糊膏、水包油和油包水乳剂、乳剂 碳蜡（具有各种分子量的聚乙二醇）、半固体凝胶和含碳蜡（carbowax)的半固体混合物。也 参见Powell等人"Compendiumofexcipientsforparenteralformulations'TDA(1998) JPharmSciTechno1 52 :238_311。
[0124] 施用于患者的抗原的剂量可取决于患者的年龄和体型、目标疾病、病状、施用途径 等而有所变化。优选的剂量典型地根据体重或体表面积来计算。当本发明的抗体用于治疗 成人患者的与IL-33活性相关联的病状或疾病时，可为有利的是通常以约0. 01至约20mg/ kg体重，更优选地约0. 02至约7mg/kg体重，约0. 03至约5mg/kg体重，或约0. 05至约3mg/ kg体重的单一剂量静脉内施用本发明的抗体。可取决于病状的严重度来调整治疗的频率和 持续时间。用于施用抗-IL-33抗体的有效剂量和时程可依经验来决定；例如可通过定期评 估来监测患者病情进展，并相应地调整剂量。此外，剂量的物种间标定可使用本领域中熟知 的方法来进行（例如Mordenti等人，1991，Pharmaceut.Res. 8 :1351)。
[0125] 各种递送系统是已知的并可用于施用本发明的药物组合物，例如在脂质体包封、 微粒、微胶囊、能表达突变病毒的重组细胞、受体介导内吞作用（参见，例如Wu等人（1987) J.Biol.Chem. 262 : 4429-4432)。引入的方法包括但不限于皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、 皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。组合物可以任何方便的途径，例如通过输注或团注、通过由 上皮或粘膜层（例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等）吸收来施用，并可与其它生物活性剂共同 施用。施用可为全身性或局部的。
[0126] 本发明的药物组合物可由标准针或注射器进行皮下或静脉内递送。此外，就皮下 递送来说，笔型递送装置可容易地用于递送本发明的药物组合物。这种笔型递送装置可重 复使用或为一次性的。可重复使用的笔型递送装置一般利用含有药物组合物的可更换药 筒。一旦药筒内的所有药物组合物施用后并且药筒腾空，那么空药筒可容易丢弃并更换新 的含药物组合物的药筒。然后，笔型递送装置便可重复使用。在一次性笔型递送装置中，没 有可置换的药筒。取而代之，一次性笔型递送装置预先填充有药物组合物，所述药物组合物 被保持在装置内的贮存器中。一旦药物组合物的贮存器腾空，就将整个装置丢弃。
[0127] 许多可重复使用的笔型和自动注射器递送装置可应用于皮下递送本发明的药物 组合物。实例包括但不限于AUT0PEN?(0wenMumford，Inc.，Woodstock，UK)、DISETR0NIC? 笔（DisetronicMedicalSystems，Bergdorf，Switzerland)、HUMAL0GMIX75/25?笔、 HUMALOG?笔，HUMALIN70/30 ?笔、（EliLillyandCo.，Indianapolis，IN)、N0V0PEN? I、II和III(NovoNordisk，Copenhagen，Denmark)、N0V0PENJUNI0R?(NovoNordisk， Copenhagen，Denmark)、BD?笔(BectonDickinson，FranklinLakes，NJ)、OPTIPEN?、 OPTIPENPRO?、OPTIPENSTARLET?和OPTICLIK?(sanofi-aventis，Frankfurt，Germany)， 仅举几例。用于皮下递送本发明药物组合物的一次性笔型递送装置包括但不限于 S0L0STAR?笔（sanofi-aventis)、FLEXPEN?(NovoNordisk)和KWIKPEN?(EliLilly)、 SURECLICK?自动注射器（Amgen，ThousandOaks，CA)、PENLET?(Haselmeier，Stuttgart， Germany)、EPIPEN(Dey，L.P.)和HUMIRA?笔（AbbottLabs，AbbottParkIL)，仅举几例。
[0128] 在某些情况下，药物组合物可以受控释放系统来递送。在一个实施方案中，可使用 栗（参见Langer，如上；Sefton，1987,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng. 14 :201)。在另一实施 方案中，可使用聚合物材料；参见MedicalApplicationsofControlledRelease，Langer 和Wise(编著），1974,CRCPres.，BocaRaton，Florida。在另一实施方案中，受释放系统 可放置在靠近组合物的目标处，因此仅需要全身剂量的一部分（参见，例如Goodson，1984， MedicalApplicationsofControlledRelease，如上，第 2 卷，第115-138 页）。其它受控 制释放系统系论述于Langer，1990,Science249 : 1527-1533的综述中。
[0129] 可注射制剂可包括用于静脉内、皮下、皮内和肌肉内注射、点滴输注等的剂型。这 些可注射制备物可通过公共已知的方法来制备。例如，可注射制备物可例如通过将上述抗 体或其盐溶解、悬浮或乳化于常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备。用于注 射的水性介质例如生理盐水、含葡萄糖的等张溶液和其它佐剂等，其可与下列组合使用：适 合的增溶剂，如醇（例如乙醇）；多元醇（例如丙二醇、聚乙二醇）；非离子表面活性剂[例 如聚山梨醇酯80、HC0-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯（50摩尔）加合物）]等。可使的用油性 介质为例如芝麻油、大豆油等，其可与如苯甲酸苄酯、苄醇等的增溶剂组合使用。由此所制 备的注射剂优选地填充于适当的安瓶中。
[0130] 有利地，上述的用于口服或肠胃外用途的药物组合物被制备成呈适于配合活性成 分剂量的单位剂量的剂型。这些单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射剂（安 瓶）、栓剂等。所含的前述抗体的量一般为每单位剂量的剂型约5至约500mg;特别在注射 剂形式的情况下，优选的是，以约5至约lOOmg来含有前述抗体，而针对其它剂型以约10至 约250mg来含有前述抗体。
[0131]抗体的治疗用途
[0132] 由本发明人进行的使用小鼠模型系统的实验已对鉴别出可通过IL-33拮抗作用 治疗、预防和/或改善的各种疾病和症状做出贡献。例如，小鼠IL-33DNA的流体动力递 送造成小鼠中肺粘液堆积的诱发和总血清IgE的增加。此外，如通过微阵列分析所测量， miL-33DNA递送造成ST2和各种下游细胞因子的上调。由本发明人使用IL-33敲除小鼠进 行的实验也显示IL-33拮抗作用的各种潜在治疗益处。例如，在頂Q诱发的牛皮癣模型中， 已发现在野生型小鼠与IL-33 /小鼠之间，观察到相当的宏观评分和皮肤浸润。此外，在过 敏原诱发的肺炎症模型中，IL-33 /小鼠显示嗜酸性粒细胞和残余粘液堆积的下降。
[0133]本发明的抗体尤其可用于治疗、预防和/或改善与IL-33表达、信号传递或活性相 关联或由其所介导的任何疾病或病症，或可通过阻断IL-33与IL-33配体（例如ST2)之间 的相互作用，或以其它方式抑制IL-33活性和/或信号传递治疗的任何疾病或病症。例如， 本发明提供治疗下列的方法：哮喘（例如过敏性哮喘、非过敏性哮喘、严重难治性哮喘、哮 喘恶化、类固醇抗性哮喘、类固醇敏感性哮喘、嗜酸细胞性哮喘或非嗜酸细胞性哮喘等）、异 位性皮炎、牛皮癣、其它炎性病症、过敏、过敏症、心血管疾病、中枢神经系统疾病、疼痛、关 节炎（例如类风湿性关节炎、骨关节炎和牛皮癣性关节炎等）、巨细胞动脉炎、血管炎（白塞 氏病和ChurgStrauss综合征）、过敏性紫斑症（Henoch-Schonleinpurpura)、多发性硬化 症、炎性肠病（例如克隆氏症或溃疡性结肠炎）、狼疮和sjogren氏综合征。
[0134]本发明的抗体还可用于治疗、预防和/或改善一种或多种纤维化疾病。可通过施 用本发明的抗-IL-33抗体治疗的示例性纤维化疾病包括肺纤维化（例如特发性肺纤维 化、博来霉素引起的肺纤维化、石棉诱发的肺纤维化和闭塞性细支气管炎综合征）、慢性哮 喘、与急性肺损伤和急性呼吸窘迫相关联的纤维化（例如细菌性肺炎诱发的纤维化、创伤 诱发的纤维化、病毒性肺炎诱发的纤维化、呼吸器诱发的纤维化、非肺性败血症诱发的纤维 化和吸入诱发的纤维化）、硅肺、放射线诱发的纤维化、慢性阻塞性肺疾病（C0PD，其可能与 吸烟或暴露于二手烟有关或无关，或部分地由其引起或所造成）、硬皮病、眼睛纤维化、皮肤 纤维化（例如硬皮病）、肝纤维化（例如肝硬化、酒精诱发的肝纤维化、非酒精性脂肪肝炎 (NASH)、胆管损伤、原发性胆汁性肝硬化、感染或病毒诱发的肝纤维化、自身免疫性肝炎、肾 纤维化、心纤维化、动脉粥样硬化、支架内再狭窄和骨髓纤维化。
[0135]在本文中所述的治疗方法的情形中，抗-IL-33抗体可作为单一疗法施用（即作为 唯一的治疗剂）或与一种或多种另外的治疗剂（其实例描述于本文中其它处）组合施用。
[0136] 组合疗法和制剂
[0137]本发明包括包含如本文中所述的任何抗-IL-33抗体与一种或多种另外的治疗活 性组分组合的组合物和治疗制剂，以及包括将这些组合物施用于有需要的患者的治疗方 法。
[0138] 本发明的抗-IL-33抗体可与下列共配制或组合施用：例如，细胞因子抑制剂，包 括与细胞因子（例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、 IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL-25、IL-26)结合的小分子细胞因子抑制剂和抗体，或其相 应受体的拮抗剂。
[0139] 本发明的抗-IL-33抗体还可与抗病毒剂、抗生素、镇痛剂、皮质类固醇、类固醇、 氧、抗氧化剂、金属螯合剂、IFN-y和/或NSAID组合施用或共配制。
[0140] 另外的治疗活性组分可在施用本发明抗-IL-33抗体之前、同时或之后不久施用 (就本公开文的目的来说，这些施用方案被视为抗-IL-33抗体与另外的治疗活性组分"组 合"施用）。本发明包括药物组合物，其中本发明的抗-IL-33抗体是与本文中其它处所述 的另外的治疗活性组分中的一种或多种共调配。
[0141] 施用方案
[0142] 根据本发明某些实施方案，可在限定的实践过程内将多个剂量的抗-IL-33抗体 (或包含抗-IL-33抗体与本文中所提的任何另外的治疗活性剂组合的药物组合物）施 用于受试者。根据本发明的这个方面的方法包括向受试者连续施用多个剂量的本发明的 抗-IL-33抗体。如本文中所用，"连续施用"意指各剂量的抗-IL-33抗体在不同的时间 点施用于受试者，例如在以预定间隔分开的不同天（例如小时、天、周或月）。本发明包括 的方法包括：向患者连续施用单一初始剂量的抗-IL-33抗体，接着一个或多个第二剂量的 抗-IL-33抗体，和任选地接着一个或多个第三剂量的抗-IL-33抗体。
[0143] 术语"初始剂量"、"第二剂量"和"第三剂量"指的是施用本发明抗-IL-33抗体的 时间顺序。因此，"初始剂量"为治疗方案开始时所施用的剂量（也称为"基线剂量第 二剂量"为在初始剂量之后所施用的剂量；而"第三剂量"为在第二剂量之后所施用的剂量。 初始剂量、第二剂量和第三剂量都可含有相同量的抗-IL-33抗体，但就施用频率来说，一 般可彼此不同。然而，在某些实施方案中，包含在初始剂量、第二剂量和/或第三剂量中的 抗-IL-33抗体的量在治疗过程期间可互不相同（例如，在适当时上调或下调）。在某些实 施方案中，在治疗方案开始时施用的两个或更多个（例如2、3、4或5个）剂量为"负荷剂 量"，接着以较低频率为基础施用后续剂量（例如"维持剂量"）。
[0144] 在本发明的某些示例性实施方案中，各第二和/或第三剂量是紧接前一剂量之 后的 1 至 26 周（例如 10、l〇V2、11、1lV2、12、121/" 13、13V2、14、14V2、15、15V2、16、16V2、17、17V2、18、18V2、19、 191/2、20、201/2、21、21 1/2、22、221/2、23、231/ 2、24、241/2、25、251/2、26、26 1/2或更久）来施用。 如本文中所用的短语"紧接前一剂量"意指在多重施用顺序中，不间断剂量的顺序中、在下 一剂量施用之前施用于患者的抗-IL-33抗体的剂量。
[0145] 根据本发明的这个方面的方法可包括将任何数目的第二和/或第三剂量的 抗-IL-33抗体施用于患者。例如，在某些实施方案中，仅将单一第二剂量施用于患者。在 其它实施方案中，将两个或更多个（例如2、3、4、5、6、7、8或更多个）第二剂量施用于患者。 同样的，在某些实施方案中，仅将单一第三剂量施用于患者。在其它实施方案中，将两个或 更多个（例如2、3、4、5、6、7、8或更多个）第三剂量施用于患者。
[0146] 在涉及多个第二剂量的实施方案中，各第二剂量可以与其它第二剂量相同的频率 来施用。例如，各第二剂量可在紧接前面剂量后1至2周或1至2个月施用于患者。同样 的，在涉及多个第三剂量的实施方案中，各第三剂量可以与其它第三剂量相同的频率来施 用。例如，各第三剂量可在紧接前面剂量后2至12周施用于患者。在本发明的某些实施方 案中，施用于患者的第二和/或第三剂量的频率在治疗方案过程内可有所不同。在治疗过 程期间，施用频率还可取决于个别患者的需求在临床检查后由医师做出调整。
[0147] 本发明包括其中以第一频率将2至6个负荷剂量施用于患者（例如每周一次、每 两周一次、每三周一次、每月一次、每两个月一次等），接着以较低频率为基础将两个或更多 个维持剂量施用于患者的施用方案。例如，根据本发明这个方面，如果负荷剂量以每月一次 的频率施用，那么维持剂量可每六周一次、每两个月一次、每三个月一次等施用于患者。
[0148] 抗体的诊断用途
[0149] 本发明的抗-IL-33抗体还可用于检测或测量样品中的表达IL-33或IL-33的细 胞，例如达到诊断目的。例如，抗-IL-33抗体或其片段可用于诊断特征为IL-33异常表达 (例如过度表达，表达不足，缺乏表达等）的病状或疾病。IL-33的示例性诊断测定可包括 例如：将得自患者的样品与本发明的抗-IL-33抗体接触，其中所述抗-IL-33抗体由可检 测标记或受体分子标记。或者，未标记的抗-IL-33抗体可与本身被可检测标记的第二抗体 组合用于诊断应用。可检测标记或报道分子可为放射性同位素，例如 3H、14C、32P、35S或1251 ; 荧光或化学荧光部分，例如荧光素异硫氰酸酯或罗丹明（rhodamine);或酶，例如碱性磷酸 酶、半乳糖苷酶、辣根过氧化酶或荧光素酶（luciferase)。可用于检测或测量样品的 IL-33的特定示例性测定包括酶联免疫吸附测定（ELISA)、放射性免疫测定（RIA)和荧光激 活细胞分选（FACS)。
[0150] 根据本发明的可用于IL-33诊断测定的样品包括可在正常或病理学条件下从含 有可检测量的IL-33蛋白或其片段的患者获得的任何组织或液体样品。一般来说，测量得 自健康患者（例如未罹患与异常的IL-33量或活性相关联的疾病或病状的患者）的特定样 品中IL-33的量以初始地建立IL-33的基线或标准量。然后可将IL-33的基线量与得自疑 似患有IL-33相关疾病或病状的个体的样品中所测量的IL-33的量进行比较。 实施例
[0151] 提出下列实施例以为本领域一般技术人员提供如何制造并使用本发明的方法和 组合物的完整公开和描述，但不意图限制发明人所认为的发明范围。虽然已尽力确保就所 用数字（例如量、温度等）来说的准确性，但仍应考量一些实验误差和偏差。除非另有指出， 否则份数为重量份，分子量为平均分子量，温度以摄氏度数表示，而压力为大气压或接近大 气压。
[0152] 实施例1.产生抗人IL-33的人抗体
[0153] 将包含人IL-33的免疫原与用于刺激免疫反应的助剂直接施用于包含编码人免 疫球蛋白重链可变区和k轻链可变区的DNA的VELOaMMUNE'K小鼠。通过IL-33-特 异性免疫测定监测抗体免疫应答。当达到所需的免疫应答时，收取脾脏细胞并与小鼠骨髓 瘤细胞融合以保留其生存力并形成杂交瘤细胞系。对杂交瘤细胞进行筛选并选择以鉴别 产生IL-33-特异性抗体的细胞系。使用这种技术获得一些抗-IL-33嵌合抗体（即，具有 人可变结构域和小鼠恒定结构域的抗体）；以这种方式产生的示例性抗体如下：H1M9559N、 H1M9566N、H1M9568N和H1M9565N。随后将来自嵌合抗体的人可变结构域克隆到人恒定结构 域上，以制造如本文中所述的全人抗-IL-33抗体。
[0154] 如US2007/0280945A1中所述，直接从没有与骨髓瘤细胞融合的抗原阳性B细胞 分离全人抗-IL-33抗体。使用这种方法，获得一些全人抗-IL-33抗体（即拥有人可变结 构域和人恒定结构域的抗体）；以这种方式产生的示例性抗体如下：H4H9629P、H4H9633P、H4H6940P、H4H9659P、H4H9660P、H4H9662P、H4H9663P、H4H9664P、H4H9665P、H4H9666P、 H4H9667P、H4H9670P、H4H9671P、H4H9672P、H4H9675P和H4H9676P。
[0155] 根据这个实施例的方法所产生的示例性抗-IL-33抗体的某些生物性质详述在下 文阐述的实施例中。
[0156] 实施例2.重链可变区和轻链可变区氨基酸序列
[0157] 表1列出所选的抗-IL-33抗体的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列对和⑶R 序列以及它们的对应抗体标识符。
[0158]表1
[0159]
[0161] 抗体在本文中典型地根据下列命名法来命名：Fc前缀（例如"HIM"或"H4H"），接 着数字标识符（例如，如表1中所示的"9559"、"9566"或"9629"等），接着"P"或"N"后 缀。因此，根据这种命名法，抗体在本文中可称为例如"H1M9559N"、"H1M9566N"、"H4H9629P" 等。在用于本文中的抗体命名上的HIM和H4H前缀指示抗体的特定Fc区同种型。例如， "HIM"抗体具有小鼠IgGIFc，而"H4H"抗体具有人IgG4Fc。本领域一般技术人员应了解，具 有特定Fc同种型的抗体可转变为具有不同Fc同种型的抗体（例如带有小鼠IgGIFc的抗 体可转变为带有人IgG4的抗体等），但在任何情况下，可变结构域（包括CDR)-通过如表1 所示的数字标识符指示-保持不变，并且结合性质预期为相同的或实质上类似的，与Fc结 构域的性质无关。
[0162] 实施例3.通过表面等离子体共振测定的与人IL-33的抗体结合
[0163]IL-33与纯化的抗-IL-33单克隆抗体结合的平衡解离常数（KD值）是使用实时 表面等离子体共振生物传感器、使用Biacore4000仪器来测定。将Biacore传感器表面先 用与多克隆兔抗-小鼠抗体（GE，#BR-1008-38)偶联或与单克隆小鼠抗-人Fc抗体（GE， #BR-1008-39)偶联的胺衍生化，以分别俘获表达为具有小鼠或人IgG4恒定区的抗-IL-33 单克隆抗体。所有的Biacore结合研究都在0.OlMADApH7. 4、0. 15MNaCl、3mMEDTA和 0. 05%v/v界面活性剂TWeen-20(ABS-ET电泳缓冲液）中进行。将在ABS-ET电泳缓冲液 (范围从100nM至3.7nM，3倍稀释）中所制备的不同浓度的人IL-33(hIL-33 ;R&DSystems， #3625-IL-010/CF)或表达为具有C-端六聚组氨酸标签的食蟹猴IL-33 (MfIL-33-6His; SEQIDNO:xx)，以30yL/分钟的流动速率注射于俘获了抗-IL-33单克隆抗体的表面上。 监测hIL-33或MfIL-33-6His与所俘获的单克隆抗体的缔合历时4分钟，并且监测它们在 ABS-ET电泳缓冲液中的解离历时10分钟。使用在线pH追逐测定形式，在0.01MADApH 6. 0、0? 15MNaCl、3mMEDTA和 0? 05%v/v界面活性剂Tween-20 (ABS-ETpH6 缓冲液）中研 究pH降低对各抗-IL-33抗体与hIL-33或MfIL-33-6His结合的影响。为了实现这个研 究，在ABS-ET电泳缓冲液中监测hIL-33或MfIL-33-6His与所俘获的单克隆抗体的结合历 时4分钟。在hIL-33或MfIL-33-6His在ABS-ET电泳缓冲液中解离30秒后，注射ABS-ET PH6缓冲液3分钟，并在低pH条件下测量分析物的解离。所有的结合动力实验都在25°C和 37°C下进行。动力缔合〇〇和解离（kd)常数是通过使用Scrubber2.0c曲线拟合软件将 实时感应图与1 : 1结合模型拟合来测定。结合解离平衡常数（KD)和解离半衰期（tl/2) 由动力学速率常数如下计算：
[0164]KD (M) = 1^/\并且 11/2 (min) =In(2) / (60*kd)
[0165] 在25°C和37°C下hIL-33和MfIL-33-6His与不同抗-IL-33单克隆抗体结合的结 合动力参数如表2至5所示。如表2所示，在25°C下，hIL-33以范围从78pM至757pM的Kd 与抗-IL-33抗体结合。如表3所示，在37°C下，hIL-33以范围从411pM至2. 03nM的Kd与 抗-IL-33抗体结合。在25°C和37°C下，一种抗-IL-33抗体显现弱的结合，并且因此其结 合动力参数无法使用1:1结合模型拟合。如表4所示，在25°C下，MfIL-33-6His以范围 从333pM至38nM的KD与抗-IL-33抗体结合。如表55所示，在37°C下，MfIL-33-6His以 范围从InM至48. 6nM的KD与抗-IL-33抗体结合。
[0166] 表2 :在25°C下抗-IL-33单克隆抗体与人IL-33结合的结合动力参数。
[0167]
[0168] *IC:不确定，因为在实验条件下观察到非常弱的结合，并且实时结合数据无法与 1 : 1结合模型可靠拟合。
[0169] **在实验条件下没有观察到IL33从所俘获的单克隆抗体解离，因此匕值固定为 1. 00E-05,并且得出的tl/2和KD值分别代表下限和上限。
[0170] 表3:在37°C下抗-IL-33单克隆抗体与人IL-33结合的结合动力参数。
[0171]
[0173] *IC:不确定，因为在实验条件下观察到非常弱的结合，并且实时结合数据无法与 1 : 1结合模型可靠拟合。
[0174] 表4 :在25°C下抗-IL-33单克隆抗体与MfIL-33-6His结合的结合动力参数。
[0175]
[0176] 表5 :在37°C下抗-IL-33单克隆抗体与MfIL-33-6His结合的结合动力参数。
[0177]
[0179] *FT:快速tl/2,与抗-IL-33单克隆抗体结合的MfIL-33_6His为
[0180] 实施例4.抗-IL-33抗体阻断IL-33与人类ST2受体结合
[0181] 抗-IL-33抗体阻断人IL-33(hIL-33)或食蟹猴IL-33与人ST2受体结合的能力 是使用竞争夹心ELISA来测量。将以表达为具有C-端人IgGIFc标签的人ST2蛋白ecto 结构域（hST2-hFc;SEQIDNO:306)