提取。
[0034] 利用上述实施例1中的核酸提取装置进行核酸提取的过程如下：
[0035] (1)吸附：待处理样品加入试管中，将吸附管1的吸附端11插入待处理样品，打开 真空累63,利用吸管61产生的吸力使待处理样品中的核酸成分流经吸附滤忍3因吸附滤忍 3的特异性吸附而被吸附在吸附滤忍3中，滤液为含有细胞碎片和蛋白质等杂质的过滤液， 滤液经吸管61抽吸排出；
[0036] 似一次漂洗：漂洗液A加入到另一干净的试管中，将吸附端11插入漂洗液A中， 打开真空累63,利用吸管61产生的吸力使漂洗液A通过吸附滤忍3而清洗残留在吸附滤忍 3上的蛋白质或其他杂质成分，清洗后的漂洗液A进入经吸管61抽吸排出；
[0037] (3)多次漂洗：根据待处理样品处理需要，分步将多种不同的漂洗液注入到对应 地的新试管中，依次将吸附端11插入上述各漂流液中，分步按步骤（2)中的操作进行多次 漂洗；
[0038] (4)洗脱：漂洗结束后，关闭真空累63,将吸附管1插入装有洗脱液的新试管中并 使吸附端11伸入液面下，打开驱动装置驱动活塞4上下移动，洗脱液在活塞管2的吸力作 用下流经吸附滤忍3,并将吸附在吸附滤忍3上的核酸成分洗脱，重复多次洗脱吸附滤忍3 上吸附的核酸成分，收集至核酸收集容器或检测装置中，完成样品中核酸的提取。
[0039]W下通过具体实施例对本发明进行进一步阐述： W40] 实施例3 :
[0041] 1、样品前处理
[0042] 取60y1抗凝全血，加入等体积的裂解液化并混匀，接着加入适量蛋白酶，混匀 15s，37°C下反应lOmin，加入化体积1.5倍的无水乙醇，混匀得待处理样品。上述裂解液 GL蛋白酶均来自试剂盒ZD-XY-Micro-50 (购自宁波重鼎生物技术有限公司）。
[0043] 2、核酸提取
[0044] 利用本发明中的核酸提取装置，参照上述提取方法对待处理样品进行处理，提取 过程中使用的试剂均来自试剂盒ZD-XY-Micro-50 (购自宁波重鼎生物技术有限公司），如 图3所示，具体过程如下：
[0045] (1)吸附：将上述制得的待处理样品加入试管I中，将吸附管1的吸附端11插入 待处理样品，打开真空累63,利用吸管61产生的吸力使待处理样品中的核酸成分流经吸附 滤忍3(购自宁波重鼎生物技术有限公司）因吸附滤忍3的特异性吸附而被吸附在吸附滤 忍3中，滤液为含有细胞碎片和蛋白质等杂质的过滤液，滤液经吸管61抽吸排出；
[0046] (2) -次漂洗：漂洗液A(本实施例中漂洗液A为试剂盒ZD-XY-Micro-50中的洗 液Wl)加入到试管II中，将吸附端11插入漂洗液A中，打开真空累63,利用吸管61产生的 吸力使漂洗液A通过吸附滤忍3而清洗残留在吸附滤忍3上的蛋白质或其他杂质成分，清 洗后的漂洗液A进入经吸管61抽吸排出；
[0047] (3)多次漂洗：根据待处理样品处理需要，分步将漂洗液B(本实施例中漂洗液 C为试剂盒ZD-XY-Micro-50中的洗液W2)和漂洗液C(本实施例中漂洗液A为试剂盒 ZD-XY-Micro-50中的无水乙醇）注入试管m和试管IV中，依次将吸附端11插入上述各漂流 液中，分步按步骤（2)中的操作进行多次漂洗；
[0048] (4)洗脱：漂洗结束后，空吸两分钟使滤忍上的无水乙醇挥发，然后关闭真空累 63,将吸附管1插入装有洗脱液（本实施例中的洗脱液为50y1的试剂盒ZD-XY-Micro-50 中的TE溶液）试管V中并使吸附端11伸入液面下，打开驱动装置7驱动活塞4上下移动， 洗脱液在活塞管2的吸力作用下流经吸附滤忍3,并将吸附在吸附滤忍3上的核酸成分洗 脱，重复多次洗脱吸附滤忍3上吸附的核酸成分，收集至核酸收集容器中，完成样品中核酸 的提取。利用分光光度法对提取的DNA进行检测，检测结果如表1所示。 W例 比较例：
[0050] 利用MICRO离屯、柱法对全血中的核酸进行提取，具体过程如下：
[0051] (1)取60y1抗凝全血，加入等体积的裂解液化并混匀，接着加入适量蛋白酶，混 匀15s，37°C下反应lOmin，加入化体积1. 5倍的无水乙醇，混匀得待处理样品。
[0052] (2)将待处理样品全部移入套有收集管的微量离屯、柱中，转速12000g下离屯、 2min，取出离屯、柱（勿让离屯、柱碰到下面废液），弃去收集管中废液后将离屯、柱放回收集管 中。 阳化引 做向离屯、柱中加入500y1溶液W1，转速12000g下离屯、2min，取出离屯、柱后弃去 收集管中废液，将离屯、柱放回收集管中。
[0054] (4)向离屯、柱中加入500y1溶液W2,转速12000g下离屯、lOsec，取出离屯、柱后弃 去收集管中废液，将离屯、柱放回收集管中。 阳化5] (5)转速12000g下离屯、2min。
[0056] (6)将微量离屯、柱取出并放入新的1. 5ml离屯、管中，加入50y1溶液TE,室溫静止 2min，转速12000g下离屯、Imin,DNA即被洗脱。利用分光光度法对提取的DNA进行检测，检 测结果如表1所示。
[0057] 比较例中使用的试剂裂解液化、蛋白酶、溶液Wl、溶液TE也均来自试剂盒 ZD-XY-Micro-50。 阳05引表1为实施例和比较例中提取的DNA的检测结果
[0059]
[0060] 由表I可见，本发明中的核酸提取方法不仅操作方便，提取速度快，0D260/0D280 在1. 8左右，表明提取的DNA纯度高，无蛋白质等杂质，提取效果与离屯、柱法基本一致，可广 泛应用于各种生物样本中核酸的提取。
【主权项】
1. 一种核酸提取装置，包括具有第一连接端（12)和吸附端（11)的吸附管（1)、设于 上述吸附端（11)并能吸附待处理样品中核酸成分的吸附滤芯（3)及活塞管（2)，该活塞管 (2) 内置有能沿其内壁上下移动的活塞（4)，且该活塞管（2)包括第二连接端（22)和敞口 端（21)，并通过第二连接端（22)与第一连接端（12)连接而与吸附管（1)连通，其特征在 于，还包括用于抽吸流经吸附滤芯（3)的液体的抽吸组件（6)。2. -种核酸提取装置，包括具有第一连接端（12)和吸附端（11)的吸附管（1)、设于上 述吸附端（11)并能吸附待处理样品中核酸成分的吸附滤芯（3)及内置有活塞（4)的活塞 管（2)，该活塞管（2)包括第二连接端（22)和敞口端（21)，并通过第二连接端（22)与第一 连接端（12)连接而与吸附管（1)连通，所述敞口端（21)设置有一密封圈（9)，所述活塞（4) 嵌设在该密封圈（9)中并能沿活塞管（2)长度方向上下移动，其特征在于，还包括用于抽吸 流经吸附滤芯（3)的液体的抽吸组件（6)。3. 如权利要求1或2所述的核酸提取装置，其特征在于，所述抽吸组件（6)包括吸管 (61) 、单向阀（62)以及真空栗（63)栗，该吸管（61) -端用于抽吸液体，另一端通过单向阀 (62) 与真空栗（63)连接；或者，所述抽吸组件（6)包括吸管（61)、电动阀门以及电动气栗， 该吸管（61) -端用于抽吸液体，另一端通过电动阀门与电动气栗连接。4. 如权利要求3所述的核酸提取装置，其特征在于，所述吸管(61)插设于由吸附滤芯 (3) 与活塞⑷之间形成的液体腔（5)的腔壁上。5. 如权利要求4所述的核酸提取装置，其特征在于，所述吸管（61)的一端竖向延伸至 吸附管（1)中并位于吸附滤芯（3)上方，且所述吸管(61)的自由端套设有一次性保护管6. 如权利要求1或2所述的核酸提取装置，其特征在于，所述第一连接端（12)与第二 连接端（22)可拆卸连接。7. 如权利要求6所述的核酸提取装置，其特征在于，所述第一连接端（12)和第二连接 端（22)均呈圆台状，第二连接端（22)卡入第一连接端（12)且其外周面与第一连接端（12) 的内周面紧密贴合。8. 如权利要求1或2所述的核酸提取装置，其特征在于，还包括用于驱动所述活塞（4) 沿活塞管（2)内壁上下移动的驱动装置（7)，此外，所述吸附滤芯（3)为核酸吸附膜或核酸 吸附填料。9. 一种利用如权利要求1或2所述的核酸提取装置的核酸提取方法，其特征在于，经过 吸附滤芯吸附（3)待处理样品中的核酸成分、多种漂洗液分步多次漂洗除杂以及洗脱液洗 脱吸附于吸附滤芯（3)的核酸成分，最终获得所述的核酸溶液。10. 如权利要求9所述的核酸提取装置的核酸提取方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 吸附：将吸附管（1)的吸附端（11)插入待处理样品，打开真空栗(63)或电动气栗， 利用吸管（61)产生的吸力使待处理样品中的核酸成分流经吸附滤芯（3)因吸附滤芯（3) 的特异性吸附而被吸附在吸附滤芯（3)中，滤液为含有细胞碎片和蛋白质等杂质的过滤液 且经吸管（61)抽吸排出； (2) -次漂洗：将吸附端（11)插入漂洗液A中，打开真空栗(63)或电动气栗，利用吸 管（61)产生的吸力使漂洗液A通过吸附滤芯（3)而清洗残留在吸附滤芯（3)上的蛋白质 或其他杂质成分，清洗后的漂洗液A进入经吸管(61)抽吸排出； (3)多次漂洗：根据待处理样品处理需要，将吸附端依次插入多种不同的漂洗液中，且 各漂洗液分别按照步骤（2)中的操作进行漂洗； ⑷洗脱：漂洗结果后，关闭真空栗(63)或电动气栗，将吸附管⑴插入装有洗脱液的 干净容器中并使吸附端（11)伸入液面下，驱动活塞（4)上下移动，洗脱液在活塞管（2)的 吸力作用下流经吸附滤芯（3)，并将吸附在吸附滤芯（3)上的核酸成分洗脱，重复多次洗脱 吸附滤芯（3)上吸附的核酸成分，收集至核酸收集容器或检测装置中，完成样品中核酸的 提取。
【专利摘要】本发明涉及一种核酸提取装置，包括具有第一连接端和吸附端的吸附管、设置在上述吸附端并能吸附待处理样品中核酸成分的吸附滤芯以及内置有活塞的活塞管，该活塞管包括第二连接端和敞口端并通过第二连接端与第一连接端连接而与吸附管连通，还包括用于抽吸流经吸附滤芯的液体的抽吸组件；还涉及一种应用上述核酸提取装置的核酸提取方法。该核酸提取装置中提取过程中无需拆装装置，结构简单、操作方便，实现了核酸提取操作连续性，易于实现核酸的自动化提取，能根据需要进行多次漂洗，保证了核酸提取的质量，是一种快捷、高效的核酸提取方法，可广泛推广应用。
【IPC分类】C12M1/00, C12N15/10
【公开号】CN105296327
【申请号】CN201510705278
【发明人】陈辉
【申请人】陈辉
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月27日