核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用盒、以及核酸扩增反应用套件的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用盒、以及核酸扩增反 应用套件。
【背景技术】
[0002] 近年来，由于基因的利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用了基因的医疗备 受瞩目。另外，即使在农业、畜牧业领域中，也开发有较多在品种辨别、品种改良使用了基因 的方法。作为用于利用基因的技术，广泛普及有PCR(Polymerase Chain Reaction聚合酶 链反应）等技术。如今，PCR在生物体的信息解析中成为必不可缺的技术。PCR是对含有成 为扩增的对象的核酸（靶核酸）以及试剂的溶液（反应液）实施热循环，从而使靶核酸扩 增的方法。作为PCR的热循环，通常是以两个梯度或者三个梯度的温度实施热循环的方法。
[0003] 另一方面，现状是医疗领域中以流行性感冒为代表的感染症的诊断使用免疫层析 试剂盒等简易检查套件成为主流。但是，在上述的简易检查中，存在精度不够的情况，从而 希望将能够期待更高的检查精度的PCR应用于感染症的诊断。另外，医疗机构的普通门诊 患者等由于诊察的时间受限的关系，所以将检查所使用的时间被限制在短时间内。因此，现 状是例如流行性感冒的检查牺牲检查的精度，通过简易的免疫层析试剂盒等的检查而实现 短时间化。
[0004] 根据上述的情况，在医疗领域中，为了实现基于能够期待更高的精度的PCR进行 的检查，需要缩短反应所需的时间。作为用于短时间内进行PCR的反应的装置，例如在专利 文献1中公开了一种生物体试样反应装置，其使填充有反应液与不和反应液混和且比重比 反应液小的液体的生物体试样反应用芯片在水平方向的旋转轴的周围旋转，从而使反应液 移动而实施热循环（专利文献1)。另外，作为PCR的一个方法，公开有利用了磁性微球的方 法（专利文献2)、使用磁性微球作为液滴的移动机构，使基板上的温度变化区域中的液滴 移动从而进行PCR的热循环的方法（专利文献3)等。
[0005] 专利文献1 :日本特开2009-136250号公报
[0006] 专利文献2 :日本特开2009-207459号公报
[0007] 专利文献3 :日本特开2008-012490号公报
[0008] 在专利文献2、3所记载的以使核酸吸附于微粒的方式快速地进行核酸扩增反应 的方法中，后续有用于从微粒溶出核酸的工序。存在欲在短时间内高效地进行本工序的迫 切期望。
【发明内容】
[0009] 本发明是鉴于上述情况而完成的，其目的在于提供溶出效率更高的核酸扩增方 法、能够实现该方法的核酸提取用设备、核酸扩增反应用盒、以及核酸扩增反应用套件。 [0010] 本发明的一实施方式所涉及的核酸扩增方法的特征在于，包括：吸附工序，在该工 序中，向含有核酸的试样混合吸附液以及微粒，使上述核酸吸附于上述微粒；清洗工序，在 该工序中，利用第一清洗液对吸附了上述核酸的微粒进行清洗；溶出工序，在该工序中，对 吸附了上述核酸的微粒施加超声波，使吸附于上述微粒的核酸溶出于溶出液中；以及核酸 扩增工序，在该工序中，对上述溶出液中的核酸进行核酸扩增反应。
[0011] 本发明的其他的实施方式所涉及的核酸扩增方法的特征在于，包括：吸附工序，在 该工序中，向含有核酸的试样混合吸附液以及微粒，使上述核酸吸附于上述微粒；清洗工 序，在该工序中，利用第二清洗液对吸附了上述核酸的微粒进行清洗；清洗工序，在该工序 中，利用第一清洗液对由上述第二清洗液清洗后的吸附了上述核酸的微粒进行清洗；溶出 工序，在该工序中，对吸附了上述核酸的微粒施加超声波，使吸附于上述微粒的核酸溶出于 溶出液中；以及核酸扩增工序，在该工序中，使上述核酸扩增。
[0012] 在上述任意的核酸扩增方法中，上述核酸可以为核糖核酸（RNA)，包括对溶出于上 述溶出液中的上述核糖核酸进行逆转录从而合成cDNA的逆转录工序，在上述核酸扩增工 序中进行扩增的核酸为所合成的上述cDNA。
[0013] 本发明的一实施方式所涉及的核酸提取用设备的特征在于，具有：管，其具有长边 方向，并在内部依次具备由油构成的第一柱塞、由与油相互分离并对结合了核酸的微粒进 行清洗的第一清洗液构成的第二柱塞、由油构成的第三柱塞、由与油相互分离并从结合了 上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液构成的第四柱塞、以及由油构成的第五柱塞；超声 波产生部，其用于对结合了上述核酸的微粒施加超声波；以及容器，其能够与上述管的配置 有上述第一柱塞的一侧连接以及连通，并含有使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液。
[0014] 本发明的其他的实施方式所涉及的核酸提取用设备的特征在于，具有：管，其具有 长边方向，并在内部依次具备由油构成的第一柱塞、由与油相互分离并对结合了核酸的微 粒进行清洗的第一清洗液构成的第二柱塞、由油构成的第三柱塞、由与油相互分离并从结 合了上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液构成的第四柱塞、以及由油构成的第五柱塞； 超声波产生部，其用于对结合了上述核酸的微粒施加超声波处理；以及储液部，其与上述管 的配置有上述第一柱塞的一侧连通，并含有使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液，上述吸 附液含有醇，上述第一清洗液为酸性。
[0015] 本发明的其他的实施方式所涉及的核酸提取用设备的特征在于，具有：管，其具有 长边方向，并在内部依次具备由油构成的第一柱塞、由与油相互分离并对结合了核酸的微 粒进行清洗的第二清洗液构成的第六柱塞、由油构成的第七柱塞、由与油相互分离并对由 上述第二清洗液清洗后的结合了上述核酸的微粒进行清洗的第一清洗液构成的第二柱塞、 由油构成的第三柱塞、由与油相互分离并从结合了上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液 构成的第四柱塞、以及由油构成的第五柱塞；以及超声波产生部，其用于对结合了上述核酸 的微粒施加超声波。
[0016] 在上述任意的核酸提取用设备中，也可以具有能够与上述管的配置有上述第一柱 塞的一侧连接，并含有使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液的容器。也可以具有与上述管 的配置有上述第一柱塞的一侧连通，并含有使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液的储液 部。
[0017] 本发明的一实施方式所涉及的核酸扩增反应用盒的特征在于，具备：上述的核酸 提取用设备、以及与上述管的配置有上述第五柱塞的一侧连通并含有油的核酸扩增反应用 容器。也可以具备与上述管的配置有上述第一柱塞的一侧连通，并向上述管导入上述微粒 的箱。
[0018] 本发明的一实施方式所涉及的核酸扩增反应用套件的特征在于，具备：上述的核 酸提取用设备、以及向上述管导入上述微粒的箱。
【附图说明】
[0019] 图1是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用设备的主要部分的图。
[0020] 图2是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用设备的主要部分的图。
[0021] 图3是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用设备的主要部分的图。
[0022] 图4A是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用设备的图。
[0023] 图4B是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用设备的图。
[0024] 图5是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用设备的主要部分的图。
[0025] 图6是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸扩增反应用盒的核酸扩增反应用 容器的图。
[0026] 图7A是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用套件的一个例子的图。
[0027] 图7B是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸提取用套件的一个例子的图。
[0028] 图8是示意性地示出一实施方式所涉及的核酸扩增反应用盒的一个例子的图。
[0029] 图9是用于对一实施方式的核酸提取方法的变形例进行说明的示意图。
[0030] 图10是示出使用在实施例中提取的核酸进行的PCR的结果的图表。
[0031] 附图标记
[0032] 10...第一柱塞；20...第二柱塞；30...第三柱塞；40...第四柱塞；50...第五 柱塞；60...第六柱塞；70...第七柱塞；100...管部；110...栓；120...容器；121...开 口；122··.盖；130…储液部；131··.开口；132··.盖；200··.管；230··.核酸扩增反 应用容器；231...密封形成部；232...油收纳部；232A...油收纳空间；233...阶梯部； 234A. . ·上密封部；234B...下密封部；235. . ·流路形成部；249. . ·溶出液；410. . ·永久磁 铁；1000、1020、1030、1040、1100...核酸提取用设备；2000...核酸提取用套件眞..磁性 粒子。
【具体实施方式】
[0033] 以下对本发明的几个实施方式进行说明。以下进行说明的实施方式说明本发明的 例子。本发明完全不限定于以下的实施方式，也包括在不变更本发明的主旨的范围内被实 施的各种变形方式。此外不限制以下所说明的结构的全部是本发明的必须构成要素。
[0034] 1.核酸提取用设备
[0035] 本实施方式的核酸提取用设备1000具有：管部100、第一柱塞10、第二柱塞20、第 三柱塞30、第四柱塞40、第五柱塞50、以及作为用于对核酸结合的微粒进行超声波处理的 超声波产生部的超声波产生装置。
[0036] 图1是示意性地示出本实施方式的核酸提取用设备1000的主要部分的图。
[0037] L L 管部
[0038] 管部100构成核酸提取用设备1000的主要部分。核酸提取用设备1000除包括管 部100之外，还包括各种结构。虽未图示，但核酸提取用设备1000例如也可以包括与管部 100连接的配管、容器、栓、接头、泵、控制装置等。
[0039] 管部100是在内部具有空腔且能够使液体在该空腔内沿长边方向流通的筒状的 部分。管部100具有长边方向，但也可以弯曲。管部100的内部的空腔只要能够维持收容于 内部的液体在管部100内呈柱塞形状，则大小、形状均不被特别地限定。另外，管部100的 内部的空腔的大小、与长边方向垂直的剖面的形状也可以沿着管部100的长边方向变化。 对于是否能够维持液体在管部100内呈柱塞形状，取决于管部100的材质、液体的种类等条 件，因此管部100的与长边方向垂直的剖面的形状在能够维持液体在管部100内呈柱塞形 状的范围内被适当地设计。
[0040] 管部100的外形的与长边方向垂直的剖面的形状也不被限定。并且管部100的壁 厚（从内部的空腔的侧面至外部的表面的长度）也不被特别地限定。在管部100的内部的 空腔的与长边方向垂直的剖面为圆形的情况下，管部100的内径（内部的空腔的与长边方 向垂直的剖面中的圆的直径）例如能够形成0. 5mm以上3mm以下。若管部100的内径在该 范围内，则在管部100的材质、液体的种类广泛的范围内容易形成液体的柱塞，因此优选。
[0041] 管部100的材质不被特别地限定，例如能够为玻璃、高分子、金属等。此外，作为管 部100的材质，若选择玻璃、高分子等对可见光具有透明性的材质，则能够从管部100的外 部观察内