、Cy3GEpCX和Cy3GEpC等标准品的TLC鉴定结果 见图6。
[0094]HPLC分析用E液和F液进行可变梯度分析。E液为1. 5 %的磷酸水溶液，F液 为磷酸：甲酸：乙腈：三氟乙酸：水=L4 :19 :23. 8 :5 :50. 8。分析条件为，以0DS-80Ts QAcolumn(4. 5mmi.d.X150mm,TOSOH)为分析柱，柱温 40°C，流速 1.OmL/min，检测波长 525nm，分析时间35min。在分析时间0-35min间，流动相以E:F= 78 :22(V/V)开始，然后 线性增加F液的浓度，两者比例达35 :65时，分析结束。
[0095]Cy3G5G、Cy3GX、Cy3G、Cy3GaEpCX、Cy3GEpCX和Cy3GEpC等标准品的HPLC分析鉴定 结果见图7。
[0096] 二、花青素苷的化学结构鉴定
[0097] 用1H_、13C_ 核磁共振（NMR,NuclearMagneticResonance)和ESI-MS/ MS(ElectrosprayIonization-MassSpectrometry/MS)鉴定花青素苷单体的分子结构。比 如，用1匪404600(邛011匪4046001(3，1^01041'頂1^1).如? &11)核磁共振装置测定花青素 苷单体，其氢谱和碳谱分析结果如表1和表2所示。
[0098] 1、矢车菊素-3,5-〇-0-二葡萄糖苷（Cy3G5G) (1)鉴定
[0099] 黑红色粉末，溶于水，易溶于甲醇和乙醇。可见光下TLC层析板上呈现紫红色圆 斑，推测为花青素苷化合物。iH-NMR^OOMH^DMSO-de)质子图谱中（结果见表1)，在低磁 场区化学位移S7. 05(1H,d,J= 2. 2Hz)和S7. 07(1H,d,J= 2. 2Hz)分别为 5, 7-二氧 取代黄酮A环6、8位的质子信号；化学位移S7. 02 (1H，d，J= 8. 7Hz)、S8. 27 (1H，dd，J= 8.7,2.4Hz)、S8.03(lH，d，J= 2.4Hz)表明结构中有ABX自旋系统，依次为B环 5'、6'、2' 位的质子信号。13C-NMR(125MHz，DMS0-d6)图谱中（结果见表2)，化学位移S164. 6(C-2)、 S146. 6(C-3)、S135. 8(C-4)、S156. 7(C-5)、S105. 7(C-6)、S169. 6(C-7)、S97. 5(C-8)、 S157.1(09)、8 113.3(010)、S121.0(C-1，）、S118.6(C_2，）、S147.4(C_3，）、 S156. 5(C-4'）、S117. 7(C-5'）、S129.0(C_6'）为矢车菊素的碳信号峰。高磁场区的 两个化学位移S5. 35 (1H,d,J= 7. 9Hz)、S5. 20 (1H,d,J= 7. 7Hz)，以及S3. 46-5. 35 有12个质子信号，说明结构中有2个糖片段；化学位移S3. 73 (lH，dd，J= 8. 9, 7. 9Hz)、 8 3. 69(1H,dd,J= 9.1,8.9Hz), 8 3. 51 (1H,dd,J= 9. 4, 9. 1Hz), 8 3. 60 (1H,ddd,J= 9. 4, 6. 8, 2.OHz)、S3. 99 (1H,dd,J= 12. 0, 2.OHz)、S3. 78 (1H,dd,J= 12. 0, 6. 8Hz)等为葡 萄糖的质子信号峰（表1)。表1还可看到另一个葡萄糖的6个质子信号。13C-NMR高磁场区 的化学位移S74. 4、S78. 5、S71. 0、S78. 2、S62. 2,以及S102. 5糖端基碳信号，表明该 糖为 0 -葡萄糖。此外，化学位移S103. 8、S74. 4、S78. 8、S71. 2、S77. 5、S62. 5 等信 号表明另一个糖也为葡萄糖。2D-HMQC图谱分析进一步证实了上述分析结果。2D-HMBC 图谱中，葡萄糖1位质子S5. 35(lH，d，J= 7.9Hz)与矢车菊素3位碳S146.6(C-3)有强的 互作信号，说明此葡萄糖1位碳与矢车菊素3位碳通过氧原子连接。另一葡萄糖的1位质 子S5. 20(lH，d，J= 7. 7Hz)与矢车菊素5位碳S156. 7(C-5)有强的互作信号，证明其作 为糖基连接在矢车菊素的7位碳上形成了糖苷。ESI-MS/MS分析结果，质谱中在荷质比（m/ z) 611. 4 [M-H] +、449. 4 [ (M-H) -162 (葡萄糖分子量）]+、287. 2 [ (M-H) -324. 2 (2 个葡萄糖分子 量）]+出现离子峰，与分子C27知016的分子量相吻合。根据上述实验结果，化合物1鉴定为 矢车菊素 _3, 5-0-13 -二葡萄糖苷。
[0100] 2、飞燕草色素-3-0-0 -葡萄糖苷（Dp3G) (2)鉴定
[0101] 紫红色粉末，溶于水，易溶于甲醇和乙醇。可见光下TLC层析板上呈现紫色圆斑， 推测为花青素苷化合物。1H-NMR质子图谱中（表1)，在低磁场区化学位移S6. 69 (1H，s)和 8 6. 87 (1H,s)分别为5, 7-二氧取代黄酮A环6、8位的质子信号；化学位移8 7. 74 (1H,s)、 S7. 74(1H,s)表明结构中有ABX自旋系统，依次为B环6'和2'位的质子信号。13C-NMR 图谱中（表 2)，化学位移S163.6(02)、S145.4(03)、S135.8(04)、S159.2(05)、 8 103. 7 (C-6) , 8 170. 5 (C-7) , 895.3(08)、8157.7(09)、8 113.3(010)、 S120.2(C-1，）、S112.7 (C-2，）、S147. 5(03,）、S144.7 (C-4，）、S147.5(05，）、 S112. 7(C-6'）为飞燕草色素的碳信号峰。高磁场区的化学位移S5. 39(1H，d，J= 7. 5Hz)、 8 3. 58(1H,dd,J= 8. 9, 7. 5Hz), 8 3. 41 (1H,t,J= 8. 9Hz), 8 3. 26(1H,t,J= 8. 9Hz), 8 3. 53 (1H,br.dd,J= 8. 9, 5. 5Hz), 8 3. 73 (1H,dd,J= 12. 2, 2. 2Hz), 8 3. 51 (1H,dd,J= 12. 2，5. 58Hz)等为-葡萄糖的质子信号峰（表1)。2D-HMQC图谱分析进一步证实了上 述分析结果。2D-HMBC图谱中，葡萄糖1位质子S5. 39(1H，d，J= 7. 5Hz)与飞燕草色素3 位碳S145. 4 (C-3)有强的互作信号，说明此葡萄糖1位碳与飞燕草素3位碳通过氧原子连 接。ESI-MS/MS分析结果，质谱中在荷质比（m/z)465. 0[M-H]+、303. 0[(M-H)-162(葡萄糖分 子量）]+出现离子峰，与分子C211121012的分子量相吻合。根据上述实验结果，化合物2鉴定 为飞燕草色素-3-0-0 -葡萄糖苷。
[0102] 3、矢车菊素-3-0-13 -半乳糖苷（Cy3Ga) (4)鉴定
[0103] 深红色粉末，溶于水，易溶于甲醇和乙醇。可见光下TLC层析板上呈现紫红色圆 斑，推测为花青素苷化合物。iH-NMR质子图谱（表1)看出，与化合物1相似，在低磁场区有 矢车菊素的碳信号峰。高磁场区的化学位移S5. 26 (1H，d，J= 7. 7Hz)、S4. 02 (1H，dd，J= 9. 6, 7. 7Hz), 8 3. 72 (1H,dd,J= 9. 6, 3. 4Hz), 8 3. 98 (1H,br.d,J= 3. 2Hz), 8 3. 83 (1H,br. dd,J= 8. 1, 5. 6Hz)、S3. 84 (1H,dd,J= 11. 5, 8.OHz)、S3. 80 (1H,dd,J= 11. 5, 5. 6Hz)等 为半乳糖的质子信号峰。2D-HMQC图谱分析进一步证实了上述分析结果。2D-HMBC图 谱中，半乳糖1位质子S5. 26(lH，d，J= 7. 7Hz)与矢车菊素3位碳S145.8(C-3)有强的 互作信号，说明此半乳糖1位碳与矢车菊素3位碳通过氧连接。ESI-MS/MS分析结果，质谱 中在荷质比（m/z)449. 2[M-H]+、287. 2[(M-H)-162(半乳糖分子量）]+出现离子峰，与分子 C21H21(U^分子量相吻合。根据上述实验结果，化合物4鉴定为矢车菊素-3-0--半乳糖 苷。
[0104] 4、矢车菊素-3-〇-(2_〇-|3-木糖基）-|3-半乳糖昔（Cy3GaX)⑶鉴定
[0105] 深红色粉末，溶于水，易溶于甲醇和乙醇。可见光下TLC层析板上呈现紫红 色圆斑，推测为花青素苷化合物。iH-NMR质子图谱（表1)看出，化合物3的质子决大 多数与化合物4相似。不同点在于，在高磁场区多了 5个质子的信号峰，化学位移依 次为S4.78(lH，d，J= 7.6Hz)、S3.22(lH，dd，J= 8.5,7.6Hz)、S3.37(lH，dd，J= 8. 96, 8. 5Hz)、S3. 46 (1H,ddd,J= 10. 2, 8. 9, 5. 4Hz)、S3. 73 (1H,dd,J= 11. 5, 5. 4Hz)、 S3. 10(lH，dd，J= 11.5, 10. 2Hz)等，表明其为木糖的质子信号峰。2D-HMQC图谱分 析进一步证实了上述分析结果。2D-HMBC图谱中，木糖1位质子S4. 78(1H，d，J= 7. 6Hz) 与半乳糖2位碳S118. 6 (C-2'）有强的互作信号，说明木糖1位碳与半乳糖2位碳连接。 ESI-MS/MS分析结果，质谱中在荷质比（m/z)581. 2[M-H]+、449. 2[(M-H)-132(木糖分子 量）]+、287. 2[(M_H)_294(香豌显糖分子量）]+出现呙子峰，与分子C26H29015的分子量相吻 合。根据上述实验结果，化合物3鉴定为矢车菊素-3-0-(2-0-13 -木糖基）-|3 -半乳糖苷。
[0106] 5、矢车菊素-3_〇-13 -葡萄糖苷（Cy3G)(6)鉴定
[0107] 深红色粉末，溶于水，易溶于甲醇和乙醇。可见光下TLC层析板上呈现红色圆 斑，推测为花青素苷化合物。iH-NMR质子图谱（表1)看出，与化合物1相似，在低磁 场区有矢车菊素的碳信号峰，不同的是，在高磁场区只有一个葡萄糖的质子信号 峰。2D-HMQC图谱分析进一步证实了上述分析结果。2D-HMBC图谱中，葡萄糖1位质子 S5. 31 (1H，d，J= 7. 7Hz)与矢车菊素3位碳S145. 2 (C-3)有强的互作信号，说明葡萄糖1 位碳与矢车菊素3位碳有链接。ESI-MS/MS分析结果，质谱中在荷质比（m/z