糙皮侧耳发酵液的制备方法及该发酵液在降解黄曲霉毒素b1中的应用_2

文档序号:9271036阅读:来源:国知局
装量为体积比= 60-70:100,在温度为 26°C-28°C,通气量为1 : 0. 5-0. 7vvm,压力为0. 03Mpa-0. 05Mpa的条件下进行不低于72 小时的通气培养制成二级种子,W目测液体培养基中有大量的菌丝体悬浮,W镜检菌丝体 生长粗壮、均匀一致为二级种子培养终点。
[0032] 采用本发明的方法所获得的发酵液,按常规方法进行固液分离后得到的液体即为 趟皮侧耳发酵液制剂,固液分离的方法包括但不局限于采用板框分离、离屯、机分离等现有 技术,均不脱离本发明的技术实质。
[0033] 本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于:
[0034] 1、本发明工艺简便、成熟,仅需深层发酵设备,尤其是固液分离后的液体即可用于 解毒,固液分离后的菌丝体可作饲料应用,制备过程无=废污染。
[0035] 2、本发明中所使用的趟皮侧耳菌,不在致病菌种范围(食用平茹),安全可靠。
[0036] 3、本发明中培养基的主要原料为±豆淀粉和食用庶糖,具有安全、无毒、绿色的特 点。
[0037] 4、该趟皮侧耳菌发酵液制剂用于降解黄曲霉毒素Bi,降解速度快,降解率高,条件 温和,选择性好,性能稳定。用于降解自然条件下被污染的玉米饲料(AFBi含量《97.7yg/ kg)和豆稍饲料(AFB洽量《93. 5yg/kg)中黄曲霉毒素B1、,按饲料重量《9%。比例添加, 对毒素降解率> 73. 29%。
[003引 5、采用本发明制备的产品降解黄曲霉毒素Bi,使用方法简单,具有良好的可操作 性,解毒过程不会造成二次危害。
【具体实施方式】
[0039] W下结合实施例对本发明作进一步描述,但不应理解为对本发明的限定,本发明 的保护范围W权利要求记载的内容为准,任何依据说明书所作出的等效技术手段替换,均 不脱离本发明的保护范围。
[0040] 实施例1
[0041] 趟皮侧耳发酵液的制备方法,将趟皮侧耳(Pleurotusostreatus)CICC14012接种 于含有碳源、氮源、无机盐及微量元素的无菌培养基中进行通气发酵制成发酵液;
[0042] 发酵培养基由如下质量百分数的原料组成:
[0043] ±豆淀粉6.5 %,庶糖2. 0 %,酵母膏0. 18 %,硫酸锭0. 31 %,磯酸二氨钟0. 28 %, 硫酸儀0. 17%,维生素Bi〇. 0001 %,微量元素溶液6.0%,襲芦醇450uL/L,吐温80 0. 13%,余量为无菌水,pH= 5. 0 ;
[0044] 微量元素溶液;氯化巧1500mg,硫酸亚铁150mg,硫酸锋lOOmg,硫酸铜150mg,硫酸 车孟lOOOmg,硫酸钻200mg,硫酸侣钟20mg,棚酸lOmg,钢酸钢20mg,定容至1000血。
[0045] 通气发酵的工艺条件如下:
[0046] 接种量为体积比=7: 100,温度26°C,通气量1 : 0. 8vvm,压力为0. 03Mpa,培 养周期为不低于250小时。
[0047] 发酵终点的控制除时间因素外,应结合722可见光分光光度计,采用考马斯亮藍 法监测发酵液中蛋白质浓度,确定发酵终点。
[0048] 所述的趟皮侧耳菌种在接入无菌发酵培养基前经过扩大培养。
[0049] 所述的扩大培养包括斜面菌种、平皿菌种的制备、一级种子的制备W及二级种子 的制备。
[0050] 所述的斜面菌种的制备采用马铃馨培养基,平皿菌种的制备采用葡萄糖培养基, 温度为261:,培养周期4.5天。
[0化1] 所述的一级种子的制备包括如下工艺步骤:
[0化2] 将斜面菌种接种到平皿中的固体培养基上,在26°C条件下培养4. 5天,挑选生长 健壮的平皿菌种,在菌丝生长旺盛部位切成10mm圆片,按每瓶3片接种量接种到装有一级 种子培养基=角瓶中,在27°C条件下振荡培养90小时制成一级种子,装量为1000ml的=角 瓶装入200ml-级种子培养基,W目测一级种子培养基中有一定量的菌丝体悬浮,W镜检 菌丝体生长粗壮、均匀一致为一级种子培养终点。
[0化3] 所述的二级种子的制备包括如下工艺步骤:
[0化4] 按照一级种子与二级种子培养基的体积比=10 : 100的比例,将一级种子接入灭 菌后装有二级种子培养基的发酵罐中,装量为体积比=70:100,在温度为27°C,通气量为 1 : 0.7vvm,压力为0.05Mpa的条件下进行不低于72小时的通气培养制成二级种子,W目 测液体培养基中有大量的菌丝体悬浮,W镜检菌丝体生长粗壮、均匀一致为二级种子培养 终点。
[0化5] 所述的一级种子培养基和二级种子培养基采用如下质量百分含量的原料组成:
[0056]±豆汁21 %,葡萄糖1. 9 %,酵母膏0. 28 %,硫酸锭0. 29 %,磯酸二氨钟0. 25 %,硫 酸儀0. 17 %,维生素Bi〇. 0002 %,微量元素溶液4. 0 %,余量为无菌水,pH= 5. 3 ;
[0057] 微量元素溶液;氯化巧1500mg,硫酸亚铁150mg,硫酸锋lOOmg,硫酸铜150mg,硫酸 车孟lOOOmg,硫酸钻200mg,硫酸侣钟20mg,棚酸lOmg,钢酸钢20mg,定容至1000血。
[005引采用本实施例的方法所获得的发酵液按常规方法进行固液分离即可制成发酵液 制剂,固液分离包括但不局限于采用板框分离、离屯、机分离等。
[0059] 实施例2
[0060] 本实施例与实施例1的区别在于:
[0061] 发酵培养基由如下质量百分含量的原料组成:
[0062]±豆淀粉7. 0 %,庶糖1. 8 %,酵母膏0. 20 %,硫酸锭0. 29 %,磯酸二氨钟0. 25 %, 硫酸儀0. 18 %,维生素Bi〇. 0002 %,微量元素溶液5. 0 %,襲芦醇430yL/L,吐温80 0. 10%,余量为无菌水,pH= 4. 9。
[006引通气发酵过程中接种量为体积比=6 : 100,温度28°C,通气量1 : 0.7vvm,压力 为0. 04Mpa,培养周期为不低于265小时。
[0064] 斜面菌种和平皿菌种的制备中培养温度为25°C,培养周期5天。
[00化]一级种子的制备包括如下工艺步骤:
[0066] 将斜面菌种接种到平皿中的固体培养基上,在25°C条件下培养5天,挑选生长健 壮的平皿菌种,在菌丝生长旺盛部位切成13mm圆片,按每瓶4片接种量接种到装有一级种 子培养基=角瓶中,在28°C条件下振荡培养85小时制成一级种子,装量为1000ml的=角瓶 装入180ml-级种子培养基。
[0067] 二级种子的制备包括如下工艺步骤:
[0068] 按照一级种子与二级种子培养基的体积比=9 : 100的比例,将一级种子接入灭 菌后装有二级种子培养基的发酵罐中,装量为体积比=65:100,在温度为26°C,通气量为 1 : 0. 6vvm,压力为0. 03Mpa的条件下进行不低于72小时的通气培养制成二级种子。
[0069] 所述的一级种子培养基和二级种子培养基采用如下质量百分含量的原料组成:
[0070]±豆汁18 %,葡萄糖2. 2 %,酵母膏0. 30 %,硫酸锭0. 31 %,磯酸二氨钟0. 28 %,硫 酸儀0. 15 %,维生素Bi〇. 0001 %,微量元素溶液4. 5 %,余量为无菌水,pH= 5. 5。
[0071] 实施例3
[0072] 本实施例与实施例1的区别在于;
[0073] 发酵培养基由如下质量百分含量的原料组成:
[0074]±豆淀粉6.0 %,庶糖2. 2 %,酵母膏0. 22 %,硫酸锭0. 33 %,磯酸二氨钟0. 30 %, 硫酸儀0. 15 %,维生素Bi〇. 0003 %,微量元素溶液5. 5 %,襲芦醇470yL/L,吐温80 0. 12%,余量为无菌水,pH= 5. 3。
[0075] 通气发酵过程中接种量为体积比=8 : 100,温度27°C,通气量1 : 1.2vvm,压力 为0. 05Mpa,培养周期为不低于280小时。
[0076] 斜面菌种和平皿菌种的制备中培养温度为27°C,培养周期4天。
[0077] 一级种子的制备包括如下工艺步骤:
[007引将斜面菌种接种到平皿中的固体培养基上,在27°C条件下培养4天,挑选生长健 壮的平皿菌种,在菌丝生长旺盛部位切成7mm圆片,按每瓶5片接种量接种到装有一级种子 培养基=角瓶中,在26°C条件下振荡培养96小时制成一级种子,装量为1000ml的=角瓶装 入160ml-级种子培养基。
[0079] 二级液体种子的制备包括如下工艺步骤:
[0080] 按照一级种子与二级种子培养基的体积比=11 : 100的比例,将一级种子接入灭 菌后装有二级种子培养基的发酵罐中,装量为体积比=60:100,在温度为28°C,通气量为 1 : 0.5vvm,压力为0.04Mpa的条件下进行不低于72小时的通气培养制成二级种子。
[0081] 一级种子培养基和二级种子培养基采用如下质量百分含量的原料组成:
[0082]±豆汁19 %,葡萄糖1. 8 %,酵母膏0. 25 %,硫酸锭0. 33 %,磯酸二氨钟0. 30 %,硫 酸儀0. 18%,维生素Bi〇. 0003%,,微量元素溶液3. 5%,余量为无菌水,pH= 5.0。应用试 验
[0083]申请人就上述实施例制备的趟皮侧耳发酵液制剂分别用于含有黄曲霉毒素Bi的 水溶液、玉米饲料和豆稍饲料,进行降解黄曲霉毒素Bi的能力和添加量试验。试验结果如 下:
[0084] 解毒试验1
[0085
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