一种脂环化合物修饰的高分子材料及其制备方法与应用_2

文档序号:8936863阅读:来源:国知局
材料在保持高的基因转染效率的同时,仍保持较好的生物相容性。通过 基因转染实验发现,在优化材料浓度条件下,转染荧光素酶siRNA的效率与lipofectamine 2000相当甚至优于lipofectamine2000的转染效果。通过MTT细胞毒性检测实验发现,本 发明的转染基因载体的对细胞的毒性较小。
【附图说明】
[0040] 图1为实施例1中制备基因转染载体G5-NC0-HC5-x的合成路线及基因转染载体 结构示意图。
[0041] 图2为实施例1中制备基因转染载体G5-NC0-HC7-y的合成路线及基因转染载体 结构示意图。
[0042] 图3为实施例1中制备基因转染载体G5-NC0-AD-Z的合成路线及基因转染载体结 构示意图。
[0043] 图4为实施例1中制备基因转染载体G5-NC0-HC12-m的合成路线及基因转染载体 结构示意图。
[0044] 图5为实施例1中制备基因转染载体PEI-NC0-HC12-n的合成路线及基因转染载体 结构示意图。
[0045] 图6为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC5_x的一维核磁共振图谱。
[0046] 图7为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC7_y的一维核磁共振图谱。
[0047] 图8为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-AD-Z的一维核磁共振图谱。
[0048] 图9为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC12-m的一维核磁共振图谱。
[0049] 图10为实施例1中制备的基因转染载体PEI-NC0-HC12-n的一维核磁共振图谱。
[0050] 图11为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC5_29在Hela-luci细胞中敲 除荧光素基因的效率。
[0051] 图12为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC7_64在Hela-luci细胞中敲 除荧光素基因的效率。
[0052] 图13为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-AD-63在Hela-luci细胞中敲除 荧光素基因的效率。
[0053] 图14为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC12_33在Hela-luci细胞中敲 除荧光素基因的效率。
[0054] 图15为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC12_48在Hela-luci细胞中敲 除荧光素基因的效率。
[0055] 图16为实施例1中制备的基因转染载体PEI-NC0-HC12-91,PEI-NC0-HC12-116在 Hela-luci细胞中敲除荧光素基因的效率。
[0056] 图17为实施例1中制备的基因转染载体G5-NC0-HC12_33与其他转染载体在 Hela-luci细胞中的细胞毒性对比图。
【具体实施方式】
[0057] 结合以下具体实施例和附图,对本发明作进一步的详细说明,本发明的保护内容 不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下,本领域技术人员能够想到的变 化和优点都被包括在本发明中,并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、 条件、试剂、实验方法等,除以下专门提及的内容之外,均为本领域的普遍知识和公知常识, 本发明没有特别限制内容。
[0058] 实施例1 :
[0059] 本发明基于高分子和脂环化合物的基因转染材料即脂环化合物修饰的高分子材 料(G5-NC0-HC5-x,G5-NC0-HC7-y,G5-NC0-AD-Z,G5-NC0-HC12-m,PEI-NC0-HC12-m)的制备及 表征
[0060] (1)如图1所示为基于高分子骨架和脂环化合物功能基团的基因转染载体即脂 环化合物修饰的高分子材料G5-NC0-HC5-x的合成路线及该基因转染载体的结构示意图, G5-NC0-HC5-x的结构式以下如式(1A)所示:
[0061]
[0062] 其中,R=G5,即第5代聚酰胺-胺树形高分子,具有中心核,末端基团为伯胺基 团;
[0063] S=HC5,即环戊烷;
[0064] x表示环戊烷共价连接到第5代聚酰胺-胺树形高分子表面的数量;
[0065] 其中,G5的结构如式(2A)所示:
[0066]
[0067] 式(2A)中,M是第5代聚酰胺-胺树形高分子G5的中心核:乙二胺。
[0068] 本发明中,M还可以是氨、乙二胺、丁二胺、己二胺、辛二胺、葵二胺或1,12-十二烷 二胺。
[0069] -个具体的实施方式中,式(1A)所示基因转染载体G5-NC0-HC5-x的制备方法为: 取30mg的第5代聚酰胺-胺树形高分子溶于2毫升二甲亚砜溶剂中,再加入一定量的环戊 烷基异氰酸酯,将该反应在37摄氏度下搅拌反应48小时(是否有相应地反应时间范围,若 有的话,请补充),分离提纯,然后冷冻干燥,即可得到外观为白色粉末的基因转染载体即脂 环化合物修饰的高分子材料G5-NC0-HC5-x。
[0070] 对按上述步骤制备得到的基因转染载体G5-NC0-HC5_x进行核磁共振分析,如图6 所示为该基因转染载体的一维核磁共振图谱,环戊烷共价连接到第5代聚酰胺-胺树形高 分子表面的数量分别为29和60个。
[0071] (2)如图2所示为基于高分子骨架和脂环化合物功能基团的基因转染载体即脂 环化合物修饰的高分子材料G5-NC0-HC7-y的合成路线及该基因转染载体的结构示意图, G5-NC0-HC7-y的结构式如以下式(1B)所示:
[0072]
[0073] 其中,R=G5,为第5代聚酰胺-胺树形高分子,具有中心核,末端基团为伯胺基 团;
[0074] S=HC7,即环庚烷;
[0075]y表示环庚烷共价连接到第5代聚酰胺-胺树形高分子表面的数量;
[0076] 其中,G5的结构如式(2A)所示:
[0077]
[0078] 式(2A)中,M是第5代聚酰胺-胺树形高分子G5的中心核:乙二胺。
[0079] 本发明中,M还可以是氨、乙二胺、丁二胺、己二胺、辛二胺、葵二胺或1,12-十二烷 二胺。
[0080] -个具体的实施方式中,式(1B)所示基因转染载体G5-NC0-HC7_y的制备方法为: 取30mg的第5代聚酰胺-胺树形高分子溶于2毫升二甲亚砜溶剂中,再加入一定量的环庚 烷基异氰酸酯,将该反应在37摄氏度下搅拌反应48小时,分离提纯,然后冷冻干燥,即可得 到外观为白色粉末的基因转染载体即脂环化合物修饰的高分子材料G5-NC0-HC7-y。
[0081 ] 对按上述步骤制备得到的基因转染载体G5-NC0-HC7_y进行核磁共振分析,如图7 所示为该基因转染载体的一维核磁共振图谱,环庚烷共价连接到第5代聚酰胺-胺树形高 分子表面的数量分别为33和64个。
[0082] (3)如图3所示为基于高分子骨架和脂环化合物功能基团的基因转染载体即脂 环化合物修饰的高分子材料G5-NC0-AD-Z的合成路线及该基因转染载体的结构示意图, G5-NC0-AD-Z的结构式如以下式(1C)所示:
[0083]
[0084] 其中,R=G5,为第5代聚酰胺-胺树形高分子,具有中心核,末端基团为伯胺基 团;
[0085]S=AD,为金刚烷;
[0086]z表示金刚烷共价连接到第5代聚酰胺-胺树形高分子表面的数量;
[0087] 其中,G5的结构如式(2A)所示:
[0088]
[0089] 式(2A)中,M是第5代聚酰胺-胺树形高分子G5的中心核:乙二胺。
[0090] 本发明中,M还可以是氨、乙二胺、丁二胺、己二胺、辛二胺、葵二胺或1,12-十二烷 二胺。
[0091] -个具体的实施方式中,式(1C)所示基因转染载体G5-NC0-AD-Z的制备方法为: 取30mg的第5代聚酰胺-胺树形高分子溶于2毫升二甲亚砜溶剂中,再加入一定量的金刚 烷基异氰酸酯,将该反应在37摄氏度下搅拌反应48小时,分离提纯,然后冷冻干燥,即可得 到外观为白色粉末的基因转染载体即脂环化合物修饰的高分子材料G5-NC0-AD-Z。
[0092] 对按上述步骤制备得到的基因转染载体G5-NC0-AD-Z进行核磁共振分析,如图8 所示为该基因转染载体的一维核磁共振图谱,金刚烷共价连接到第5代聚酰胺-胺树形高 分子表面的数量分别为33和63个。
[0093] (4)如图4所示为基于高分子骨架和脂环化合物功能基团的基因转染载体即脂环 化合物修饰的高分子材料G5-NC0-HC12-m的合成路线及该基因转染载体的结构示意图,其 结构式如以下式(1D)所示:
[0094]
[0095] 其中,R=G5,为第5代聚酰胺-胺
当前第2页1 2 3 4 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1