具有彡lilM、彡100nM、彡10nM、 彡 InM、彡 0? InM、彡 0? OlnM 或彡 0? OOlnM(例如 1(T8M 或更低、例如 1(T8M 至 1(T13M、例如 1(T9M 至1(T13M)的解离常数（Kd)。
[0046] "亲和力"指分子（例如抗体）的单一结合位点与其结合配偶体（例如抗原）之间 非共价相互作用总和的强度。除非另外指示，如本文中使用的，"结合亲和力"指反映结合对 的成员（例如抗体和受体）之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的 亲和力通常可以用解离常数（KD)来表述，其为解离与结合速率常数（分别为和 的比率。如此，相等的亲和力可能包含不同的速率常数，只要速率常数的比率保持相同。亲 和力可以通过本领域知道的确立方法来测量，包括本文中描述的那些方法。用于测量亲和 力的具体方法是表面等离振子共振（SPR)。
[0047] 依照一个实施方案，通过表面等离振子共振使用BIACORE? T100仪（GE Healthcare)于25°C用固定化于CM5芯片上的配体（例如效应器模块受体、Fc受体或革巴抗 原）测量K D。简言之，将羧甲基化的葡聚糖生物传感器芯片（CM5, GE Healthcare)依照供 应商说明书用N-乙基-N' -(3-二甲基氨丙基）-碳二亚胺氢氯化物（EDC)和N-羟基琥珀 酰亚胺（NHS)活化。在以10 ill/分钟的流速注射前，将重组配体用10mM醋酸钠pH 5. 5稀 释至0. 5-30 ii g/ml以实现约100-5000响应单位（RU)的偶联蛋白。在注射配体后，注射1M 乙醇胺以封闭未反应的基团。对于动力学测量，将免疫缀合物的3至5倍连续稀释物（范 围为约 O.OlnM 至 300nM)在 HBS-EP+(GE Healthcare，10mM HEPES，150mM NaCl，3mM EDTA， 0. 05%表面活性剂P20, pH 7. 4)中于25°C以约30-50 yl/分钟的流速注射。使用简单的 1对lLangmuir结合模型（BIACORE? T100评估软件版本1. 1. 1)通过同时拟合结合和 解离传感图来计算结合速率和解离速率〇%8)。平衡解离常数（KD)计算为比率k 解离/k结合。参见例如 Chen et al.，J Mol Biol 293,865_881(1999)。
[0048] "降低的结合"，例如降低的对Fc受体或CD25的结合，指相应相互作用的亲和力降 低，如例如通过SPR测量的。为了清楚，该术语还包括亲和力降低至0 (或低于分析方法的 检测限），即完全消除相互作用。相反地，"增加的结合"指相应相互作用的结合亲和力的升 商。
[0049] 如本文中使用的，就抗体、效应器模块等而言的术语"第一"和"第二"为了在有超 过一个每类模块时便于区分而使用。除非明确如此陈述，这些术语的使用不意图赋予免疫 缀合物的特定次序或取向。
[0050] 如本文中使用的，术语"效应器模块"指例如经由信号转导或其它细胞途径影响 细胞活性的多肽例如蛋白质或糖蛋白。因此，本发明的效应器模块可与受体介导的信号传 导关联，该信号传导从细胞膜外部传递信号以调控携带一种或多种针对该效应器模块的受 体的细胞中的应答。在一个实施方案中，效应器模块能引发携带一种或多种针对该效应器 模块的受体的细胞中的细胞毒性应答。在另一个实施方案中，效应器模块能引发携带一种 或多种针对该效应器模块的受体的细胞中的增殖性应答。在另一个实施方案中，效应器模 块能引发携带针对该效应器模块的受体的细胞中的分化。在另一个实施方案中，效应器模 块能改变携带针对该效应器模块的受体的细胞中内源性细胞蛋白质的表达（即上调或下 调）。效应器模块的非限制性例子包括细胞因子、生长因子、激素、酶、底物和辅因子。效应 器模块可以以多种构造与抗体联合以形成免疫缀合物。
[0051] 如本文中使用的，术语"细胞因子"指介导和/或调节生物学或细胞功能或过程 (例如免疫、炎症和造血作用）的分子。如本文中使用的，术语"细胞因子"包括"淋巴因 子"、"趋化因子"、"单核因子"和"白介素"。可用的细胞因子的例子包括但不限于，GM-CSF、 IL-1 a、IL-1 P、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IFN- a、IFN- 3、 IFN-Y、MIP-la、MIP-iP、TGF-P、TNF-a 和 TNF-P。具体的细胞因子是 IL-2 和 IL-12。 如本文中使用的，术语"细胞因子"还意为包括细胞因子变体，其在相应野生型细胞因子的 氨基酸序列中包含一个或多个氨基酸突变，如例如记载于Sauv6 et al.，Proc Natl Acad Sci USA 88,4636-40(1991) ;Hu et al.，Blood 101,4853-4861(2003)及美国专利公开 文本 No.2003/0124678 ;Shanafelt et al.，Nature Biotechnol 18,1197-1202(2000); Heaton et al.，Cancer Res 53, 2597-602(1993)及美国专利 No. 5, 229, 109 ;美国专利公 开文本 No. 2007/0036752 ;W0 2008/0034473 ;W0 2009/061853 ;或上文和下文中的 IL-2 变 体。
[0052] 如本文中使用的，术语"单链"指包含通过肽键线性连接的氨基酸单体的分子。在 一个实施方案中，所述效应器模块是单链效应器模块。单链效应器模块的非限制性例子 包括细胞因子、生长因子、激素、酶、底物和辅因子。当效应器模块是细胞因子且感兴趣的 细胞因子正常在自然中以多聚体发现时，多聚体细胞因子的每个亚基由该效应器模块的单 链连续编码。因此，可用的单链效应器模块的非限制性例子包括GM-CSF、IL-1 a、IL-1 3、 IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-a、IFN-P、IFN-y、MIP-1a、 MIP-1 3、TGF- 3、TNF- a 和 TNF- 3。
[0053] 如本文中使用的，术语"对照效应器模块"指未缀合的效应器模块。例如，当将本 文中描述的IL-2免疫缀合物与对照效应器模块比较时，对照效应器模块是游离的、未缀合 的IL-2。类似地，例如当将IL-12免疫缀合物与对照效应器模块比较时，对照效应器模块是 游离的、未缀合物的IL_12(例如展现为异二聚体蛋白质，其中p40和p35亚基仅分享二硫 键）。
[0054] 如本文中使用的，术语"效应器模块受体"指能特异性结合效应器模块的多肽分 子。例如，在IL-2是效应器模块的情况中，结合IL-2分子（例如包含IL-2的免疫缀合物） 的效应器模块受体是IL-2受体。类似地，例如在IL-12是免疫缀合物的效应器模块的情况 中，效应器模块受体是IL-12受体。在效应器模块特异性结合超过一种受体的情况中，所有 特异性结合效应器模块的受体均为该效应器模块的"效应器模块受体"。
[0055] 术语"抗体"在本文中以最广义使用且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗 体、多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）、和抗体片段，只要它们展现出期望的 抗原结合活性且包含Fc区或与免疫球蛋白Fc区等同的区域。
[0056] 术语"全长抗体"和"完整抗体"在本文中可互换使用，指具有与天然免疫球蛋白 结构实质性相似的结构的抗体。
[0057] 术语"免疫球蛋白"指具有天然存在的抗体结构的蛋白质。例如，IgG类的免疫 球蛋白是约150, 000道尔顿的异四聚体糖蛋白，其由二硫键连接的两条轻链和两条重链构 成。从N端至C端，每条重链具有可变区（VH，也称为可变重域或重链可变域），接着是3个 恒定域（CH1、CH2和CH3,也称为重链恒定区）。类似地，从N端至C端，每条轻链具有可变区 (VL，也称为可变轻域或轻链可变域），接着是恒定轻（CL)域（也称为轻链恒定区）。免疫 球蛋白的重链可以归入称为a (IgA)、S (IgD)、e (IgE)、Y (IgG)或ii (IgM)的5类之一， 其中一些可以进一步分成亚类，例如 Yi(IgGi)、Y2(IgG2)、Y3(IgG 3)、Y4(IgG4)、aJIgAi) 和a 2(IgA2)。基于其恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白的轻链可以归入称为卡帕（k)和 拉姆达（A)的两类之一。免疫球蛋白基本由经由免疫球蛋白铰链区连接的两个Fab分子 和Fc区组成。
[0058] "抗体片段"指完整抗体外的分子，其包含完整抗体中结合与完整抗体结合的抗原 的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab' _SH、F(ab'）2、双抗体、线性抗 体、单链抗体分子（例如scFv)、单域抗体、和自抗体片段形成的多特异性抗体。对于某些抗 体片段的综述，参见Hudson et al.，Nat Med 9, 129-134 (2003)。对于scFv片段的综述，参 见例如Pliickthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore