z, 1H), 6. 25 (s, 1H), 6. 06 (t, J=8. 8Hz, 1H), 5. 60 (d, J=7. 0Hz, 1H), 4. 92 (d, J=8. 1Hz, 1H), 4. 38 ( dd, J=IO. 6, 6. 9Hz, 1H), 4. 28 (t, J=7. 5Hz, 2H), 4. 13 (d, J=8. 5Hz, 1H), 3. 98 (d, J=5. 9Hz, 1H), 3. 87 (d, J=14. 1Hz, 1H), 3. 70 (d, J=6. 9Hz, 1H), 3. 64 (d, J=14. 2Hz, 1H), 2. 52 - 2. 45 (m, 1H), 2 .33 (s, 3H), 2. 23 (s, 3H), 2. 18 (s, 3H), I. 92 (dd, J=15. 6, 9. 0Hz), I. 82 (s, 3H), I. 76 (dd, J=15 ? 5, 9. 3Hz, 2H), I. 64 (s, 3H), I. 23 (s, 3H), I. 11 (s, 3H) ·
[0307] 实施例30制备13-[ (2' R，3' S)-3'-苯基-2' -羟基-3' - (5-乙基-2-噻吩 亚甲基）胺-丙酰基]-巴卡丁 ΠΙ (Iln，R1=Ac, R2=5-乙基-噻吩-2-基，R3=Ph)
[0308]
[0309] 步骤 1
[0310] 在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1 mmol)，樟脑磺酸9mg(0. 04mmol)，5-乙 基-噻吩-2-甲醒34mg(0. 24mmol)和分子筛IOOmg,密封，交换氦气并用氦气球保护，最后 加入2mL无水二氯甲烧，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0. 08mmol), 继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食 盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮=5:1)得到白色固体 78mg,收率 74%。
[0311] 步骤 2
[0312] 在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物52mg(0. 05mmol),以I. 5mL无水甲醇溶解， 室温搅拌条件下依次加入冰醋酸〇· 15ml (2. 6mmol)，锌粉52mg(0. 8mmol)，于45°C油浴中加 热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲 醇（20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离 (二氯甲烷：甲醇=40:1 - 30:1)得到白色固体产品IIn27mg，收率62%。
[0313] 屮匪1?(40(^取，0)(：13)5 8.06((1，了=7.2取，2!〇,7.66((1，了=7.5取，1!〇,7.58- 7. 51 (m, 2H), 7. 40 (d, J=6. 2Hz, 5H), 6. 64 (d, J=2. 4Hz, 1H), 6. 54 (d, J=3. 0Hz, 1H), 6. 25 (s, IH ,H-l), 6. 04 (t, J=8. 1Hz, 1H), 5. 60 (d, J=7. 1Hz, 1H), 4. 91 (d, J=8. 9Hz, 1H), 4. 37 (dt, J=18. 5 ,7. 6Hz, 2H), 4. 26 (d, J=8. 3Hz, 1H), 4. 12 (d, J=8. 1Hz, 1H), 4. 04 (d, J=5. 8Hz, 1H), 3. 92 (dd, J =12. 7, 6. 9Hz, 1H), 3. 72 - 3. 65 (m, 1H), 2. 57 - 2. 45 (m, 1H), 2. 25 (s, 2H), 2. 23 (s, 3H), 2. 19 ( s, 3H), L 93 - I. 84 (m, 1H), L 83 (s, 3H), I. 75 (t, J=12. 3Hz, 2H), L 64 (s, 3H), I. 22 (s, 3H), I .21 (s, 3H), I. 11 (s, 3H).
[0314] 实施例31制备13_[ (2' R，3' S)_3' -苯基-2' -羟基-3' - (3-甲基-2-噻吩 亚甲基）胺-丙酰基]-巴卡丁 IIiaic^R1=AhR2=S-甲基-噻吩-2-基，R3=Ph)
[0315]
[0316] 步骤 1
[0317] 在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1 mmol)，樟脑磺酸9mg(0. (Mmmol)，3-甲 基-噻吩-2-甲醒30mg(0. 24mmol)和分子筛IOOmg,密封，交换氦气并用氦气球保护，最后 加入2mL无水二氯甲烧，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0. 08mmol), 继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食 盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮=5:1)得到白色固体 69mg,收率 66. 8%。
[0318] 步骤 2
[0319] 在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物51mg(0. 05mmol)，以I. 5mL无水甲醇溶解， 室温搅拌条件下依次加入冰醋酸〇· 15ml (2. 6mmol)，锌粉52mg(0. 8mmol)，于45°C油浴中加 热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲 醇（20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离 (二氯甲烷：甲醇=40:1 - 30:1)得到白色固体产品IIo32mg，收率75%。
[0320] 1H (400MHz，CDCl3) δ 8. 06 (d，J=7. 4Hz，2H)，7. 67 (t，J=7. 4Hz，1H)，7. 55 (t，J=7 .7Hz, 2H), 7. 41 (d, J=4. 4Hz, 4H), 7. 28 (d, J=4. 2Hz, 1H), 7. 05 (d, J=5. 0Hz, 1H), 6. 73 (d, J=5. 1Hz, 1H), 6. 25 (s, 1H), 6. 05 (t, J=8. 2Hz, 1H), 5. 60 (d, J=7. 0Hz, 1H), 4. 92 (d, J=8. 9Hz, 1H), 4. 37 (dd, J=IO. 8, 6. 9Hz, 2H), 4. 26 (d, J=8. 4Hz, 1H), 4. 13 (d, J=8. 4Hz, 1H), 4. 05 (d, J=6. IHz ,1H), 3. 91 (d, J=14. 4Hz, 1H), 3. 71 (t, J=IL 0Hz, 2H), 2. 59 - 2. 45 (m, 1H), 2. 23 (s, 3H), 2. 2 I (s, 3H)，2. 01 (s, 3H), I. 96 - I. 86 (m, 2H), I. 83 (s, 3H), I. 72 (dd, J=12. 6, 6. 0Hz)，I. 64 (s, 3H), I. 21 (s, 3H), I. 11 (s, 3H).
[0321] 实施例32制备13-[ (2' R，3' S)-3'-苯基-2' -羟基-3' - (4-甲基-2-噻吩 甲基）胺-丙酰基]-巴卡丁 III (lip, R1=Ac, R2=4-甲基-噻吩-2-基，R3=Ph)
[0322]
[0323] 步骤 I
[0324] 在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0. lmmol)，樟脑磺酸9mg(0. 04mmol)，4-甲 基-噻吩-2-甲醒30mg(0. 24mmol)和分子筛IOOmg,密封，交换氦气并用氦气球保护，最后 加入2mL无水二氯甲烧，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0. 08mmol), 继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食 盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮=5:1)得到白色固体 87mg,收率 84%。
[0325] 步骤 2
[0326] 在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物51mg(0. 05mmol),以I. 5mL无水甲醇溶解， 室温搅拌条件下依次加入冰醋酸〇· 15ml (2. 6mmol)，锌粉52mg(0. 8mmol)，于45°C油浴中加 热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲 醇（20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离 (二氯甲烷：甲醇=40:1 - 30:1)得到白色固体产品IIp27mg，收率63. 7%。
[0327] 1H (400MHz，CDCl3) δ 8. 06 (d，J=7. 4Hz，2H)，7. 67 (t，J=7. 4Hz，1H)，7. 54 (t，J=7 .7Hz, 2H), 7. 47 - 7. 39 (m, 4H), 7. 28 (d, J=6. 2Hz, 1H), 6. 76 (s, 1H), 6. 70 (s, 1H), 6. 24 (s, 1H) ,6. 03 (t, J=8. 7Hz, 1H), 5. 59 (d, J=7. 0Hz, 1H), 4. 90 (d, J=8. 6Hz, 1H), 4. 51 - 4. 44 (m, 1H), 4. 36 (dd, J=IO. 6, 6. 7Hz, 1H), 4. 26 (d, J=8. 4Hz, 1H), 4. 12 (d, J=8. 3Hz, 2H), 4. 04 (d, J=14. 1Hz, 1H), 3. 75 (d, J=14. 2Hz, 1H), 3. 68 (d, J=7. 1Hz, 1H), 2. 53 (ddd, J=23. 0, 14. 8, 8. 1Hz, 1H), 2. 22 (s, 6H), 2. 15 (s, 3H), I. 92 - I. 86 (m, 2H)，I. 82 (s, 3H), I. 71 (d, J=9. 0Hz, 1H), I. 64 (s, 3H) ,I. 20 (s, 3H), I. 11 (s, 3H).
[0328] 药理实验
[0329] 实验例I
[0330] 对本发明合成的化合物进行五种肿瘤细胞系的细胞毒性筛选，与紫杉醇和多西他 赛进行比较。采用的方法是MTT (四氮唑）法。
[0331] 将对数生长期的各种人癌细胞接种于96孔板，每孔800-1500个细胞，培养24小 时后加药，一般每个药物设5个浓度，每个浓度设3个平行孔。在RPMI，1640 (GIBC0产品） 培养基、37°C、2%C02条件下培养4天，用Bi〇-Red450酶标仪，以450和570nm双波长检测， 计算细胞生长抑制率，并求ICki (半数抑制浓度)。结果列于表1。
[0332] 表1化合物Ia-p、Ila-p、紫杉醇和多西他赛对人癌细胞的细胞毒作用
[0333]
[0334]
[0336] 结果表明多数上述化合物具有一定的抗肿瘤活性，其中化合物Ia和IIa活性比较 突出。
[0337] 实验例2
[0338] 对Ia和IIa进行五种其他肿瘤细胞系的细胞毒性筛选。实验方法与实验例1相 同。结果列于表2。
[0339] 表2化合物la、Ila、紫杉醇和多西他赛对其它人癌细胞的细胞毒作用
[0340]
[0341] 以上表明化合物Ia和IIa的抗SK0V3卵巢癌活性与紫杉醇和多西他赛相当；IIa 的抗MX-I乳腺癌活性与紫杉醇相当，比多西他赛活性高；化合物Ia和IIa抗其余三种肿瘤 的活性虽较紫杉醇和多西他赛低，但仍表明具有一定的抗肿瘤活性。
[0342] 实验例3
[0343] 采用MX-I型裸鼠移植肿瘤动物模型，对la、Ila、发明人前一项相关专利 (CN101062925A)所述化合物1-4和1-13进行动物体内活性试验。1-4和1-13的结构如 下：
[0344]
[0345] 紫杉醇衍生物
[0346]
[0347] 无菌条件下收集MX-I肿瘤细胞，用灭菌生理盐水调整细胞密度至5X IO7个/ ml，取0. 2ml接种于裸鼠腋窝皮下，待肿瘤生长至直径Icm大小，无菌条件下取出，切成 ImmXlmm大小的瘤块，均匀接种于裸鼠腋窝皮下。5日后分组给药，每组6-7只。设阴性对 照组；TaxollOmg/kg 剂量组；TaxoerelOmg/kg 剂量组；1-4, 1-13, Ia 和 IIa5mg/kg 剂量组。 隔日腹腔注射给药1次，共给药4次。每隔1-2天称量体重并用游标卡尺测量肿瘤的长度 和宽度，按照公式V=aXb2/2计算出肿瘤的体积，其中a为肿瘤的长度，b为肿瘤的宽度。于 接种后第12天，将裸鼠脱白处死并拍照，剥离肿瘤后，称重、拍照，计算肿瘤相对体积、生长 率以及抑制率。
[0348] 表3化合物la、Ila、I - 4、I - 13、紫杉醇和多西他赛的体内抗肿瘤活性
[0349]
[0350] * :Ρ〈0· 05 ;** :Ρ〈0· 01，*** :Ρ〈0· 001，与阴性对照组比较；# :Ρ〈0· 05 : Ρ〈0. 001，与阴性对照组比较。
[0351] 实验结果(表3)表明Ia和IIa的体内抗肿瘤活性与紫杉醇和多西他赛相当，明显 优于1_4和1_13。
【主权项】
1. 如通式（A)所示的半合成紫杉醇衍生物及其药学上可接受的盐： 其中，R1选自氢、乙酰基，R3选自取代或非取代的苯基；所述取代苯基上的取代基选自C1-C5烷基、C1-C5烷氧 基、C1-C5烷氨基、C1-C5酰基、C1-C5酰氧基、C1-C5酰胺基、羟基、羟甲基、卤素、硝基、氨基、 氰基和叠氮基。其中R21、R22、R23、R24表不一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代 的Cl - 6直链或支链烷基、羟基、取代或非取代的Cl - 6直链或支链烷氧基、巯基、取代或非 取代的Cl - 6直链或支链烷硫基、氨基、取代或非取代的Cl - 6直链或支链烷氨基、其中包 括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的Cl -6直链或支链烷基酰基、羧基、取代或非 取代的Cl -6直链或支链烷基酰氧基、氨基甲酰基、取代或非取代的Cl -6直链或支链烷胺 酰基、取代或非取代的Cl - 6直链或支链烷基酰胺基、卤素、硝基、氰基、取代或非取代的五 或六元芳基、取代或非取代的含有1 - 4个选自N，O或S的杂原子的五或六元杂芳基； 取代或非取代的Cl -6直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、 氨基甲酰基、卤素、硝基、氰基、Cl - 6烷基、Cl - 6烷氧基、Cl - 6烷氨基、Cl - 6烷氧Cl - 6 烷基； 取代或非取代的五-六元芳基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲 酰基、卤素、硝基、氰基、Cl - 6烷基、Cl - 6烷氧基、Cl - 6烷氨基、Cl - 6烷氧Cl - 6烷基； 取代或非取代的含有1 - 4个选自N, O或S的杂原子的五-六兀杂芳基上的取代基选 自：羟基、疏基、氣基、fe基、竣基、氣基甲醜基、卤素、硝基、氛基、Cl - 6烷基、Cl - 6烷氧基、 Cl _ 6烧氣基、Cl - 6烧氧Cl _ 6烷基。2. 根据权利要求1的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的五元芳基选自 所述的六元芳基选自 所述的含有1-4个选自N，O或S的杂原子的五元杂环基选自：所述的含有1-4个选自N，O或S的杂原子的六元杂环基选自：3.根据权利要求2的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于， 所述的R2选自其中R211表不一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的Cl -4直链 或支链烷基、羟基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的Cl - 4 直链或支链烷硫基、Cl - 4烷氧Cl - 4烷基、氨基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氨 基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰基、取代或 非取代的Cl -4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰氧基、 氨基甲酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支 链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基； 取代或非取代的Cl -4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、 氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。4. 根据权利要求2的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于， 所述的R2选自其中R212表不一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的Cl -4直链 或支链烷基、羟基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的Cl - 4 直链或支链烷硫基、Cl - 4烷氧Cl - 4烷基、氨基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氨 基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰基、取代或 非取代的Cl -4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰氧基、 氨基甲酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支 链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基； 取代或非取代的Cl -4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、 氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。5. 根据权利要求2的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于， 所述的R2选自其中R2n表不一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的Cl -4直链 或支链烷基、羟基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的Cl - 4 直链或支链烷硫基、Cl - 4烷氧Cl - 4烷基、氨基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氨 基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰基、取代或 非取代的Cl -4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰氧基、 氨基甲酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支 链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基； 取代或非取代的Cl -4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、 氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。6. 根据权利要求2的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于， 所述的R2选自其中R2I4表不一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的Cl -4直链 或支链烷基、羟基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的Cl - 4 直链或支链烷硫基、Cl - 4烷氧Cl - 4烷基、氨基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷氨 基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰基、取代或 非取代的Cl -4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的Cl -4直链或支链烷酰氧基、 氨基甲酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的Cl - 4直链或支 链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基； 取代或非取代的Cl -4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、 氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。7. 根据权利要求3 - 6中任一项的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于， 所述式A化合物选自式I和II所示的化合物；其中R1选自氢（I)、乙酰基（Π ); R3选自取代或非取代的苯基；所述取代苯基的取代基选自C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、 C1-C5烷氨基、C1-C5酰基、C1-C5酰氧基、C1-C5酰胺基、羟基、羟甲基、卤素、硝基、氨基、氰 基和置氣基。 R2选自如下杂环：a8. 根据权利要求7的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于， 所述化合物选自下列群组：9.制备权利要求1-8中任一项化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：R2和R3的定义和权利要求1-8中任一项的定义相同； 1) 以具有通式（III)或（IV)所示的已知中间体化合物，与相应的杂环芳醛反应，然后 用还原剂还原得到通式（V)或（VI)所示化合物； 2) 脱除通式（V)或（VI)所示化合物的Troc保护基,得到相应的化合物（I)或（II)。10. 根据权利要求9的方法，其特征在于， 所述的还原剂选自：氰基硼氢化钠； 所述的脱除Troc保护基选自：以氯化铵和锌粉处理。11. 一种药物组合物，其特征在于，包括有效剂量的权利要求1-8中任一项化合物或其 药学上可接受的盐和药效学可接受的载体。12. 权利要求1-8中任一项化合物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应 用。13. 根据权利要求12的应用，其特征在于，所述的肿瘤选自其特征在于，所述的肿瘤选 自黑色素瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、肝癌、口腔表皮癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺 癌、结肠癌、膀胱癌。
【专利摘要】本发明公开了紫杉醇、多西紫杉醇衍生物及组合物和其抗肿瘤应用。具体而言公开了如通式（A）所示的半合成紫杉醇衍生物及其药学上可接受的盐。这类化合物的制备方法包括2步，步骤1中优选的还原剂选自：氰基硼氢化钠；步骤2中优选的脱除Troc保护基选自：以氯化铵和锌粉处理。一种药物组合物，这种药物组合物含有有效剂量的通式（A）所示的化合物或其药学上可接受的盐和药效学可接受的载体。这类化合物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
【IPC分类】A61K31/427, C07D409/14, A61K31/381, C07D409/12, A61P35/00, C07D417/12
【公开号】CN104974147
【申请号】CN201410131312
【发明人】吴克美, 叶仙蓉, 俞晓明, 陈晓光, 王凤, 李永强, 李燕, 周玉美, 梅梅, 李云峰, 籍秀娟, 张福荣
【申请人】中国医学科学院药物研究所
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2014年4月2日