r^77A/5· 游离菌丝体进行固定化。将固形物质量百分含量20%的市售麦芽 糖衆置于反应器中，按20% (w/v)加入固定化细胞，在55°C条件下，搅拌转化15h后，搅拌 转速IOOrpm，即得低聚异麦芽糖浆；经高效液相色谱仪测定，有效三糖（IG+P+IG3)含量为 62. 66%〇
[0052] 实施例10:黑曲霉培养及其应用10 (1)菌种培养： 种子培养基：蔗糖 30g/L，糊精 20g/L，牛肉膏 20g/L，（NH4)2SO4 10g/L，NaCl 3g/L，pH 5. 0〇
[0053] 发酵培养基：蔗糖 50g/L，糊精 30g/L，牛肉膏 30g/L，（NH4)2SO4 20g/L，NaCl 5g/L， pH 5· 0〇
[0054] 以黑曲霉（AsperpVAAs Ml为发酵菌种，在30°C条件下进行种子培养，培 养基装液量10%，摇床转速250rpm，种龄18h ;按接种量15% (v/v)将种子接种于发酵培养 基，培养基装液量30%，摇床转速250rpm，30°C发酵48h后，发酵液经离心收集菌丝体。
[0055] (2)菌种应用 应用固定化细胞进行转化生产低聚异麦芽糖，以质量浓度为2%的海藻酸钙、0. 5%的壳 聚糖和0. 5%的卡拉胶将黑曲霉Ml游离菌丝体进行固定化。将固形 物质量百分含量10%的市售麦芽糖浆置于反应器中，按30% (w/v)加入固定化细胞，在60°C 条件下，转化12h后，即得低聚异麦芽糖浆；经高效液相色谱仪测定，有效三糖（IG+P+IG3) 含量为38. 28%。
[0056] 实施例11:黑曲霉培养及其应用11 (1)菌种培养： 种子培养基：大米淀粉30g/L，可溶性淀粉20g/L，麦芽汁20g/L，花生麸10g/L，NaNO3 3g/L，KCl 2 g/L，pH 5. 5。
[0057] 发酵培养基：大米淀粉40g/L，可溶性淀粉40g/L，麦芽汁30g/L，花生麸10g/L， NaNO3 5g/L，KCl 5 g/L，pH 5.5。
[0058] 以黑曲霉（AspergiBM Ml为发酵菌种，在35°C条件下进行种子培养，培 养基装液量5%，摇床转速220rpm，种龄24h ;按接种量15%(v/v)将种子接种于发酵培养基， 培养基装液量25%，摇床转速220rpm，35°C发酵36h后，发酵液经真空抽滤收集菌丝体。
[0059] (2)菌种应用 应用游离菌丝体进行转化生产低聚异麦芽糖，将固形物质量百分含量20%的大米淀粉 糖化液置于反应器中，按菌体湿重20% (w/v)加入游离菌丝体，在65°C条件下，转化4h后， 即得低聚异麦芽糖浆；经高效液相色谱仪测定，有效三糖（IG+P+IG 3)含量为39. 96%。
[0060] 实施例12:黑曲霉培养及其应用12 (1)菌种培养： 种子培养基：玉米淀粉20g/L，小麦淀粉20g/L，豆柏粉10g/L，麸皮浸汁10g/L，pH 6. 0。
[0061] 发酵培养基：玉米淀粉30g/L，大米淀粉30g/L，豆柏粉20g/L，麸皮浸汁10g/L，pH 6. 0〇
[0062] 以黑曲霉（AspergiBM Ml为发酵菌种，在35°C条件下进行种子培养，培 养基装液量20%，搅拌转速300rpm，种龄16h ;按接种量20% (v/v)将种子接种于发酵培养 基，培养基装液量50%，搅拌转速500rpm，35 °C发酵48h后，发酵液经板框过滤收集菌丝体。
[0063] (2)菌种应用 应用游离菌丝体进行转化生产低聚异麦芽糖，将固形物质量百分含量35%的市售麦芽 糖浆置于反应器中，按菌体湿重30% (w/v)加入游离菌丝体，在45°C条件下，转化12h后， 即得低聚异麦芽糖浆；经高效液相色谱仪测定，有效三糖（IG+P+IG3)含量为43. 19%。
【主权项】
1. 一种黑曲霉，其特征在于：所述菌种的分类命名为黑曲霉（AspergiBtts 保藏编号CCTCC NO: M2014421，保藏日期为2014年9月23日，保藏单位：中国典型培养物 保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学。
2. 权利要求1所述的黑曲霉菌株在低聚异麦芽糖生产中的应用。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将菌株黑曲霉（AspergiBtts Ml 接种于包含碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中进行培养，经离心或膜分离技术收集含 a _葡萄糖苷酶的细胞，进而采用游离的或经过固定化的含a _葡萄糖苷酶的细胞转化淀 粉糖化液或麦芽糖浆生产低聚异麦芽糖。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的培养基组成为：碳源20~80g/L， 氮源10~50g/L，无机盐0~5g/L，其余为水。
5. 根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、糊 精、薯类淀粉或谷类淀粉中的任意一种或其组合；所述氮源为淀粉、麸皮浸汁、麦芽汁、豆柏 粉、花生麸、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、尿素、NH 4C1、（NH4)2SOdP NaNO3中的任意一种或其组 合；所述无机盐为钠盐、钾盐、磷酸氢盐和磷酸二氢盐中任意一种或其组合物。
6. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：黑曲霉（AspergiBtts Ml的培养 条件为：初始pH值4. 0~6. 0,培养基装液量10~60%，接种量5~20%，搅拌速度100~ 600 rpm，培养温度28~37°C，培养时间12~48h。
7. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：膜分离技术收集含a-葡萄糖苷酶的细 胞，所述膜分离技术为真空抽滤、板框过滤或超滤中的任意一种。
8. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的含a -葡萄糖苷酶的细胞，其 a-葡萄糖苷酶为胞内酶。
9. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的含a -葡萄糖苷酶的细胞转化淀 粉糖化液或麦芽糖浆高效生产低聚异麦芽糖的方法为：将游离细胞或固定化细胞置于反应 器中，加入固形物质量百分含量10~40%的淀粉糖化液或麦芽糖浆，反应温度45~65°C， 反应时间3~24h后制得低聚异麦芽糖。
10. 根据权利要求3和9所述的应用，其特征在于：所述的淀粉糖化液是利用薯类淀 粉、玉米淀粉、小麦淀粉或大米淀粉经过a -淀粉酶或真菌淀粉酶液化，然后用0 -糖化酶 或真菌淀粉酶糖化制取；所述的麦芽糖浆为市售麦芽糖浆。
11. 根据权利要求3和9所述的应用，其特征在于：固定化细胞是采用海藻酸钙、壳聚 糖或卡拉胶的任意一种或其组合作为固定化载体，以戊二醛作为交联剂制备。
12. 根据权利要求3和9所述的应用，其特征在于：利用含a -葡萄糖苷酶的细胞转化 淀粉糖化液或麦芽糖浆制得的低聚异麦芽糖，有效三糖：异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖，即 IG+P+IG 3，含量为 35 ~70%。
【专利摘要】本发明公开一种黑曲霉，其分类命名为黑曲霉（Aspergillus niger）M1，保藏编号CCTCC NO:M2014421，保藏日期为2014年9月23日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，该黑曲霉（Aspergillus niger）M1菌株所产α-葡萄糖苷酶为胞内酶，可在55～65℃高温条件下生产有效三糖（IG+P+IG3）含量达65%以上的低聚异麦芽糖，而制备有效三糖含量为35%的IMO-500型低聚异麦芽糖，所需反应时间仅为制备有效三糖含量达65%以上的低聚异麦芽糖反应时间的一半。本发明菌株所产α-葡萄糖苷酶具有优良的温度特性、转苷时间短、产物有效三糖含量高等优点。CCTCC M 201442120140917
【IPC分类】C12N1-14, C12R1-685, C12P19-14
【公开号】CN104877911
【申请号】CN201510073052
【发明人】梁智群, 陈桂光, 李玮, 曾伟
【申请人】广西南宁智天生物科技有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年2月12日