段。
[0040] 较好地，蛋白质包括SEQ ID NO :2的氨基酸序列；从氨基酸22到氨基酸334的SEQ ID NO :2的氨基酸序列；SEQ ID NO :4的氨基酸序列；从氨基酸26到氨基酸341的SEQ ID NO :4的氨基酸序列。在其他较好的实施方案中，特异氨基酸序列组成融合蛋白（含有不是 从IL-13bc衍生的其他氨基酸序列）。较好的融合蛋白质包括抗体片段，如Fc片段。特别 较好的实施方案包括从氨基酸1到氨基酸331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列和从氨基酸26 到氨基酸331的SEQ ID NO :2的氨基酸序列。
[0041] 本发明还提供了含有本发明的蛋白质和药学可接受的载体的药学组合物。
[0042] 本发明进一步提供了包括与本发明的蛋白质特异反应的抗体的组合物。
[0043] 本发明还提供了鉴别结合IL_13bc或IL-13受体的抑制剂的方法。这些方法包 括：
[0044] (a)将IL_13bc蛋白质或其片段与IL-13或其片段结合，所说的结合形成第一结合 混合物；
[0045] (b)测定在第一结合混合物中蛋白质和IL-13或片段结合的量；
[0046] (c)将一种化合物与蛋白质和IL-13或片段结合形成第二结合混合物；
[0047] (d)测定在第二结合混合物中结合的量；
[0048] (e)比较在第一结合混合物中的结合量和在第二结合混合物中的结合量；
[0049] 其中当第二结合混合物的结合量降低发生时，化合物能抑制IL-13与IL-13受体 的结合。
[0050] 本发明还提供了通过这些方法鉴别的IL-13R的抑制剂和含抑制剂的药学组合 物。
[0051] 本发明还公开了在哺乳动物受试体中抑制IL-13与IL-13bc蛋白质或IL-13受体 结合的方法，其包括服用治疗上有效量的含有IL_13bc蛋白质，IL-13bc或IL-13R抑制剂 或IL-13bc蛋白质抗体的组合物。
[0052] 本发明还提供了改善IL-13活性的方法，其包括将具有IL-13活性的蛋白质与权 利要求11的蛋白质结合，并将这样的结合物与除了 IL_13bc外至少表达IL-13R-条链的 细胞接触。较好地，接触步骤通过给哺乳动物受试体服用治疗上有效量的这种结合物来实 施。
[0053] 本发明还提供了在哺乳动物受试体内治疗与IL-13相关的病况的方法。所说的方 法包括服用治疗上有效量的含有IL-13拮抗剂和药学可接受的载体的组合物。其他方法提 供了一种在哺乳动物受试体中抑制IL-13和IL-13bc蛋白质相互作用的方法，包括服用治 疗上有效量的含有IL-13拮抗剂和药学可接受的载体的组合物。较好地，拮抗剂是从下列 组中选取的，包括：IL-13bc蛋白质，IL-13Ra 1的可溶形式，IL-13或其IL-13结合片段的 抗体，IL_13bc或其IL_13bc结合片段的抗体，IL-13R a 1或其IL-13R a 1结合片段的抗体， IL-4的IL-13R结合突变体，能抑制IL-13与IL-13bc相