燥体114中含有磁性粒子，该磁性粒子是经对作为精制的靶的细胞内的蛋白质(以下，称为靶蛋白质)具有亲和性的物质的表面修饰而成的，作为该物质，例如有蛋白质A、蛋白质G、生物素、抗生物素蛋白、谷胱甘肽、凝集素和抗体。与该磁性粒子结合的物质能够与具有对该物质特异性吸附的作用的蛋白质特异性结合。
[0063]为了从细胞中精制蛋白质，首先，向瓶200内加入溶解缓冲液510 (图5A)。溶解缓冲液510只要是不使靶蛋白质改性且能够溶解细胞的液体即可。例如，可以将含有tris —HCl、EDTA, EGTA, SLS、脱氧胆酸盐和Triton — X或NP40等的液体调节至对取得靶蛋白质最佳的pH来使用。然后，向瓶200内的溶解缓冲液510中导入细胞500，制成蛋白质含有液510。
[0064]接下来，使本发明涉及的容器100的开口部106与瓶200的开口部220嵌合而使容器100和瓶200成为一体(图5B)。
[0065]接下来，使溶解缓冲液510中的蛋白质与对磁性粒子表面的蛋白质具有亲和性的物质结合(图5C)。通过将容器100和瓶200的一体型上下翻转，从而将蛋白质含有液510从瓶200内送到容器100内。在容器100内，通过粗网眼过滤器的蛋白质含有液再通过细网眼过滤器。通过细网眼过滤器的蛋白质含有液与位于容器100的底部的冷冻干燥体114接触。此时，冷冻干燥体内的磁性粒子混入蛋白质含有液中。靶蛋白质与对磁性粒子表面的蛋白质具有亲和性的物质结合。在此，在磁性粒子的表面可以吸附有靶蛋白质以外的蛋白质和通过了过滤器的蛋白质。从容器100的流出口 110流出的蛋白质含有液流入容器600。
[0066]这样，为了使靶蛋白质与磁性粒子的表面结合，不需要使用涡流摇动筛等装置摆动容器或者操作者用手振摇。因此，根据本发明，能够省去用于使蛋白质结合用固相载体分散的操作，以更短时间使蛋白质与蛋白质结合用固相载体结合。
[0067]接下来，边使永磁铁680接近容器600的外部，利用其磁力将磁性粒子保持在容器600的侧壁，边将液体向容器600外除去(图OT)。
[0068]接下来，通过向容器600内加入适当的溶出液644而使蛋白质从磁性粒子溶出(图5E)。然后，溶出后，边使永磁铁680从外侧接近容器600的侧壁将磁性粒子保持在容器600的侧壁附近，边从容器600中采集作为上清液部分的液体，从而能够回收与磁性粒子结合的蛋白质。作为使蛋白质溶出的溶出液，优选具有使蛋白质与配体的亲和性降低的效果的液体。作为该液体，例如可举出含有盐酸、咪唑、谷胱甘肽和生物素的缓冲液。作为缓冲液，例如可举出磷酸钾缓冲液、磷酸钠缓冲液、Tris-HCl缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸缓冲液和甘氨酸-盐酸缓冲液。
[0069]可以在使蛋白质从磁性粒子溶出前清洗磁性粒子而除去夹杂物。作为具体的清洗方法，例如可举出向含有0.5质量％的Tween20的磷酸钠缓冲液中加入结合有蛋白质的磁性粒子，通过反复再分散而除去与磁性微粒吸附的夹杂物的方法。如上，根据本实施方式的容器100，在用于制备蛋白质的前处理中，能够减去以往的用于使蛋白质结合用载体分散所需的时间和工序。
[0070]本发明不限于上述的实施方式，可以进一步实施各种变形。例如，本发明包括与实施方式中说明的构成实质上相同的构成(例如，功能、方法和结果相同的构成或者目的和效果相同的构成)。另外，本发明包括将实施方式中说明的构成的非本质部分置换而得的构成。另外，本发明包括能够与实施方式中说明的构成起到相同的作用效果的构成或者实现相同的目的的构成。另外，本发明包括向实施方式中说明的构成追加公知技术而得的构成。
[0071]符号说明
[0072]100…容器
[0073]102…侧壁
[0074]104…过滤器支撑部
[0075]106 …开口部
[0076]110 …流出口
[0077]112…过滤器设置部
[0078]114…冷冻干燥体
[0079]114a…磁性粒子
[0080]116 …孔
[0081]118…凹部
[0082]119…底面
[0083]200 …瓶
[0084]210…核酸含有液
[0085]220 …开口部
[0086]300…棉棒
[0087]400…核酸提取用设备
[0088]420…杯部
[0089]440…管部
[0090]441…第I塞子
[0091]442…第2塞子(清洗液)
[0092]443…第3塞子
[0093]444…第4塞子(溶出液)
[0094]445…第5塞子
[0095]460 …栓
[0096]470 …盖
[0097]480…永磁铁
[0098]500…细胞
[0099]510…蛋白质含有液(溶解缓冲液)
[0100]600…容器
[0101]644…溶出液
[0102]680…永磁铁
【主权项】
1.一种冷冻干燥体，其特征在于，含有物质结合用固相载体， 其中，物质结合用固相载体被冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的冷冻干燥体，其中，所述物质结合用固相载体为磁性粒子。
3.根据权利要求1或2所述的冷冻干燥体，其中，所述物质结合用固相载体与添加剂一起被冷冻干燥， 所述添加剂选自海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、糊精、葡聚糖、聚乙二醇、环糊精以及麦芽糊精中的一种或者二种以上。
4.一种容器，其特征在于，用于使物质含有液中的物质与物质结合用固相载体结合， 并且，容器内具备所述物质结合用固相载体被冷冻干燥而成的冷冻干燥体。
5.根据权利要求4所述的容器，具有: 用于投入所述物质含有液的开口部， 用于过滤从所述开口部投入的所述物质含有液的过滤部， 用于使通过所述过滤部的所述物质含有液与所述冷冻干燥体接触的接触部，以及 用于使在所述接触部与所述冷冻干燥体接触的所述物质含有液向所述容器外流出的流出部。
6.—种含有物质结合用固相载体的冷冻干燥体的制造方法，其特征在于，将所述物质结合用固相载体冷冻干燥。
7.根据权利要求6所述的制造方法，其中，所述物质结合用固相载体为磁性粒子。
8.根据权利要求6或7所述的制造方法，其中，将所述物质结合用固相载体与添加剂一起冷冻干燥， 所述添加剂选自海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、糊精、葡聚糖、聚乙二醇、环糊精、以及麦芽糊精中的一种或者二种以上。
【专利摘要】本发明提供省去用于使物质结合用固相载体分散的操作而能以更短时间使物质与物质结合用固相载体结合的容器。提供一种冷冻干燥体，其特征在于，含有物质结合用固相载体且物质结合用固相载体与添加剂一起被冷冻干燥；一种用于使物质含有液中的物质与物质结合用固相载体结合的容器，其特征在于，容器内具备物质结合用固相载体与添加剂一起被冷冻干燥而成的冷冻干燥体；以及，一种含有物质结合用固相载体的冷冻干燥体的制造方法，其特征在于，将物质结合用固相载体与添加剂一起冷冻干燥。
【IPC分类】C12M1-00, C12M1-12
【公开号】CN104862208
【申请号】CN201510082331
【发明人】小枝周史, 井手上公太郎
【申请人】精工爱普生株式会社
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年2月15日
【公告号】EP2913401A2, EP2913401A3, US20150240291