一种植物叶片dna高通量快速提取磨样器的应用
【专利说明】-种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用 -、技术领域
[0001] 本发明设及一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，属于生物技术领 域。 二、【背景技术】
[0002] 随着基因组计划的飞速发展，许多植物的基因组不断测序完成，如水稻、玉米、普 通小麦、西瓜、番茄、马铃馨等。随着基因组测序的完成，科学家们更加广泛、深入的开展了 重要基因的定位、克隆和功能研究。而基因定位需要大量的从植物中提取DNA，进行PCR扩 增。传统的DNA提取方法是借助于研鉢研磨或磨样机将植物样品研磨成粉末，然后再用DNA 提取试剂（如SDSXTAB和TPS等）或DNA提取试剂盒提取。传统方法的优点是：可W提取 高质量、高浓度的DNA。但亦有明显的缺点，那就是样品仅能单个提取、步骤繁多、提取过程 需要设计数小时。在基因定位特别是精细定位过程中，针对一个基因的定位就需要提取几 千乃至上万个DNA样品。传统的DNA提取需要花费数天甚至数周来提取DNA。然而运些样 品在定位过程中，特别是精细定位过程中，仅需要用到一次或少数几次，就被丢弃。
[0003] 鉴于此，有些科学家发明了DNA快速提取方法，许多公司更是开发了DNA快速提取 试剂盒或者是直接PCR提取试剂盒。运些快速方法的共同特点是：用剪刀将样品剪碎放入 200yL的96孔PCR板中，置于PCR仪中加热5~10分钟即可完成DNA提取，极大的节约了 DNA提取时间。
[0004] 然而，将样品装到96孔板中的过程中，要用剪刀将每个样品分别剪碎、装入96孔 PCR板的各个加样孔中，非常耗时、费工。将植物样品直接放置的96孔PCR板中，不需要用 剪刀逐个剪碎，采用一种高通量的96孔磨样器将96个样品一次性全部磨碎，可W简化工作 程序，节省大量时间和人力，是一个急需改进的技术问题。 H、
【发明内容】
阳00引技术问题
[0006] 本发明目的为了解决DNA快速提取方法或DNA直接PCR过程中，植物样品需要先 用剪刀逐个剪碎，非常费时、费工的问题，而提供了一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样 器。
[0007] 技术方案
[0008] 一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其特征在于，所述磨样器由一 个基座和手柄、若干个磨样头和连接杆构成，磨样器基座为长方体，磨样器基座为热绝缘材 料，是用来固定连接杆和手柄的装置，基座上部与手柄连接，基部下部与连接杆相连，连接 杆下部与磨样头连接。
[0009] 所述磨样器各部件的连接方式有两种：一种是磨样头、连接杆、基座和手柄是分别 加工的独立部件，磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次通过螺栓连接成；另一种是利 用注射模具诱注系统直接诱注成型的整体部件，磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次 自然诱注连接形成。
[0010] 所述磨样头是破碎植物叶片的部件，形状为圆锥型、圆台型、球型、球缺型、楠球 型、扁球型、高球型或圆柱型；连接杆为圆柱体，是用来连接磨样头和基座的部件。
[0011] 所述磨样头直径为0. 2cm~0. 28cm;连接杆直径为0.Icm~0. 52cm;连接杆和磨 样头露出基座部分总长度为2cm~10cm。 阳012] 所述磨样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接；其排列方式为8行，12 列，相邻两根连接杆横向间距为0. 37cm~0. 9畑1，相邻两根连接杆纵向间距为0. 37cm~ 0. 9cm，与200yL的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹配。
[0013] 磨样器手柄为手持部分。
[0014] 有益效果
[0015] 本发明提供的植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用可W-步完成96孔PCR 板上所有样品破碎，达到DNA快速提取或直接PCR实验要求，极大节约的磨样时间和人力需 求。同时，磨样器对叶片的破碎效果要好于剪刀裁剪，能得到更碎的样品，因而更有利于DNA 提取，能得到更高浓度的DNA。 四、
【附图说明】
[0016] 图1本发明所诉的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器侧视结构示意图
[0017] 1磨样头；2连接杆；3基座；4手柄。
[0018] 图2本发明所诉的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器俯视结构示意图
[0019] 1磨样头；2连接杆；3基座；A-H:横向8排磨样头及其连接杆；I-XII:纵向12列 磨样头及其连接杆
[0020] 图3本发明所述的磨样器破碎水稻叶片样品PCR检测结果。
[0021] L1-L96:是聚丙締酷胺凝胶96个泳道，分别是96个不同的水稻叶片样品用本发明 所述的磨样器破碎，然后用M1370引物PCR扩增后聚丙締酷胺凝胶检测结果。 五、
【具体实施方式】 阳02引植物叶片DNA高通量快速提取磨样器由磨样头1、连接杆2、基座3和手柄4四部分 构成（图1，图2)。其特征在于磨样头1、连接杆2、基座3和手柄4依次连接而成。磨样头 1共96个，通过96根连接杆与基座基部连接（图1，图2)，其排列方式为8行，12列，A-H: 横向8排磨样头及其连接杆；I-XII:纵向12列磨样头及其连接杆，与200yL的96孔PCR 板及96孔PCR仪完全匹配（图2)。
[0023] 在使用时，先将样品装入200iiL的96孔PCR板中，再将PCR板在液氮中速冻1~ 2min后，手持磨样器将磨样头对准96孔PCR板孔，向下按压1至2次，即可将板孔中的样品 破碎。其工作原理是：液氮速冻使叶片变脆，用磨样器按压叶片时，磨样头的压力将叶片破 碎。磨样器对叶片的破碎效果要好于剪刀。
[0024] 下面W水稻叶片来具体说明磨样器使用方法：抽穗期，取水稻剑叶叶片分别置于 200yL的96孔PCR板中，置于-20°C冰箱备用。提DNA前，取出装有水稻叶片的96孔PCR 板，打开盖子置于液氮中1~2min，用磨样器按压2次。用8通道移液器向96孔板的每个 加样孔中加入40JiLPDlBuffer(TransGen),盖上盖子后，置于PCR仪中95°C加热lOmin， 再用8通道移液器向96孔板的每个加样孔中加入40JiLPDSBuffer(TransGen)。至此， 已经完成DNA提取，可进行后续的PCR反应或将DNA置于4°C或-20°C冰箱备用。PCR按W 下体系配制（IOyLPCR反应体系）：反应体系如下：DNA1化，RM3170-F(2. 5yM)0. 8化， RM3170-R(2. 5JiM) 0. 8JiL， 2巧綱孤舶(6#.PCRS叩erMix(TransGen) 5yL，d加2〇 2. 4yL。RM3170 引物序列为：RM3170-F:5'-GCCGGTAGATGCAGTATTGC-3'；RM3170-R: 5' -GTGCACAGTCACGCAGAAAG-3'。PCR反应条件为：94°C预变性 5min，94°C变性 30s，58°C退 火3〇3,72°(：延伸6〇3,35个循环，最后72°(：延伸1〇111111。？0?产物用8.0%(巧八）的聚丙締 酷胺凝胶150V电泳比30min，银染后，可W得到清晰的PCR条带（图3)。图3中LI至L96 泳道中的样品即为96个不同的水稻叶片样品用本发明所述的磨样器破碎，然后用RM1370 引物PCR扩增后，聚丙締酷胺凝胶电泳检测结果。
[00巧]由于磨样器对叶片的破碎效果要好于剪刀裁剪，能得到更碎的样品，因而更有利 于DNA提取，能得到更高浓度的DNA。
【主权项】
1. 一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其特征在于， 1) 所述磨样器由一个基座和手柄、若干个磨样头和连接杆构成，磨样器基座为长方体， 磨样器基座为热绝缘材料，是用来固定连接杆和手柄的装置，基座上部与手柄连接，基部下 部与连接杆相连，连接杆下部与磨样头连接； 2) 在使用时，先将样品装入200μL的96孔PCR板中，再将PCR板在液氮中速冻1~ 2min后，手持磨样器将磨样头对准96孔PCR板孔，向下按压1至2次，即将板孔中的样品破 碎。2. 根据权利要求1所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其特征在 于，所述磨样器各部件的连接方式有两种：一种是磨样头、连接杆、基座和手柄是分别加工 的独立部件，磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次通过螺栓连接成；另一种是利用注 射模具浇注系统直接浇注成型的整体部件，磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次自然 浇注连接形成。3. 根据权利要求1或2所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其特 征在于，所述磨样头是破碎植物叶片的部件，形状为圆锥型、圆台型、球型、球缺型、椭球型、 扁球型、高球型或圆柱型；连接杆为圆柱体，是用来连接磨样头和基座的部件。4. 根据权利要求3所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其特征在 于，所述磨样头直径为0. 2cm~0. 28cm;连接杆直径为0.lcm~0. 52cm;连接杆和磨样头露 出基座部分总长度为2cm~10cm。5. 根据权利要求1或2所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其 特征在于，所述磨样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接；其排列方式为8行，12 列，相邻两根连接杆横向间距为〇. 37cm~0. 9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0. 37cm~ 0· 9cm，与200μL的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹配。6. 根据权利要求3所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其特征 在于，磨样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接；其排列方式为8行，12列，相邻 两根连接杆横向间距为〇· 37cm~0· 9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0· 37cm~0· 9cm，与 200μL的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹配。7. 根据权利要求4所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，其特征 在于，磨样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接；其排列方式为8行，12列，相邻 两根连接杆横向间距为〇· 37cm~0· 9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0· 37cm~0· 9cm，与 200μL的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹配。
【专利摘要】本发明涉及一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器的应用，属于生物技术领域。磨样器由一个基座和手柄、若干个磨样头和连接杆构成，磨样器基座为长方体，磨样器基座为热绝缘材料，是用来固定连接杆和手柄的装置，基座上部与手柄连接，基部下部与连接杆相连，连接杆下部与磨样头连接。磨样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接；其排列方式为8行，12列，相邻两根连接杆横向间距为0.37cm~0.9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0.37cm~0.9cm，与200μL的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹配。本发明提供的植物DNA高通量快速提取磨样器的应用可以一步完成96孔PCR板上所有样品破碎，达到DNA快速提取或直接PCR实验要求，极大节约的磨样时间和人力需求。
【IPC分类】C12M1/33, C12N15/10
【公开号】CN105296469
【申请号】CN201510833833
【发明人】张所兵, 张云辉, 林静, 宋春凤, 方先文
【申请人】江苏省农业科学院
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月26日