一种新的二萜类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从天葵的干燥根中分离得到的一种具有治疗 慢性粒细胞白血病作用的二萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 天葵(Semiaguilegia adoxoides)为毛茛科植物，属天葵被子植物门，高15~40厘 米，块根灰黑色，略呈纺锤形或椭圆形，生于海拔100~1050米间的疏林下、路旁或山谷地的 较阴处，3~4月开花，4~5月结果。在中国分布于四川、贵州、广西北部、江西、江苏、安徽等 地，在日本也有分布。其根入药称为天葵子，为《中国药典》收载的中药品种，味甘、苦，性寒， 有小毒，有清热解毒、消肿止痛、利尿等作用，治乳腺炎、扁桃体炎、痈肿、瘰疬、小便不利等 症;全草又作土农药。
[0003] 天葵中含有多种化学成分，牛峰等人用HPLC方法对天葵中的化学成分做了指纹图 谱；目前从天葵中分离出的主要成分有生物碱、内酯类、氰苷硝基类、酚类、二萜、木脂素等 成分。目前从天葵中分离得到4个生物碱类成分，分别为异喹啉季铵型和原小檗碱类生物 碱。
[0004] 现代药理实验表明，天葵具有良好的抗肿瘤作用。牛锋采用MTT法对天葵子部分化 学成分的细胞毒活性进行实验，结果表明天葵子素A对于宫颈癌、胃癌和乳腺癌三个肿瘤细 胞株的细胞毒活性都要优于紫杉醇，且对白血病和肝癌肿瘤细胞株也有明显的细胞毒活 性；蓝华英的研究表明天葵中的2-(0-〇8111〇〇卩5^&]1〇871〇叉5〇-4-117(11'〇叉7-匕61^61163661：011；[1：1'；[16具有抗肿瘤活性，其105()为9.43以8/1111^关频对天葵中生物碱成分的抗 肿瘤活性进行了研究，其中的唐松草酚定在高剂量组（l000mg/kg)有较好的抗肿瘤作用，抑 瘤率为37.1 %;另外S.P.Duan研究显示天葵乙醇提取物对人肝癌HepG-2和SMMC-7721细胞 具有抑制作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从天葵的干燥根中分离得到的一种具有治疗慢性粒细 胞白血病作用的二萜类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将天葵的干燥根粉碎，用75 ~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸 乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10个柱体 积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸 膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、45 :1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、10:1和 5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010]进一步地，所述大孔树脂为D101大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80%。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]制备方法：（a)将天葵的干燥根（10kg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取(25LX3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的 正丁醇（3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(431g)和正丁醇萃取物； (b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏（172g); (c) 步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8个柱体积）、45:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积)和1:1 (5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(65g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 15:1(8个柱体积）、10:1(10个柱体积)和5:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3 个组分；（e)步骤(d)中组分2(37g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I)(45mg)。
[0024] 结构确证:无色无定形固体;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z367.1522，结合核磁特 征可得分子式为C2QH24O5，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρηι，DMS0_d6，600MHz):H-2 (2.35，m)，H-2(2.37，m)，H-3(1.58，br，d，J= 13.4)，H-3(1.83，ddd，J=13.4，13.4,2.4)，H-5(2.09，d，J=11.7)，H-6(3.82，d，J=11.7)，H-6(4.98，m)，H-ll(2.07，m)，H-ll(2.62，dd，J =16.0,8.8)，H-12(1.83，m)，H-12(1.91，m)，H-13(2.80，m)，H-14(1.88，m)，H-14(3.02，d，J =14.8)，H-17(5.10，br，s)，H-17(5.38，br，s)，H-18(0.87，s)，H-19(0.87，s)，H-20(4.76， (1，了=12.2)，!1-20(4.99，(1，了=12.2);核磁共振碳谱数据5。（ ？?111，0130-(16，1501〇^):210.8 (C，l-C)，36.3(CH2,2-C)，40.2(CH2,3-C)，28.6(C，4-C)，48·1(CH，5-C)，61.9(CH2,6-C)， 164.7(C，7-C)，132.5(C，8-C)，160.3(C，9-C)，51.6(C，10-C)，21.7(CH2，n-C)，26.8(CH2， 12-C)，51.1(CH，13-C)，28.6(CH2，14-C)，169.8(C，15-C)，147.6(C，16-C)，120.1(CH2，17-〇,31.1(〇13，18-〇,27.8(〇13，19-〇,66.5(〇1 2,20-〇;碳原子标记参见图1。红外光谱表明 该化合物含有羰基（1708和1683cm-匪R谱显示两个甲基信号[δΗ0.87(Μθ-18)，0.87 (]\^-19)]，一个环外亚甲基[5!15.10和5.38(!1 2-17)]，以及两个含氧亚甲基[5!13.82和4.96 (Η2-6); 4.76和4.99(Η2-20) ]。13C-NMR谱显示了 20个共振碳信号，包括两个甲基，八个亚甲 基(一个烯属亚甲基，两个含氧亚甲基），两个次甲基，以及八个季碳(三个羰基，三个烯烃季 碳）。核磁数据表明该化合物为含有一个十元内酯环的二萜化合物。HMBC谱中，H2-ll与C-8 和C-9，H2-14与C-7和C-8,以及H2-20与C-7，C-9和C-10的相关性表明该化合物含有一个α，β-不饱和六元内酯环。Me-18与C-3，C-4，C-5和C-19的相关性表明C-4连有两个甲基基团。Η2-20与C-1的相关性以及C-1的化学位移表明C-1为酮羰基。此外，N0ESY谱中H-llb与Η-5的相 关性表明CH2-11位于该环己酮(C-1-C-5和C-10)的上侧。通过HMBC谱中H2-6和H2-17与C-15 的相关性可知C-15为十元环的内酯羰基。十元内酯环的存在限制了H-13的取向，为α构型。 综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物 如图1所示，立体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0025]实施例2:化合物(I)药理作用试验 [0026] -、材料和仪器
[0027] K562细胞由中科院上海生物细胞所提供。化合物（I)为自制，HPLC归