较适合菌株选育的范围。而根据本发明一种优选的实 施方式，所述甘薦渣水解液采用甘薦渣水解原液。
[0024] 根据本发明的选育方法，优选地，步骤（2)中，取上述菌悬液涂布于甘薦渣水解液 固体培养基中，于25~30°C下培养3~4天。
[0025] 根据本发明的选育方法，优选地，步骤（2)中，所述的盐分按照培养裂殖壶菌的常 规配方添加即可。通常，所述盐分中的阳离子构成元素包括化、Mg、K和N，还可含有化，所 述盐分中的阴离子构成元素包括S和P。具体的组分可W包括Na2S〇4、化C1、M拆〇4、（NH4)2S04 和KH2PO4,最好含有化、B、化等微量元素。根据本发明一种优选的实施方式，所述盐分的 组成为 1 ~5g/L的化2S04、0. 5 ~Ig/L的Μ拆〇4、0. 25 ~0. 5g/L的（畑4)25〇4、1 ~3g/L的 KH2PO4、10~20g/L的海水晶。所述海水晶是海水及盐化工的产物，主要是通过对海水或面 水进行蒸发、离屯、、浓缩等一系列过程并加入微量元素而生产出来的。市售的海水晶都可W 满足需求。另外，所述海水晶还可用50~lOOvt%的海水或人造海水代替，所述人造海水的 组成包括化C1 15 ~18g/L，NaN〇3 0. 5 ~1.Og/L，KC1 0. 5 ~1.Og/L，MgClz0. 5 ~1.Og/ L，K2HP040 . 3 ~0.5邑/1，胞2册〇40. 3 ~0. 5g/L，皿O30.35g/L，FeCl3.6&0 0. 05 ~0.lOg/ L，MnClz· 4&0 3 ~5mg/L，ZnS〇4· 7&0 3 ~5mg/L，C11SO4· 5&0 2 ~4mg/L，C0CI2·6H2O 0. 3 ~0. 5mg/L等。
[0026] 根据本发明的选育方法，优选地，步骤（3)中所述传代培养仍采用步骤似所述的 甘薦渣水解液固体培养基，传代培养溫度是25~30°C，培养周期3~4天。
[0027] 根据本发明的选育方法，优选地，步骤（4)中所述的"稳定传代"，优选能够稳定传 代5代W上。
[002引根据本发明的选育方法，优选地，步骤（4)中所述菌体DHA的产量可通过将所述能 够稳定传代的菌株发酵培养后测定得到。所述发酵培养采用液体培养，液体培养基可W是 已知的裂殖壶菌发酵培养基；也可w由甘薦渣水解液，加入盐分，灭菌制成。所述甘薦渣培 养液和盐分的制备和组成同上文所述，不再寶述。优选地，所述发酵培养的条件为：溫度为 25~30°C，发酵周期为80~14化，更优选为100~12化。更优选地，所述发酵培养的接种 量为0. 5~1血/50ml，采用振摇培养，转速为180~22化/min。
[0029] 步骤（4)中，菌体DHA产量可根据本领域常规方法测定得到。根据本发明的选育 方法，优选地，菌体DHA产量的测定方法是：将发酵培养所得发酵液离屯、，优选于8000~ 1000化/min转速下离屯、，得到菌体，所述菌体用生理盐水洗涂，优选洗涂2~3次，均分为两 份，一份干燥，测定菌体生物量，另一份用于测定菌体油脂含量和油脂中DHA含量，计算DHA 的产量。DHA产量的计算方法为：
[0030] DHA产量=菌体生物量X菌体油脂含量X油脂中DHA含量
[0031] 所述干燥操作优选于80~100°C下干燥48~60h。所述菌体油脂含量和油脂中 DHA含量采用GC-MS法测定。
[0032] 根据本发明一种优选的实施方式，所述菌体油脂含量和油脂中DHA含量的测定方 法包括如下步骤：
[0033] ①提取油脂：将菌体用6~8mol/L的盐酸溶液重悬，于60~80°C下酸解30~ 90min，加入正己烧-乙醇（2~3:1，v/v)萃取2~3次，合并上清液，吹干有机溶剂，得到 油脂；
[0034] ②醋化反应：将所述油脂，加入正己烧、甲醇和浓盐酸，油脂、正己烧、甲醇、浓盐 酸的质量体积比为lOmg:2~3血：1~3血：0. 1~0. 3血，于60~65°C下醋化反应60~ 90min;所述浓盐酸是指质量分数超过37wt%的盐酸；
[0035] ③含量测定：采用GC-MS法测定醋化反应产物，得到菌体油脂含量和油脂中DHA含 量。
[0036] 根据本发明一种优选的实施方式，GC-MS参数为：采用HP~INN0WAX极性毛细管 柱，0. 25μmX250μmX30m;载气：He;载气流量：1. 0血/min,恒定流量；上样模式：分流， 分流比20 :1 ;进样量1yL;进样口溫度280°C;检测器溫度280°C;升溫程序：150°C保持 lmin，10°C/min升溫至 200°C，2°C/min升溫至 220°C，保持 5min。240°C后运行 3min，溶剂 延迟时间3min，扫描方式：全扫描。
[0037] 本发明还提供通过上述选育方法得到的裂殖壶菌FNU1。本发明的裂殖壶菌FNU1 的保藏单位为中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，保藏单位地址为中国湖北省武汉市武汉 大学，保藏日期为2015年10月23日，保藏编号为CCTCCNO:M2015636;分类命名为裂殖 壶菌FNU1 (Schizoc^triumsp.FNU1)。该菌株的菌体生物量（即细胞干重）达到30. 13g/ L利用GC-MS测得菌体油脂含量高达44.llwt%，油脂中DHA含量为49. 24wt%，DHA产量 为6. 5地/1。
[0038] 与现有技术相比，本发明具有W下优点：
[0039] 本发明提供的选育方法简单快捷，原料易得，成本低廉，大大提高了育种效率。首 次使用未脱毒的甘薦渣水解液筛选出了对其有抗性的裂殖壶菌菌株。本发明提供的裂殖壶 菌菌株可W在未脱毒的甘薦渣水解液中生长代谢，不需添加外源性碳源和氮源，且能够高 效合成油脂和DHA，生产成本低廉，同时提高了农业废料甘薦渣的利用价值。
【具体实施方式】
[0040] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于 此。
[0041] 本发明中，所述稀释液的稀释倍数解释如下：N倍稀释液是指稀释液的体积为原 液的N倍，当N为1时，实际上未经稀释，之所W稀释倍数可W为1，完全是为了表述方便。
[0042] 如无特殊说明，W下实施例中所述的实验方法均为常规方法；所用的材料、试剂 等，均从商业途径得到。制备例和实施例中采用的海水晶为天津汉沾同兴海水晶厂生产。采 用的裂殖壶菌初始菌株为本领域流通使用的裂殖壶菌（Schizochytriumsp.)，可W从市面 上购买，也可W向保存有该菌种的科研机构（例如福建师范大学）索取。
[0043]参考文献：T.化guchi,S.Tanaka,T.化kochi,T.Nak址ara,T.Higashihara. ProductionofhighyieldsofdocosahexaenoicacidbySchizochytriumsp.strain SR2LJournalof化eAmericanOilQiemists'Society.74, 11:1431-1434. (1997)
[0044] 制各例1
[0045] 甘薦渣水解液的制备方法，包括W下步骤：
[0046] (1)取棒糖后的甘薦渣，置于鼓风干燥箱内，于60°C下干燥3天，至其含水量低于 5wt%；
[0047] 似将干燥后的甘薦渣用粉碎机粉碎，过筛，得到粒径为2~20mm的甘薦渣粉； 柳48] 做将甘薦渣粉与0.Olmol/L的H2SO4溶液按照固液比为1:6混合，于120°C下反 应60min，过滤，滤液采用Ca(0H)2调节至抑5,静置比，过滤，得到甘薦渣水解原液。
[0049]制备俩I2
[0050] 甘薦渣水解液的制备方法，包括W下步骤：
[00川 （1)取棒糖后的甘薦渣，置于鼓风干燥箱内，于80°c下干燥2天，至其含水量低于 5wt%； 阳0巧似将干燥后的甘薦渣用粉碎机粉碎，过筛，得到粒径2~16mm的甘薦渣粉； 阳05引 做将甘薦渣粉与0. 02mol/L的H2SO4溶液按照固液比为1:3混合，于150°C下反 应120min，过滤，滤液采用Ca(0H)2调节至抑7,静置比，过滤，得到甘薦渣水解原液。
[0054] 制备俩I3 阳化5] 甘薦渣水解液的制备方法，包括W下步骤：
[0056] (1)取棒糖后的甘薦渣，置于鼓风干燥箱内，于70°C