eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994);还可参见TO 93/16185; 及美国专利No. 5, 571，894和No. 5, 587, 458。对包含补救受体结合表位残基且具有延长的 体内半衰期的Fab和F(ab'）2片段的论述，参见美国专利No. 5, 869, 046。双抗体是具有 两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价或双特异性的。参见，例如EP 404, 097 ;W0 1993/01161 ;Hudson et al.，Nat Med 9,129-134(2003);及Hollinger et al.，Proc Natl Acad Sci USA 90,6444-6448(1993)。三抗体和四抗体也记载于 Hudson et al.，Nat Med 9, 129-134(2003)。单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域、或整个或部分轻链可变 域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体（Domantis, Inc.，Waltham,MA ; 参见例如美国专利No. 6, 248, 516B1)。可以通过各种技术来制备抗体片段，包括但不限于对 完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞（例如大肠杆菌或噬菌体）产生，如本文 中描述的。
[0059] 术语"抗原结合域"指包含特异性结合部分或整个抗原且与其互补的区域的抗体 部分。抗原结合域可由例如一个或多个抗体可变域（也称为抗体可变区）提供。具体地， 抗原结合域包含抗体轻链可变区（VL)和抗体重链可变区（VH)。
[0060] 术语"可变区"或"可变域"指牵涉抗体对抗原结合的抗体重链或轻链的域。天然抗 体的重链和轻链的可变域（分别为VH和VL) -般具有类似的结构，每个域包含4个保守的 框架区（FR)和 3 个高变区（HVR)。参见，例如 Kindt et al.，Kuby Immunology, 6th ed.，W. H. Freeman and Co.，page 91(2007)。单个VH或VL域可能足以赋予抗原结合特异性。 [0061] 如本文中使用的，术语"高变区"或"HVR"指抗体可变域中序列中高度可变和/或 形成结构上定义的环（"高变环"）的每个区域。通常，天然的四链抗体包含六个HVR;三个在 乂11中〇11、112、113)，三个在￥1中仏1、12、13)。爪^一般包含来自高变环和/或来自互补性决 定区（CDR)的氨基酸残基，后者具有最高序列变异性和/或涉及抗原识别。除了 VH中CDR1 外，⑶R-般包含形成高变环的氨基酸残基。高变区（HVR)也称为"互补性决定区"（⑶R)， 并且在述及形成抗原结合区的可变区部分时这些术语在本文中可交换使用。此特定区域已 由 Kabat et al. , U. S. Dept, of Health and Human Services, Sequences of Proteins of Immunological Interest(1983)及 Chothia et al.，J Mol Biol 196:901-917(1987)描 述，其中定义包括在彼此比较时氨基酸残基的重叠或子集。然而，应用任一种定义来指抗体 或其变体的CDR意图在如本文中定义和使用的术语的范围内。涵盖如由上文引用的每篇参 考文献定义的CDR的适宜的氨基酸残基在下表1中列出作为比较。涵盖特定CDR的确切残 基数将随着CDR的序列和大小而变化。在给定抗体的可变区氨基酸序列情况下，本领域技 术人员可以常规确定哪些残基构成特定CDR。
[0062]表 1:CDR 定义1
[0063]
【主权项】
1. (a)包含工程化改造成具有降低的效应器功能的第一抗体和效应器模块的免疫缀合 物和（b)工程化改造成具有升高的效应器功能的第二抗体的组合，其用于在有所需要的个 体中治疗疾病。
2. 权利要求1的组合，其中所述效应器模块为细胞因子。
3. 权利要求1或2的组合，其中所述效应器模块为选自下组的细胞因子：IL-2， GM-CSF，IFN-a，和 IL-12。
4. 权利要求1至3任一项的组合，其中所述效应器模块为IL-2。
5. 权利要求4的组合，其中所述IL-2效应器模块为突变型IL-2效应器模块，其包含 至少一处与非突变型IL-2效应器模块相比降低或消除突变型IL-2效应器模块对IL-2受 体a亚基的亲和力但保留突变型IL-2效应器模块对中间亲和力IL-2受体的亲和力的氨 基酸突变，特别是氨基酸替代。
6. 权利要求1至5任一项的组合，其中所述第一抗体是全长抗体，特别是IgG类抗体， 更特别地是IgGl亚类抗体。
7. 权利要求1至6任一项的组合，其中所述效应器模块与所述第一抗体分享氨基或羧 基末端肽键。
8. 权利要求1至7任一项的组合，其中所述第一抗体工程化改造成具有降低的对活化 性Fc受体的结合，特别是降低的对人FcyRllla的结合。
9. 权利要求1至8任一项的组合，其中所述第一抗体在免疫球蛋白重链（Kabat编号方 式）位置P329处包含氨基酸替代。
10. 权利要求1至9任一项的组合，其中所述第一抗体在免疫球蛋白重链中包含氨基酸 替代 L234A、L235A 和 P329G。
11. 权利要求1至10任一项的组合，其中所述免疫缀合物基本上由效应器模块，特别是 单链效应器模块，和工程化改造成具有降低的效应器功能的第一抗体组成，其中所述效应 器模块在其氨基末端氨基酸处融合至所述第一抗体的重链之一的羧基末端，任选经由肽接 头。
12. 权利要求1至11任一项的组合，其中所述第一抗体针对肿瘤细胞上或肿瘤细胞环 境中存在的抗原。
13. 权利要求1至12任一项的组合，其中所述第二抗体是全长IgG类抗体，特别是IgGl 亚类抗体。
14. 权利要求1至13任一项的组合，其中所述效应器功能选自下组：对活化性Fc受体 的结合，ADCC，ADCP，CDC，和细胞因子分泌。
15. 权利要求1至14任一项的组合，其中所述效应器功能为升高的对活化性Fc受体的 结合和/或升高的ADCC。
16. 权利要求1至15任一项的组合，其中通过在Fc区中引入一处或多处氨基酸突变或 通过修饰Fc区中的糖基化来工程化改造所述第二抗体。
17. 权利要求1至16任一项的组合，其中与非工程化抗体相比，所述第二抗体工程化改 造成在Fc区中具有升商比例的非岩澡糖基化募糖。
18. 权利要求1至17任一项的组合，其中所述第二抗体针对肿瘤细胞上存在的抗原。
19. 权利要求1至18任一项的组合，其中所述疾病为通过刺激效应细胞功能能治疗的 病症，特别是癌症。
20. 权利要求1至19任一项的组合，其中所述个体为哺乳动物，特别是人。
21. -种药物组合物，其在药学可接受载体中包含（a)包含工程化改造成具有降低的 效应器功能的第一抗体和效应器模块的免疫缀合物，和（b)工程化改造成具有升高的效应 器功能的第二抗体。
22. (a)包含工程化改造成具有降低的效应器功能的第一抗体和效应器模块的免疫缀 合物和（b)工程化改造成具有升高的效应器功能的第二抗体在制备用于在个体中治疗疾 病的药物中的用途。
23. -种在个体中治疗疾病的方法，其包括以治疗有效量对该个体施用（a)包含工程 化改造成具有降低的效应器功能的第一抗体和效应器模块的免疫缀合物和（b)工程化改 造成具有升高的效应器功能的第二抗体的组合。
24. -种在个体中刺激效应细胞功能的方法，其包括以有效刺激效应细胞功能的量对 个体施用（a)包含工程化改造成具有降低的效应器功能的第一抗体和效应器模块的免疫 缀合物和（b)工程化改造成具有升高的效应器功能的第二抗体的组合。
25. -种意图用于治疗疾病的试剂盒，其在相同的容器中或在分开的容器中装有（a) 包含工程化改造成具有降低的效应器功能的第一抗体和效应器模块的免疫缀合物，（b)工 程化改造成具有升高的效应器功能的第二抗体，和（c)任选的包装插页，其包括指导作为 治疗疾病的方法使用该组合治疗的印刷说明书。
26. 如说明书描述的发明。
【专利摘要】本发明提供(a)包含工程化改造成具有降低的效应器功能的第一抗体和效应器模块的免疫缀合物和(b)工程化改造成具有升高的效应器功能的第二抗体的组合，其用于在有所需要的个体中治疗疾病。进一步提供包含该组合的药物组合物，及使用它们的方法。
【IPC分类】C07K16-30, A61P35-00, C07K16-32, C07K16-28, A61K47-48, C07K16-40
【公开号】CN104662045
【申请号】CN201380029551
【发明人】C·格迪斯, C·克莱因, V·G·尼克利尼, P·乌马纳
【申请人】罗切格利卡特公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年8月5日
【公告号】CA2872195A1, EP2882777A1, US20140072528, WO2014023679A1