缩到10ml。
[0030]5)将浓缩液缓慢倒入用盐酸处理过的强酸性阳离子交换树脂柱中，使氨基酸与树脂结合，停留15min后，先用250ml的蒸饱水以3ml/min的速度洗涤交换柱杂质除去杂质，然后用200ml 4mol/L的氨水以3ml/min的速度洗脱交换柱，将收集的洗脱液真空浓缩至干，得到氨基酸样品0.372g，氨基酸含量检测为96.0%。
[0031]6)本实施例中，用氨基酸自动分析仪采用离子交换色谱-茚三酮柱后衍生法测定样品中氨基酸的含量。
[0032]实施例2
[0033]I)将25g PEG800和50g PEG6000加入到225g 20%的硫酸钠水溶液中，搅拌使其溶解，配制成300g的双水相萃取液。
[0034]2)将20g自然晾干的烟草花蕾放入闪式提取器中，加入步骤I)中配制的双水相萃取液，启动闪式提取器，在闪式提取器的内刀刃转速为25000r/min及室温条件下萃取45s。
[0035]3)萃取后过滤除去残渣，得到滤液，静置3h分相，烟草中游离氨基酸被萃取到上层O
[0036]4)采用虹吸的方式，将双水相的上层提取液吸取出来，在70°C真空条件下将提取液浓缩到8ml。
[0037]5)将浓缩液缓慢倒入用盐酸处理过的强酸性阳离子交换树脂柱中，使氨基酸与树脂结合，停留15min后，先用200ml的蒸饱水以3ml/min的速度洗涤交换柱杂质除去杂质，然后用150ml 4mol/L的氨水以3ml/min的速度洗脱交换柱，将收集的洗脱液真空浓缩至干，得到氨基酸样品0.380g，氨基酸含量检测为94.6%。
[0038]6)本实施例中，用氨基酸自动分析仪采用离子交换色谱-茚三酮柱后衍生法测定样品中氨基酸的含量。
[0039]实施例3
[0040]I)将45g PEG800和45g PEG6000加入到210g 25%的硫酸钠水溶液中，搅拌使其溶解，配制成300g的双水相萃取液。
[0041]2)将20g自然晾干的烟草花蕾放入闪式提取器中，加入步骤I)中配制的双水相萃取液，启动闪式提取器，在闪式提取器的内刀刃转速为25000r/min及室温条件下萃取30s。
[0042]3)萃取后过滤除去残渣，得到滤液，静置3h分相，烟草中游离氨基酸被萃取到上层O
[0043]4)采用虹吸的方式，将双水相的上层提取液吸取出来，在70°C真空条件下将提取液浓缩到5ml。
[0044]5)将浓缩液缓慢倒入用盐酸处理过的强酸性阳离子交换树脂柱中，使氨基酸与树脂结合，停留15min后，先用10ml的蒸饱水以3ml/min的速度洗涤交换柱杂质除去杂质，然后用100ml4mol/L的氨水以3ml/min的速度洗脱交换柱，将收集的洗脱液真空浓缩至干，得到氨基酸样品0.366g，氨基酸含量检测为95.9%。
[0045]6)本实施例中，用氨基酸自动分析仪采用离子交换色谱-茚三酮柱后衍生法测定样品中氨基酸的含量。
[0046]尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变型和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。
【主权项】
1.一种从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于它包括以下步骤: (1)将PEG聚合物加入到无机盐的水溶液中，配制成PEG聚合物质量分数为20%?30%、无机盐质量分数为15%?25%的双水相萃取液； (2)将自然晾干的烟草花蕾放入闪式提取器中，按照闪式提取料液质量比为1:10?15加入配置好的双水相萃取液，在闪式提取器的内刀刃转速为25000r/min及室温条件下萃取30?60s，除去残渣，得到滤液，将滤液静置分相，烟草花蕾中游离氨基酸被萃取到上层； (3)将双水相的上层提取液吸取出来，将所述上层提取液进行真空浓缩，得到5?1ml浓缩液； (4)将浓缩液缓慢倒入用盐酸处理过的强酸性阳离子交换树脂中，使氨基酸与树脂结合，停留1min后，先用蒸馏水洗涤交换柱除去杂质，然后用氨水洗脱交换柱，得到洗脱液，将洗脱液真空浓缩至干，得到氨基酸纯品。
2.根据权利要求1所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(I)所述双水相萃取液中，PEG聚合物质量分数为30%，无机盐质量分数为20%。
3.根据权利要求1或2所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(I)所述PEG聚合物为PEG800和PEG6000的混合物，PEG800和PEG6000的质量比为1:1?5。
4.根据权利要求1或2所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(I)所述无机盐水溶液为硫酸钠的水溶液。
5.根据权利要求1所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(2)所述静置的时间为3h。
6.根据权利要求1所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(3)所述将双水相的上层提取液吸取出来的方式是虹吸。
7.根据权利要求1所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(3)所述真空浓缩的温度为70°C。
8.根据权利要求1所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(4)所述蒸馏水的体积为浓缩液的20?30倍，洗涤速度为3ml/min。
9.根据权利要求1所述的从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，其特征在于步骤(4)所述氨水的浓度为4mol/L,体积为浓缩液的10?20倍，洗脱速度为3ml/min。
【专利摘要】本发明公开了一种从烟草花蕾中提取游离氨基酸的方法，用PEG聚合物和无机盐的水溶液配制成PEG聚合物质量分数20％～30％、无机盐质量分数15％～25％的双水相萃取液，然后结合闪式提取器提取烟草花蕾中的游离氨基酸，提取液虹吸分离后真空浓缩，在用盐酸处理过的强酸性阳离子交换树脂纯化后真空浓缩至干，得到氨基酸纯品。本发明从烟草花蕾中提取游离氨基酸，效率高，方法简单，试剂成本低；本发明采用闪式提取结合双水相萃取技术提取分离烟草花蕾中的游离氨基酸，较传统方法，闪式萃取不需要多次提取过程，使用溶剂较少，节省时间，双水相萃取技术较单一的溶剂提取效果更好，所得氨基酸纯度通常为96％左右。
【IPC分类】C07C227-40, C07B63-00
【公开号】CN104761426
【申请号】CN201510149914
【发明人】施丰成, 戴亚, 薛芳, 肖克毅, 谭兰兰, 沈怡, 寇明钰, 李东亮, 宋光富
【申请人】川渝中烟工业有限责任公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年3月31日