抗耐药菌的活性，对临床分离的耐药菌株均不产生耐药性。而临床上常见 的抗生素作用耐药菌均出现耐药性，对其不产生抗菌作用。
[0021 ] 3、酶解稳定性实验 为了考察本发明合成的组合抗菌肽在胰酶环境中的稳定程度，我们测定了母肽RW及抗 菌肽J-RR-1与不同浓度胰酶共孵育lh、6h时对大肠杆菌的抑杀能力（见图3 )。图3的结果显 示，母肽RW在胰酶存在的环境中大大丧失了抗菌活性，而抗菌肽J-RR-1保持了抗菌活性。说 明发明合成的组合抗菌肽在胰酶环境中具有很好的稳定性。
[0022] 综上所述，本发明合成的D型氨基酸组合抗菌肽J-RR-1具有较强的抗菌活性和抗 临床分离耐药菌活性，同时对胰酶具有较高的稳定性。因此，可用于制备临床抗菌药物，BP 以该组合抗菌肽J-RR-1为活性成分，按药物学的常规工艺和辅料制备成内服制剂或外敷制 剂。
【附图说明】
[0023] 图1为J-RR-1的质谱图。
[0024] 图2为J-RR-1的纯度分析图。
[0025] 图3分别为抗菌肽与不同浓度胰酶共孵育lh、6h时对大肠杆菌的抑杀能力。
【具体实施方式】
[0026] 下面通过具体实施例对本发明组合抗菌肽的合成作进一步说明。
[0027] 实施例1、组合抗菌肽J-RR-1的合成 以出0和01^(100:1，￥/￥)为反应介质，(^04.5!1 20为催化剂（用量是肽六(3-祖6(此)-咖- 1摩尔量的10倍），抗坏血酸钠为抗氧化剂（用量是肽4〇-1'116(此)-1^-1摩尔量的15倍），分别 将纯化的肽Ac-Pra-RW-Ι与肽Ac-Nle(N3)- RW-1以1:1的摩尔比，采用点击化学的1，3_偶极 环加成反应2411后，将反应液经1^-耶1^(：纯化得到目标肽1-1^-1，产率为18.4%。纯度为 100.00%。产物质谱图见图1，纯度分析图见图2。
[0028]实施例2、组合抗菌肽J-RR-1的合成 以H20和DMF(20:1，V/V)为反应介质，CuS〇4 · 5H20为催化剂（用量是肽Ac-Nle(N3)_ Μι 摩尔量的 5倍 ） ， 抗坏血酸钠为抗氧化剂 （用量是肽Ac-Nle(N3)- RW-1 摩尔量的 20倍 ） ， 分别 将纯化的肽Ac-Pra-RW-1与肽Ac-Nle (N3) - RW-1以2:1的摩尔比，采用点击化学的1，3-偶极 环加成反应28h后，将反应液经RP-HPLC纯化得到目标肽J-RR-1，产率为19.6%，产纯度为 100.00%。物质谱图见图1，纯度分析图见图2。
[0029]实施例3、组合抗菌肽J-RR-1的合成 以H20和DMF(10:1，V/V)为反应介质，CuS〇4 · 5H20为催化剂（用量是肽AC-Nle(N3)_ Μι 摩尔量的 15 倍 ），抗坏血酸钠为抗氧化剂 （用量是肽 Ac-Nle(N3)- RW-1 摩尔量的 30 倍） ，分 别将纯化的肽Ac-Pra-RW-Ι与肽Ac-Nle(N3)- RW-1以5:1的摩尔比，采用点击化学的1，3_偶 极环加成反应26h后，将反应液经RP-HPLC纯化得到目标肽J-RR-1，产率为18.2%，纯度为 100.00%。产物质谱图见图1，纯度分析图见图2。
【主权项】
1. 一种具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽，其结构式如下所示：2. 如权利要求1所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽在制备抗菌药物中的应 用，其特征在于：以该组合抗菌肽为活性成分，按药物学的常规工艺和辅料制备成内服制剂 或外敷制剂。3. 如权利要求1所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽的制备方法，是以N末端 连接炔丙基甘氨酸的D型氨基酸前体肽和N末端连接叠氮基赖氨酸的D型氨基酸前体肽为底 物，以CuS0 4 · 5H20为催化剂，抗坏血酸钠为抗氧化剂，以水与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液 为溶剂，采用点击化学的1，3_偶极环加成反应24~28小时，产生一个1，4_二取代-1H-1，2,3_ 三唑结构将上述前体肽链接而得。4. 如权利要求3所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽的制备方法，其特征在 于：所述N末端连接炔丙基甘氨酸的D型氨基酸前体肽的序列为Ac-Pra-D-Arg-Arg-Trp-Trp-D-Arg-Phe-NH2 〇5. 如权利要求3所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽的制备方法，其特征在 于：所述N末端连接叠氮基赖氨酸的D型氨基酸前体肽的序列为Ac-Lys(N3)_D-Arg-Arg-Trp-Trp-D-Arg-Phe-NH2 〇6. 如权利要求3所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽的制备方法，其特征在 于:N末端连接叠氮基赖氨酸的D型氨基酸前体肽与N末端连接炔丙基甘氨酸的D型氨基酸前 体肽的摩尔比为1:0.1~1:10。7. 如权利要求3所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽的制备方法，其特征在 于:催化剂CuS〇4 · 5H20的用量为N末端连接叠氮基赖氨酸的D型氨基酸前体肽摩尔量的1~30 倍。8. 如权利要求3所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽的制备方法，其特征在 于:抗氧化剂抗坏血酸钠的用量为N末端连接叠氮基赖氨酸的D型氨基酸前体肽摩尔量的2~ 50倍。9. 如权利要求3所述具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽的制备方法，其特征在 于:水与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，水与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1000:1~1: 1〇
【专利摘要】本发明公开了一种具有高稳定性及抗耐药活性的组合抗菌肽，属于生化技术领域。本发明以含有炔丙基甘氨酸和叠氮基赖氨酸的前体肽作为底物，以CuSO4·5H2O为催化剂，抗坏血酸钠为抗氧化剂，水-N,N-二甲基甲酰胺混合液为溶剂，采用点击化学的1,3-偶极环加成反应24~28小时，产生一个1,4-二取代-1<i>H</i>-1,2,3-三唑结构将上述两个前体肽链接而得。通过对常见的标准菌以及临床分离耐药菌的抗菌实验，表明本发明合成的J-RR-1肽具有较强的抗菌活性和抗临床分离耐药菌活性，同时对胰酶具有较高的稳定性。因此，肽在制备临床治疗药物方面具有很好的应用前景。
【IPC分类】C07K7/06, A61K38/08, A61P31/04
【公开号】CN105440105
【申请号】CN201510948651
【发明人】倪京满, 王锐, 王一杰, 黄海凤, 韩秀凤
【申请人】倪京满, 王一杰
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月17日