一种黄麻炭疽病抗性鉴定的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种黄麻炭疽病抗性鉴定的方法。
【背景技术】
[0002]黄麻(Jute)为椴树科(Tiliaceae)黄麻属(CorcAoriA?) —年生植物，是世界上仅次于棉花的第二大纤维作物，广泛栽培于印度、孟加拉、中国、泰国等国家。近年来，其作为优良的造纸、纺织及生物燃料原料而备受关注。同时黄麻纤维具有散热性好、吸湿性强、易降解、产量高等优良特性，因此引起了世界各国的重视。
[0003]随着研究的不断深入，黄麻越来越多的用途被开发出来，为了满足人们对于天然纤维需求的增长，黄麻的种植面积也在逐渐递增，但是由于自然与人为等因素使得黄麻病虫害逐渐加重，这就大大降低了黄麻的产量与纤维品质。在我国，黄麻病害主要有黄麻炭疽病、黄麻根结线虫病(/feferoofera ifar1wi)、黄麻立枯病Corchorf)等。而黄麻炭疽病是影响黄麻生产的主要病害，它在全国均有发生，尤其在温暖湿润的地区发病尤为严重。通过对其病情调查发现，黄麻在苗期与成株时期均可遭到炭疽菌的危害，该病可以危害到黄麻幼苗、茎杆、叶片、果实等各个生长部位，进而直接影响到黄麻的产量与品质，成为国内外黄麻生产和利用上的一大瓶颈。通过对黄麻种质资源进行炭疽病抗性鉴定，选育出高抗病性材料或品种，可提高黄麻育种水平，促进黄麻生产的发展，其具有重要的理论和实践意义。
[0004]中国发明专利(CN 103399143A)公开了一种快速鉴定烟草炭疽病抗性的方法，其利用炭疽菌毒素直接浸泡叶圆片，通过测量和统计病斑扩展程度，衡量材料抗性，达到了简单、高通量、快速准确的鉴定烟草种质对炭疽病抗性的目的。中国发明专利(CN103667427A)公开了一种用于鉴定草莓种质资源炭疽病抗性的引物序列及其鉴定方法，该方法以250份材料的基因组DNA为模板，通过对覆盖全基因组的146对SSR引物和64对AFLP引物进行PCR扩增并结合PAGE胶电泳分析，建立了草莓炭疽病抗性的特异遗传图谱，成功获得10对特异性高、在杂交后代显性强的SSR引物。应用该发明方法获得的引物序列进行草莓种质资源炭疽病抗性的鉴定，其鉴定结果与田间抗病吻合率达88.4%ο中国发明专利(CN 1858248A)公开了一种用于鉴定黄瓜炭疽病抗性的引物序列及其鉴定方法，它的步骤是:提取黄瓜基因组DNA ;用序列表中所述的核苷酸序列进行PCR扩增；PCR扩增产物的凝胶电泳分析；依据各被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，鉴定黄瓜炭疽病的抗性，该发明鉴定结果与田间抗病吻合率达97.27%。但目前国内外均未见涉及黄麻炭疽病抗性鉴定方法的报道和专利。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种黄麻炭疽病抗性鉴定的方法，该方法操作简便、成本低廉、可靠性高、周期短，可用于对杂交亲本材料及所选育和推广的黄麻品种进行炭疽病抗性鉴定，大大降低或避免黄麻炭疽病的危害，对黄麻抗病新品种的选育、推广及综合利用具有重要意义。
[0006]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种黄麻炭疽病抗性鉴定的方法，包括菌株培养、伤口形成、菌丝接种、套袋保湿、病斑测量的步骤，其具体操作如下:
O菌株培养:采用组织分离法获得黄麻炭疽菌菌株，于PSA (马铃薯蔗糖琼脂)培养基上培养并纯化；
2)形成伤口:于上午6-8时，将长至40-50cm高的黄麻植株，用刀片将上部3_4片叶片于叶柄基部切下，形成整齐的伤口 ；
3)菌丝接种:用孔径为5mm的打孔器在培养并纯化好的黄麻炭疽菌菌株上切取菌块，用接种针挑取菌块，使其菌丝直接接触黄麻植株上的伤口，并将菌块按压于伤口处进行接种，用锡箔纸缠绕包裹；
4)套袋保湿:向接种后的部位喷水，用保鲜袋将其套住，若袋内无水珠、水汽时，则继续向其内喷水保湿；
5)病斑测量:套袋2-3天后去除保鲜袋，继续侵染15天后测量黄麻植株上病斑的大小，根据病斑面积确定黄麻植株抗性的强弱。
[0007]黄麻炭疽病抗性鉴定的常用方法有针刺接种法、健株孢子喷雾法。与现有方法相比，本发明所提供的方法具有以下显著优点:(I)在人工控制的稳定条件下进行，其发病条件一致；(2)将叶片从叶柄基部切下，形成的侵染伤口面积大，利于炭疽菌的侵染；(3)用打孔器将菌株整块取下，并将菌丝按压于伤口处，使得菌株与入侵伤口直接接触，更有利于炭疽菌的快速侵染；(4)用锡箔纸将菌丝接种后的伤口固定，并套袋进行喷水保湿，给炭疽菌的侵染创造了更加合适的条件；(5)按照本发明方法可实现同一待测材料同时鉴定不同病原菌的抗性，且不影响黄麻正常生长发育和开花结实；(6)本发明操作过程简单、鉴定周期短、接种效率高、准确率高，可达到简单、高通量、快速准确地鉴定黄麻种质对炭疽病抗性的目的，是黄麻炭疽病抗性鉴定和评价的优良方法。
【具体实施方式】
[0008]为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0009]实施例1
一种黄麻炭疽病抗性鉴定的方法，其具体操作如下:
O菌株培养:采用组织分离法获得黄麻炭疽菌菌株，于PSA (马铃薯蔗糖琼脂)培养基上培养并纯化；
2)形成伤口:于上午6时，将长至40cm高的黄麻植株，用刀片将上部3片叶片于叶柄基部切下，形成整齐的伤口 ；
3)菌丝接种:用孔径为5mm的打孔器在培养并纯化好的黄麻炭疽菌菌株上切取菌块，用接种针挑取菌块，使其菌丝直接接触黄麻植株上的伤口，并将菌块按压于伤口处进行接种，用锡箔纸缠绕包裹；
4)套袋保湿:用喷壶向接种后的部位喷水，用保鲜袋将其套住，若袋内无水珠、水汽时，则用喷壶继续向其内喷水保湿；
5)病斑测量:套袋3天后去除保鲜袋，继续侵染15天后测量黄麻植株上病斑的大小，根据黄麻炭疽病病情分级标准，按病斑面积进行病情分级，即按病斑大小(mm2)为0-8、8.1-16.0、16.1-24.0、24.1-32.0、32.1-40.0，依次分为 0、1、2、3 和 4 级；
6)抗性评价:根据病情分级计算黄麻炭疽病病情指数，并