6和出样孔14导管连通上二氧化碳气体，将进样通道5、出样通道7、连接通道9里的残余液体排除干净。保持并一直保持5%的二氧化碳气体含量。
[0023]通过细胞培养分区A进口孔4、细胞培养分区A出口孔8，和细胞培养分区B进口孔3、细胞培养分区B出口孔10，将细胞培养分区All和细胞培养分区B12内的培养液，统一吸出1yL的量，吸出的量要大于所要加入的生长因子试剂量。然后通过分区的各自进出口孔，加入实验所需的1-4 μ L的骨细胞生长因子试剂，并利用进出口，多次来回吸打溶液，混合均匀所加试剂。最后将进样孔6和出样孔14导管连通入二氧化碳气体，保持进样通道5、出样通道7、连接通道9的畅通，保持并一直保持5%的二氧化碳气体含量。
[0024]实施例二
参照图1至图4的形状结构，在1.2mm厚的载玻片上粘贴有4个细胞培养/分选单元的双层芯片体I。4个细胞培养/分选单元2的进样通道5、出样通道7、连接通道9的宽 X 深尺寸分别为:50父5(^111，50\5(^111，100\5(^111，100\5(^111，深度11=5(^111。细胞培养分区All和细胞培养分区B12的深度H=10 μπι。细胞筛选孔13的宽度尺寸，分别为10 μ m/10 μ m，10 μ m/10 μ m，20 μ m/20 μ m，50 μ m/50 μ mD
[0025]参照实施例一的操作，筛选培养肺癌细胞。不同种肺癌细胞筛选培养贴壁后，各个分区，加入不同浓度的癌细胞药物，进行抑制实验。
[0026]实施例三
参照图1至图4的形状结构，在1.2_厚的载玻片上粘贴有6个细胞培养/分选单元的双层芯片体I。6个细胞培养/分选单元2的进样通道5、出样通道7、连接通道9的宽X深尺寸分别为:50 X 100 μ m，50 X 100 μ m，50 X 100 μ m，50 X 100 μ m，60 X 100 μ m，60 X 100 μ m，h=100 μπι。细胞培养分区All和细胞培养分区B12的深度Η=200 μπι。细胞筛选孔13的宽度尺寸，分另1J 为 5μ m/5 μ m，10 μ m/10 μ m，15 μ m/15 μ m，20 μ m/20 μ m，30 μ m/30 μ m，40 μ m/40 μ m。
[0027]参照实施例一的操作，筛选培养血液细胞。不同种类细胞筛选培养贴壁后，各个分区，加入不同浓度的刺激药物，进行增殖和抑制实验。
【主权项】
1.一种双层细胞筛选培养芯片，其主要由双层芯片体(I)和细胞培养/分选单元(2)组成，其特征在于:双层芯片体(I)由上下大小尺寸一致的上层芯片(16)和下层芯片(15)两层组成；双层芯片体(I)呈长方形，在下层芯片(15)的上面，加工有相互盘绕成圆形的细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12);在双层芯片体(I)的上层芯片(16)的下面，与圆盘形的细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12)的细胞培养分区墙(17)正上方的位置，加工有相对应的相互盘绕成圆盘形的进样通道(5)和出样通道(7);圆盘形的细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12)与圆盘形的进样通道(5)和出样通道(7)共同组成了细胞培养/分选单元(2);在双层芯片体(I)上排布的第一个细胞培养/分选单元(2)，其圆形外面的进样通道(5)的端头，加工有进样孔(6)，出样通道(7)伸出圆形细胞培养/分选单元(2 )后与连接通道(9 )相连，连接通道(9 )再连接第二个细胞培养/分选单元(2 )的进样通道(5);依次类推，I个双层芯片体(I)共连接2- 6个细胞培养/分选单元(2);最后一个的细胞培养/分选单元(2)的出样通道(7)，伸出圆形细胞培养/分选单元(2)后与出样孔(14)相通；每个细胞培养/分选单元(2)的圆盘形的细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B( 12)，在各自圆盘的靠圆盘外侧的边处和圆盘中心处，都加工有细胞培养分区A进口孔(4)，细胞培养分区A出口孔(8 )，和细胞培养分区B进口孔(3 )，细胞培养分区B出口孔(10 );每个细胞培养/分选单元(2 )的进样通道(5 )和出样通道(7 )的两侧，加工有双侧宽度尺寸一致的细胞筛选孔(13)。2.根据权利要求1所述的一种双层细胞筛选培养芯片，其特征在于:所述进样通道(5)、出样通道(7)、连接通道(9)的尺寸在同一个双层芯片体(I)上统一一致；它们的宽X深的统一尺寸有:10Χ50 μπι，50Χ50 μπι，50Χ100 μπι，100X 100 μπ? 四个规格。3.根据权利要求1所述的一种双层细胞筛选培养芯片，其特征在于:所述上层芯片(16)下面的进样通道(5)和出样通道(7)，与下层芯片(15)上面的细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12)通过细胞筛选孔(13)相通；所述细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12)的深度尺寸H，在同一个双层芯片体(I)上统一一致；在同一个双层芯片体(I)上，进样通道(5)、出样通道(7)、连接通道(9)的深度h，尺寸是细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12)的深度H的1/2。4.权利要求1-3所述的一种双层细胞筛选培养芯片及操作方法，操作步骤如下: 第一步，先将细胞培养分区A进口孔(4)、细胞培养分区A出口孔(8)，和细胞培养分区B进口孔(3)、细胞培养分区B出口孔(10)，插上高度比插在进样孔(6)和出样孔(14)导管高的导管，并插入细胞培养分区A/B深度H的1/2 ； 第二步，按一定流速，将含有活细胞的液体样本，从进样孔(6)加入到进样通道(5)中，等待样品流经出样通道(7)和连接通道(9)，最后从出样孔(14)流出，用废液瓶收集，一直到样品筛选完; 第三步，通过进样孔(6 )和进样通道(5 )、出样通道(7 )、连接通道(9 )，将培养液通入细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12)，进行换液；然后将进样孔(6)和出样孔(14)导管连通入二氧化碳气体，将进样通道(5)、出样通道(7)、连接通道(9)里的残余液体排除干净；保持并一直保持5%的二氧化碳气体含量； 第四步，进行添加试剂的对比试验时，先通过细胞培养分区A进口孔(4)、细胞培养分区A出口孔(8 )，和细胞培养分区B进口孔(3 )、细胞培养分区B出口孔(10 )，将细胞培养分区A (11)和细胞培养分区B (12)内的培养液，统一吸出一定量，吸出的量要大于所要加入的试剂量；然后将进样孔(6)和出样孔(14)导管连通上二氧化碳气体，保持进样通道(5)、出样通道(7)、连接通道(9)的畅通，保持并一直保持5%的二氧化碳气体含量。
【专利摘要】本发明提供了一种双层细胞筛选培养芯片及操作方法，由上下大小尺寸一致的上层芯片和下层芯片两层组成，包含由圆盘形的细胞培养分区A和细胞培养分区B与圆盘形的进样通道和出样通道共同组成了细胞培养/分选单元，每个细胞培养/分选单元的圆盘形的细胞培养分区A和细胞培养分区B，在各自圆盘的外侧和圆盘中心，都加工有细胞培养分区A进口孔，细胞培养分区A出口孔，和细胞培养分区B进口孔，细胞培养分区B出口孔。操作方法包括进样，和培养细胞，和实验试剂的加入混合。本发明有益效果是功能单元的模块化和集成化更高，制作方便简单，使用成本低廉，提高了实验效率。
【IPC分类】C12M3/00, C12M1/00
【公开号】CN104928147
【申请号】CN201510259258
【发明人】徐文峰, 徐紫宸, 廖晓玲, 杨晓玲
【申请人】重庆科技学院
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月21日