肤还包括包含 变体或天然存在的CD47序列（例如，细胞外结构域序列或细胞外结构域变体）的任何肤或 肤片段，所述肤或肤片段可特异性地结合SIRPa并且抑制CD47与SIRPa之间的相互作用 而不会刺激足够的SIRPa活性来抑制吞隧作用。
[0044] 在某些实施方案中，可溶性CD47多肤包含CD47的细胞外结构域，包括信号肤（SEQ IDNO: 2)，W使得CD47的细胞外部分通常是142个氨基酸长，并且具有在SEQIDNO: 3中 列出的氨基酸序列。本文所述的可溶性CD47多肤还包括包含至少65 % -75 %、75 % -80 %、 80-85%、85% -90%或95% -99% (或未在65%至100%之间具体列举的任何同一性百分 比）的氨基酸序列的CD47细胞外结构域变体，所述变体保留结合SIRPa的能力而不刺激 SIRPa信号传导。
[0045]在某些实施方案中，信号肤氨基酸序列可被源自另一种多肤（例如像免疫球蛋白 或CTLA4)的信号肤氨基酸序列取代。例如，不同于全长CD47(其是跨越外细胞膜的细胞表 面多肤），可溶性CD47多肤是分泌型；因此，编码可溶性CD47多肤的多核巧酸可包括编码 与通常从细胞分泌的多肤相关的信号肤的核巧酸序列。
[0046] 在其它实施方案中，可溶性CD47多肤包含缺乏信号肤的CD47的细胞外结构域。在 示例性实施方案中，缺乏信号肤的CD47细胞外结构域具有在SEQIDNO: 1中列出的氨基酸 序列（124个氨基酸）。如本文所述，信号肤未暴露在分泌型或跨膜蛋白的细胞表面上，因为 该信号肤在蛋白质的易位期间裂解或该信号肤保持错定在外细胞膜上（此类肤还被称为 信号错）。CD47的信号肤序列据信在体内从前体CD47多肤裂解。
[0047] 在其它实施方案中，可溶性CD47多肤包含CD47细胞外结构域变体。此类可溶性 CD47多肤保留结合SIRPa的能力而不刺激SIRPa信号传导。CD47细胞外结构域变体可 具有与沈QIDN0:1 至少 65% -75%、75% -80%、80% -85%、85% -90%或 95% -99% 同 一（包括在所描述范围的任一个之间的任何同一性百分比）的氨基酸序列。
[0048] 本文使用术语"治疗（treatment)"、"治疗（treating)"、"治疗（treat)"等通常 是指获得所需的药理学和/或生理学作用。该作用就完全或部分预防疾病或其症状而言可 为防治性的和/或就部分或完全稳定或治愈疾病和/或可归因于该疾病的不利作用而言可 为治疗性的。术语"治疗"涵盖哺乳动物（具体地人）中的疾病的任何治疗，并且包括：(a) 预防该疾病和/或症状在可能易患该疾病或症状但尚未被诊断为患有该疾病或症状的受 试者中发生；化）抑制该疾病和/或症状，即阻止其发展；或（C)减轻该疾病症状，即引起该 疾病和/或症状消退。需要治疗的那些包括已经遭受损伤的那些（例如，具有癌症的那些， 具有感染的那些等）W及需要预防的那些（例如，具有对癌症易感性增加的那些、具有增加 的感染可能性的那些、疑似患有癌症的那些、疑似具有感染的那些等）。
[0049] 祀细胞可W是"遭受损伤的（inflicted)"细胞，其中术语"遭受损伤的"在本文用 于指具有可用抗CD47剂治疗的症状、病或疾病的受试者。"遭受损伤的"受试者可患有癌 症，可具有感染（例如，慢性感染）W及其它过度增生性病状，例如硬化症、纤维化W及类似 病状等。"遭受损伤的细胞"可w是引起症状、病或疾病的那些细胞。作为非限制性实例，遭 受损伤的患者的遭受损伤的细胞可W是癌细胞、感染的细胞等。可用抗CD47剂治疗病或疾 病的一种适应症是所设及的细胞（即，遭受损伤的细胞，例如癌性细胞、感染的细胞等）相 较于相同细胞类型的正常细胞表达增加水平的CD47。
[0050] 治疗性治疗是其中受试者在施用之前遭受损伤的一种治疗并且防治性治疗是其 中受试者在施用之前未遭受损伤的一种治疗。在一些实施方案中，受试者具有增加的变得 遭受损伤的可能性或在治疗之前疑似正遭受损伤。在一些实施方案中，受试者疑似具有增 加的变得遭受损伤的可能性。
[0051] 可用抗CD47剂治疗的症状、病和/或疾病的实例包括但不限于癌症和感染（例 如，慢性感染）。如本文所用，"癌症"包括任何形式的癌症（例如，白血病；急性骨髓性白血 病（AML);急性淋己细胞性白血病（A化）；转移；微小残留疾病；实体瘤癌症，例如，乳癌、膀 脫癌、结肠癌、卵巢癌、成胶质细胞瘤、平滑肌肉瘤和头颈部鱗状细胞癌；等）。其中癌细胞 表现出相较于非癌细胞的增加的CD47表达的任何癌症是待通过主题方法和组合物治疗的 适合的癌症。
[0052] 如本文所用，术语"感染"是指生物体（即受试者）的至少一个细胞中的任何状 态受感染剂感染（例如，受试者具有细胞内病原体感染，即慢性细胞内病原体感染）。如本 文所用，术语"感染剂"是指诱导感染的生物体的至少一个细胞中的增加的CD47表达的外 源生物实体（即病原体）。例如，感染剂包括但不限于细菌、病毒、原生动物W及真菌。细 胞内病原体是特别感兴趣的。感染性疾病是由感染剂引起的病症。一些感染剂在某些条 件下不引起可识别的症状或疾病，但在改变的条件下具有引起病状或疾病的潜力。主题方 法可用于治疗慢性病原体感染，例如包括但不限于病毒感染，例如，逆转录病毒、慢病毒、嗜 肝DNA病毒化epa化a virus)、瘤疹病毒、痘病毒、人乳头状瘤病毒等；细胞内细菌感染，例 如分支杆菌属（Mycobacterium)、嗜衣原体属（化lamydophila)、埃力克体属巧虹lichia)、 立克次氏体属巧ickettsia)、布鲁氏菌属度rucella)、军团菌属（Legionella)、弗朗西 斯氏菌属化rancisella)、李斯特氏菌属（Listeria)、柯克斯氏体属（Coxiella)、奈瑟氏 菌属（Neisseria)、沙口氏菌属（Salmonella)、耶尔森氏菌属（Yersinia sp)、幽口螺杆 菌版licobacter pylorij等；W及细胞内原生动物病原体，例如，追原虫属（Plasmodium sp)、锥体虫属（TiTpanosoma sp.)、贾第虫属（Giardia sp.)、弓形虫属（Toxoplasma sp.)、 利什曼虫属化eishmania sp.)等。
[0053] 如本文所用，"祀细胞"是在表面上表达CD47的细胞，其中掩蔽或W另外的方式改 变CD47阳性表型（例如，通过施用抗CD47剂）导致增加的吞隧作用。通常祀细胞是哺乳 动物细胞，例如人细胞。
[0054] 术语"接受者"、"个体"、"受试者"、"宿主"和"患者"在本文中可互换使用并且是 指需要诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者，具体地是人。用于治疗目的的"哺乳动物" 是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家养动物和农场动物，W及动物园动物、竞技 动物或宠物动物，如狗、马、猫、牛、绵羊、山羊、猪等。优选地，哺乳动物是人。
[00巧]"治疗有效剂量"或"治疗剂量"是足W实现所需临床结果（即，实现治疗功效）的 量。治疗有效剂量可在一次或多次施用中施用。出于本发明的目的，治疗有效剂量的抗CD47 剂是通过增加祀细胞（例如祀细胞）的吞隧作用足W减轻、改善、稳定、逆转、预防、减缓或 延迟疾病状态（例如，癌症或慢性感染）的进展的量。因此，治疗有效剂量的抗CD47剂W有效剂量减少祀细胞上的CD47与吞隧细胞上的SIRPa的结合W用于增加祀细胞上的吞隧 作用。
[0056] 在一些实施方案中，治疗有效剂量导致约40yg/ml或更多（例如，约50ug/ml或 更多、约60ug/ml或更多、约75ug/ml或更多、约lOOug/ml或更多、约125ug/ml或更多或 约150ug/ml或更多）的抗CD47剂（例如，抗CD47抗体）的持续血清水平。在一些实施 方案中，治疗有效剂量导致约40yg/ml至约300ug/ml(例如，约40ug/ml至约250ug/ml、 约 40ug/ml至约 200ug/ml、约 40ug/ml至约 150ug/ml、约 40ug/ml至约lOOug/ml、约 50ug/ ml至约 300ug/ml、约 50ug/ml至约 250ug/ml、约 50ug/ml至约 200ug/ml、约 50ug/ml至约 150ug/ml、约 75ug/ml至约 300ug/ml、约 75ug/ml至约 250ug/ml、约 75ug/ml至约 200ug/ ml、约 75ug/ml至约 150ug/ml、约lOOug/ml至约 300ug/ml、约lOOug/ml至约 250ug/ml或 约lOOug/ml至约200ug/ml)范围内的抗CD47剂（例如，抗CD47抗体）的持续血清水平。 在一些实施方案中，用于治疗实体瘤的治疗有效剂量导致约100yg/ml或更多的抗CD47剂 (例如，抗CD47抗体）的持续血清水平（例如，约lOOug/ml至约200ug/ml范围内的持续 血清水平）。在一些实施方案中，用于治疗非实体瘤（例如，急性骨髓性白血病（AMD)的 治疗有效剂量导致约50yg/ml或更多的抗CD47剂（例如，抗CD47抗体）的持续血清水平 (例如，75yg/ml或更多的持续血清水平；或约50ug/ml至约150ug/ml范围内的持续血清 水平）。
[0057] 因此，单个治疗有效剂量或一系列治疗有效剂量将能够实现且维持抗CD47剂的 血清水平。抗CD47剂的治疗有效剂量可取决于所使用的具体剂，但通常是约8mg/kg体重 或更多（例如，约8mg/kg或更多、约lOmg/kg或更多、约15mg/kg或更多、约20mg/kg或更 多、约25mg/kg或更多、约30mg/kg或更多、约35mg/kg或更多或约40mg/kg或更多），或约 lOmg/kg至约 40mg/kg(例如，约lOmg/kg至约 35mg/kg，或约lOmg/kg至约 30mg/kg)。用于 实现和/或维持特定血清水平所需的剂量与剂量之间的时间量成正比并且与所施用剂量 的数目成反比。因此，随着给药频率增加，所需的剂量减少。给药策略的优化将由本领域的 普通技术人员容易地理解和实践。
[0058] 亚治疗剂量是不足W实现所需临床结果的剂量（目P，量）。例如，亚治疗剂量的抗 CD47剂是不足W减轻、改善、稳定、逆转、预防、减缓或延迟疾病状态（例如，癌症、感染、炎 症等）的进展的量。在一些情况下，希望的是使用亚治疗剂量的抗CD47剂作为引物剂（在 下文更详细地描述）。虽然使用亚治疗剂量的抗CD47剂作为引物剂实现所需结果（例如， 受试者被"引发"W接受治疗有效剂量），但该剂量不被认为是"治疗剂量"，因为亚治疗剂 量不会有效地增加祀细胞的吞隧作用并且不足W减轻、改善、稳定、逆转、预防、减缓或延迟 疾病状态的进展。亚治疗剂量的抗CD47剂可取决于所使用的具体剂，但通常小于约lOmg/ kg。
[0059]"维持剂量"是意图为治疗有效剂量的剂量。例如，在确定治疗有效剂量的实验中， 可将多个不同的维持剂量施用至不同受试者。如此，一些维持剂量可能是治疗有效剂量并 且其它维持剂量可能是亚治疗剂量。
[0060]引物剂。如本文所用，术语"引物剂"是指针对进一步施用治疗有效剂量的抗CD47 剂引发受试者的剂。本发明人已经发现当在无首先施用引物剂的情况下向受试者施用治 疗有效剂量的抗CD47剂时，高的需要剂量可引起红细胞（红细胞，RBC)的剂量依赖性损失 (例如，如W下在小鼠和非人灵长类（NH巧模型中所示）。本领域的普通技术人员将容易地 理解如何测量RBC的损失。例如，RBC的损失可例如通过测量血细胞比容随时间推移的变 化百分比和/或通过随时间推移测量血红蛋白（例如，随时间推移的变化百分比，g/化等） 来监测（图1 -图3和图7 -图9)。由RBC的损失引起的贫血的严重性（在一些情况下致 死）因此可排除使用治疗有效剂量的抗CD47剂。然而，通过在施用治疗有效剂量的抗CD47 剂之前施用引物剂，受试者不会经历超越暂时的不利作用，在施用引物剂之后可发生的轻 度贫血。因此，施用引物剂用于针对未来施用治疗有效剂量的抗CD47引发受试者。
[0061] 当治疗灵长类动物时使用引物剂的主题方法是特别相关的，因为灵长类动物是对 RBC计数敏感性的并且易于发展贫血。因此，在一些实施方案中，受试者是灵长类动物（例 如，人、原猴亚目、猿猴、狐猴、瘦猴（lorisoids)、眼镜猴、猴、猿、卷尾猴、吼猴、松鼠猴、拂 拂、雜猴、长臂猿、类人猿等）。
[0062] 引物剂增加受试者中的RBC的数目并且因此抵消由施用治疗有效剂量的抗CD47 剂引起的RBC的损失。因此，在一些实施方案中，引物剂是红细胞生成刺激剂巧SA)。ESA 是本领域中已知的并且包括但不限于促红细胞生成素巧P0)、EP0衍生物和EP0刺激化合 物。适合的实例包括但不限于：EP〇a、EP0P、EP〇5、EP0?、EP(K、达贝泊汀a(Aranesp)、 依泊汀曰（Procrit)、Epocept(Lupinph曰rm曰）、N曰nokine(N曰nogenPharmaceutical biotechnology,Vietnam)、Epofit(Intaspharma)、Epogen(Amgen)、Epogin、Eprex、 (Janssen-Cilag)、NeoRecormon(Hoffmann-LaRoche)、Recormon、甲氧基聚乙二醇-依 泊汀P(Mircera) (Roche)、Dynepo、Epomax、Silapo(Stada)、Retacrit(Hospira)、 Epocept(LupinPh曰rm曰ceutic曰1s)、EPOTrust(P曰n曰ce曰BiotecLtd.)、Erypro Safe(BioconLtd.)、Repoitin(SerumInstituteofIndiaLimited)、Vintor巧mcure Pharmaceuticals)、Epofit(Intaspharma)、Erykine(IntasBiopharmaceutica)、 Wepox(WockhardtBiotech)、Espogen(LGlifesciences)、ReliPoietin(RelianceLife Sciences)、Sh曰npoietin(Sh曰nth曰BiotechnicsLtd. )、Zyrop C曰dil曰（HealthcareLtd.)、 EPIAOCrH证PO)W及（ShenyangSunshine化armaceuticalCo. .LTD.Qiina)。应该施用的 ESA的剂量取决于所使用的剂的性质，并且还取决于众多受试者特异性因素（例如，年龄、 体重等）。确定ESA的适当剂量的方法是本领域中已知的。在一些实施方案中，W根据制 造商的建议的剂量施用ESA，并且在一些情况下可低至约50单位/kg、约100单位/kg或约 150单位/kg的体重或高达约17, 000单位/kg的体重。
[006引在一些实施方案中，引物剂包含亚治疗剂量的抗CD47剂。本发明人已经发现施用 亚治疗剂量的抗CD47剂作为引物剂有效地针对未来施用治疗有效剂量的抗CD47剂引发受 试者，从而预防否则与治疗有效剂量相关的严重贫血。
[0064] 因此，术语"引发剂量"或如本文所用是指针对施用治疗有效剂量的抗CD47剂引 发受试者W使得该治疗有效剂量不会导致RBC的严重损失（降低的血细胞比容或减少的 血红蛋白）的引物剂（例如，抗CD47剂、ESA等）的剂量。抗CD47剂的具体适当的引发剂 量可取决于所使用的剂的性质且取决于众多受试者特异性因素（例如，年龄、体重等）变 化。抗CD47剂的适合引发剂量的实例包括但不必限于W下范围：约0. 〇5mg/kg至约lOmg/ kg(例如，约 0.Img/kg至约lOmg/kg、约 0.Img/kg至约 7. 5mg/kg、约 0.Img/kg至约 5mg/kg、 约 0.Img/kg至约 4mg/kg、约 0.Img/kg至约 3mg/kg、约 0. 5mg/kg至约lOmg/kg、约 0. 5mg/kg至约 7. 5mg/kg、约 0. 5mg/kg至约 5mg/kg、约 0. 5mg/kg至约 4mg/kg、约 0. 5mg/kg至约 3mg/ kg、约Img/kg至约lOmg/kg、约Img/kg至约 7. 5mg/kg、约Img/kg至约 5mg/kg、约Img/kg至 约 4mg/kg、约Img/kg至约 3mg/kg、约Img/kg、约 2mg/kg、约 3mg/kg、约 4mg/kg、约 5mg/kg、 约7. 5mg/kg或约lOmg/kg)。在一些实施方案中，引物剂包含ESA与引发剂量的抗CD47剂 的组合。
[0065]"负载剂量"是意图为引发剂量的剂量。例如，在确定有效引发剂量的实验中，可将 多个不同的负载剂量施用至不同受试者。如此，一些负载剂量可能是引发剂量并且其它负 载剂量可能不是引发剂量。
[0066] 术语"特异性结合"、"特异性地结合"等是指相对于溶液或反应混合物中的其它 分子或部分非共价或共价优先结合分子（例如，抗体相对于其它可获得的多肤特异性地结 合特定多肤或表位，或结合SIRPa多肤）。在一些实施方案中，一个分子对它所特异性地 结合的另一个分子的亲和力特征在于10-5M或更低（例如，10-6M或更低、10-7M或更低、 10-8M或更低、10-9M或更低、10-10M或更低、10-11M或更低、10-12M或更低、10-13M或更 低、10-14M或更低、10-15M或更低或10-16M或更低）的KD(解离常数）。"亲和力"是指结 合的强度，增加的结合亲和力与较低的KD相关。
[0067] 如本文所用的术语"特异性结合成员"是指特异性结合对的成员（即，两个分子， 通常两个不同的分子，其中一个分子例如第一特异性结合成员通过非共价方式特异性地结 合另一个分子，例如，第二特异性结合成员）。适合的特异性结合成员包括特异性地结合 CD47和/或SIRPa的剂（即，抗CD47剂），或W另外的方式阻断CD47与SIRPa之间的相 互作用的剂。
[006引术语"多肤"、"肤"和"蛋白质"在本文中可互换使用来指氨基酸残基的聚合物。该 术语还适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的 氨基酸聚合物，并且适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。
[0069] 术语"吞隧细胞（phago巧ticcell)"和"吞隧细胞（phago巧te)"在本文中可互 换使用来指能够吞隧作用的细胞。存在=种主要类别的吞隧细胞：巨隧细胞、单核细胞（组 织细胞和单核细胞）；多形核白细胞（中性粒细胞）和树突细胞。
[0070] 关于患者的术语"样品"涵盖血液和生物来源的其它液体样品、实体组织样品如活 检标本或组织培养物或源自或分离自其的细胞及其子代。该定义还包括已经在其获得之后 W任何方式操作的样品，该方式如通过用试剂处理；洗涂；或针对某些细胞群体如癌细胞 富集。该定义还包括已经针对特定类型的分子例如核酸、多肤等富集的样品。
[0071] 术语"生物样品"涵盖临床样品，并且还包括通过外科切除获得的组织、通过活检 获得的组织、培养物中的细胞、细胞上清液、细胞裂解产物、组织样品、器官、骨髓、血液、血 浆、血清等。"生物样品"包括包含祀细胞或正常对照细胞或疑似包含此类细胞或源自其的 生物流体（例如，癌性细胞、感染的细胞等）的样品，例如包含从此类细胞获得的多核巧酸 和/或多肤的样品（例如，包含多核巧酸和/或多肤的细胞裂解产物或其它细胞提取物）。 包含来自患者的遭受损伤的细胞的生物样品还可包括未遭受损伤的细胞。
[0072] 术语"抗体"W最广泛意义使用且具体地涵盖单克隆抗体（包括全长单克隆抗 体）、多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）W及抗体片段，只要其表现出所需的 生物活性。"抗体"(Ab)和"免疫球蛋白"（Ig)是具有相同结构特征的糖蛋白。虽然抗体表 现出对特异性抗原的结合特异性，但免疫球蛋白包括抗体和缺乏抗原特异性的其它抗体样 分子。后一种多肤例如由淋己系统W低水平产生且由骨髓瘤W高水平产生。
[0073] 如本文所用的"抗体片段"及其所有语法变型被定义为包含抗原结合位点的完 整抗体的一部分或完整抗体的可变区，其中该部分不含完整抗体的Fc区的恒定重链结构 域（即，C肥、C册和CH4,取决于抗体同种型）。抗体片段的实例包括F油、F油'、F油'-甜、 F(油'）2W及Fv片段；双抗体；为具有由连续氨基酸残基的一个不间断序列组成的一级结 构的多肤的任何抗体片段（在本文被称为"单链抗体片段"或"单链多肤"），包括但不限于 (1)单链Fv(scFv)分子（2)含有仅一个轻链可变结构域的单链多肤或其含有轻链可变结 构域的=个CDR的片段，而无相关的重链部分（3)含有仅一个重链可变区的单链多肤或其 含有重链可变区的=个CDR的片段，而无相关的轻链部分W及（4)包含来自非人物种的单 个Ig结构域或其它特异性单个结构域结合分子的纳米抗体；W及由抗体片段形成的多特 异性或多价结构。在包含一个或多个重链的抗体片段中，该重链可含有在完整抗体的非Fc 区中发现的任何恒定结构域序列（例如IgG同种型中的CH1)，和/或可含有在完整抗体中 发现的任何较链区序列，和/或可含有融合至或位于该重链的较链区序列或恒定结构域序 列中的亮氨酸拉链序列。
[0074] 如在本发明中所用，术语"表位"意指抗体的互补位所结合的抗原上的任何抗原决 定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团（如氨基酸或糖侧链）组成，并且通常 具有特定=维结构特征W及特定电荷特征。
[00巧]立法
[0076] 提供用于使用治疗剂量的抗CD47剂治疗受试者的方法。主题方法包括向受试者 施用引物剂的步骤，接着向该受试者施用治疗有效剂量的抗CD47剂的步骤。在一些实施方 案中，施用治疗有效剂量的步骤在开始施用引物剂之后至少约3天（例如，至少约4天、至 少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天或至少约10天）之后进行。此 时间段例如足W由个体提供增强的网织红细胞产生。
[0077] 在一些实施方案中，施用治疗有效剂量的步骤在开始施用引物剂之后约3天至约 21天（例如，约3天至约17天、约3天至约14天、约3天至约12天、约4天至约12天、约 5天至约12天、约5天至约11天、约5天至约10天、约5天至约9天、约6天至约