法氏囊病的重组法氏囊蛋白工程疫苗多 肽及其组合物。其含有主要结构蛋白VP3蛋白B细胞表位、VP2蛋白B细胞中和抗原表位 和T细胞表位及禽细胞因子白介素15(chIL-15)。所述的法氏囊蛋白工程疫苗蛋白或多肽 或药学上可接受的盐以及表达抗原表位蛋白所需要的载体。载体也可以包括单独编码各抗 原表位的序列，串联可以通过遗传工程方法进行。所述疫苗也包括非免疫活性物质，即为各 多肽的连接部分，不具有抗原表位的免疫原性，也不具有任何佐剂活性，主要有纯化标签、 接头肽、化学修饰部分、N端信号肽和C端多聚腺苷酸等。所述药学上可接受的盐是指无毒 性、刺激和变态反应，适用于人或动物组织的盐。非活性物质和药学上可接受的盐为本领域 技术人员所熟知。重组法氏囊蛋白工程疫苗多肽氨基酸序列如下：
[0012] LGMAQPTQNSAGARRRPESQKTHVKSICLQYQLYLLLNSYFFCLLKNKTGLTIFFLCAYVPKTEANHCK WSDVLKDLELIKTSEDIDVSLYTANTYEDIECQEPVMRCFFLEMKVILHECDIKKCSRKHDVRNIWKNGNARFATYQ LNSTTAKKCKECEEYEEKNFTEFIQSFVKVIQRECRKYANGDIPGCKTNLQDQTQGGTTGPASIPDDTLEKHTLRSE TSTGSGLQSNGNYKFGGVATCDSSDRPRIYTIAAANDYQFSSQYQADGGSGPNPELAKNLITEYGRFDPGAMNYTKL ILSERDRLGIKTVWPTREYTDFREYFMEGGPSCDPNAHIMRNFLANAPQAGSKSQRAKYGTAGYGVEARGPTPEEAQ REKDTRISKKMEGSGNGHRGPSPGQLKYWQNTREIPDPNEDYLDYVHAEKSRLASEEQIGSGNHGRGPNQEQMKDLL LTAMEMKHRNPRRAPPKPKPKPNAPTQRPPGRLGR
[0013] 在第二方面，本发明提供了一种核苷酸分子，其编码本发明第一方面所述的法氏 囊蛋白工程疫苗多肽。本发明中核苷酸可以是RNA形式，DNA形式，通过人工合成方式合成 多抗原表位串联序列和细胞因子序列，然后经过基因工程操作连接后克隆入载体，转化入 大肠杆菌，筛选、发酵、纯化后获得法氏囊蛋白工程疫苗多肽。在本发明中可以对该核酸进 行常规的分子生物学操作，如：PCR、限制性内切酶酶切、连接等，核酸设计5'端和3'端均加 入酶切位点。优选本发明中的核苷酸序列如下：
[0014] CTG GGG ATG GCA CAG CCA ACA CAA MC TCT GCC GGA GCA CGG AGAAGG CCG GAG AGT CAG AAA ACA CAT GTG AAA AGT ATT TGT CTC CAG TACCAA CTG TAT CTA CTT TTG AAC AGC TAT TTC TTT TGC CTT TTA AAG AAT MGACT GGA CTA ACC ATC TTC TTC CTA TGT GCT TAT GTA CCA AAG ACA GAAGCA AAT CAC TGT AAG TGG TCA GAC GTT CTG AM GAT TTG GAG CTG ATCAAG ACA TCT GM GACATT GAC GTCAGT TTA TAT ACT GCA MC ACA TACGAG GAT ATA GM TGC CAG GAA CCT GTA ATG AGA TGT TTT TTT TTA GAGATG AAA GTG ATT CTT CAC GAA TGT GAT ATC AAA AAA TGT AGT AGG AAGCAT GAT GTA CGG AAC ATA TGG AM AAT GGA AAT GCA AGA TTT GCA ACTTAC CAG TTG AAT TCC ACA ACA GCA AAA AAA TGC AM GAA TGT GAA GAGTAT GAA GAAAAAAAT TTT ACA GAA TTT ATA CAG AGT TTT GTA AAG GTTATA CAG AGG GM TGC AGA AAA TAC GCT AAC GGT GAT ATC CCA GGT TGCAAG ACA AAC CTG CAA GAT CAA ACC CAA GGT GGT ACA ACC GGA CCG GCGTCC ATT CCG GAC GAC ACC CTA GAG AAG CAC ACT CTC AGG TCA GAG ACCTCG ACC GGT TCT GGT CTG CAG AGC AAT GGG AAC TAC AAG TTC GGT GGTGTA GCA ACA TGT GAC AGC AGT GAC AGG CCC AGA ATC TAC ACC ATA GCTGCA GCC AAT GAT TAC CAA TTC TCA TCA CAG TAC CAA GCA GAT GGA GGTTCT GGT CCA AAT CCT GAA CTA GCA AAG AAC CTG ATC ACA GAA TAC GGCCGA TTT GAC CCA GGA GCC ATG AAC TAC ACA AAA TTG ATA CTG AGT GAGAGG GAC CGT CTT GGT ATC MG ACC GTA TGG CCA ACA AGG GAG TAC ACTGAC TTT CGC GAG TAC TTC ATG GAG GGT GGT CCA TCT TGT GAC CCC AACGCC CAT CGG ATG CGT AAT TTT CTC GCA AAC GCA CCA CAG GCA GGC AGCAAG TCG CAA AGA GCC MG TAC GGG ACA GCA GGC TAC GGA GTG GAG GCCCGA GGC CCC ACA CCA GAG GAG GCA CAG AGG GAA AM GAC ACA CGG ATCTCA AAG AAG ATG GAG GGT TCT GGT AAT GGG CAC AGG GGG CCT AGC CCCGGC CAG CTA AAG TAC TGG CAG AAC ACA CGA GAA ATA CCT GAT CCA AACGAG GAC TAC CTA GAC TAC GTG CAT GCA GAG AAG AGC CGG TTG GCA TCAGAA GAA CAA ATC GGT TCT GGT AAC CAT GGG CGT GGC CCC AAC CM GAACAG ATG AAA GAT CTG CTC TTG ACT GCG ATG GAG ATG AAG CAT CGC AATCCC AGG CGG GCT CCA CCA MG CCC AAG CCA AAA CCC AAT GCT CCA ACACAGAGACCC CCT GGT CGG CTG GGC CGC
[0015] 在第三方面，本发明提供了一种载体，其除了含有本发明第二方面所述的编码法 氏囊蛋白工程疫苗核苷酸分子，还含有与该核苷酸序列可操作的连接，在原核细胞表达 (转录和翻译）所需的表达控制元件。最基本的表达控制元件包括启动子、转录终止子、增 强子，选择性标记等，这些调控元件为本领域所熟知。本发明中优选大肠杆菌BL21 (DE3， Plys)作为表达载体。
[0016] 在第四方面，本发明提供了一种宿主细胞，其含有本发明第三方面所述的载体。宿 主细胞经转化或转染含有本发明所述编码蛋白的基因序列，而后经检测具有良好的的遗传 和表达稳定性后，可用于发酵表达生产所需的法氏囊蛋白工程疫苗多肽。
[0017] 在第五方面，本发明提供了一种法氏囊蛋白工程疫苗的制备方法，其包括以下步 骤：工程菌发酵表达法氏囊疫苗多肽，经过粗纯化与精细纯化工艺以及后续乳化工艺，获得 所需要的多肽。其中涉及的方法包括但不限制于菌体破碎、包涵体洗涤、离心、变性、亲和层 析、疏水层析、阴离子交换色谱、反相色谱、复性、乳化等。本发明中涉及的制备方法为本领 域技术人员所熟知。
[0018] 在第六方面，本发明提供了一种用于预防禽法氏囊病的重组法氏囊蛋白工程疫 苗，其包括本发明第一方面所述的多肽以及药学上可接受的载体。所述法氏囊蛋白工程疫 苗能够预防禽法氏囊病的爆发。本发明所述的药学上可接受的载体为免疫增强剂或免疫佐 剂，优选免疫佐剂为进口白油佐剂。
[0019] 在第七方面，本发明提供了第六方面所述的重组法氏囊蛋白工程疫苗的应用。疫 苗可以一定有效剂量肌肉注射，皮内或皮下注射接种动物，能够产生足够量的抗体及细胞 因子，提供抗病毒活性，保护动物免于法氏囊病毒流行毒株的攻击。此外，在本发明的实施 方案中，通过对疫苗进行体液免疫及细胞免疫检测、靶动物攻毒对比试验、实验室安全性试 验等，表明本发