一种盐酸万古霉素的分离纯化工艺的制作方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及药物生产领域，特别涉及一种盐酸万古霉素的分离纯化工艺。
【背景技术】
[0002] 近年来，由于青霉素的广泛的运用造成了大量的青霉素抗性革兰氏阳性感染，万 古霉素就成为了对细菌作战的最后的防线。为了增强万古霉素的抗菌效果，减少抗生素用 量，需要提升万古霉素的纯度。如何改进现有的万古霉素生产工艺提升万古霉素的纯度也 就成为研究的热点。
[0003] 在现有的万古霉素的生产工艺中，普遍采用控制放线菌属东方拟无枝酸菌在发酵 条件下产生万古霉素，再经过分离纯化后得到万古霉素纯品的方法。由此可见，万古霉素的 纯度控制主要在分离纯化步骤。因此如何改进现有的分离纯化工艺便成为如何提升万古霉 素产量的重点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种盐酸万古霉素的分离纯化工艺。该工艺在保证高收率的 基础上提高产品的纯度，简化生产。
[0005] 本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的： 一种盐酸万古霉素的分离纯化工艺，包括如下步骤:发酵液的预处理、陶瓷膜过滤、一 次纳滤、草酸沉淀、一次板框过滤、一次过柱纯化、二次纳滤、一次结晶、二次板框过滤、活性 炭脱色、脱色板框过滤、二次过柱纯化、超滤、三次纳滤、二次结晶、真空抽滤、晶体溶解、冷 冻干燥、打粉包装，其中 ① 发酵液的预处理:按照发酵液体积的0.1-0.5 %往万古霉素发酵液加入药学可接受 的酸进行成盐，搅拌30min得到预处理液； ② 草酸沉淀:将一次纳滤得到的浓缩液加入草酸沉淀罐，再加入一次纳滤得到的浓缩 液重量的0.001-0.004 %的固体草酸钠，搅拌30-50min后静置； ③ 活性炭脱色:将二次板框过滤得到的一次结晶体加入活性炭脱色罐，加入去离子水 溶解，搅拌并加热，待一次结晶体的溶液沸腾时加入一次结晶体重量的3-6%的活性炭进行 脱色30min。
[0006] 所述板框过滤中，过滤介质为滤板，所述滤板上预涂有2mm的助滤剂，所述助滤剂 为活性炭。
[0007] 所述一次结晶和二次结晶过程中均加入晶体重量10倍的有机溶剂进行结晶，所述 有机溶剂选用乙醇、丙酮和乙醚中的其中一种。
[0008] 所述一次结晶和二次结晶的起始温度为35-45°C，终点温度为0_15°C，降温速度为 l-3°C/min〇
[0009] 所述晶体溶解步骤为:将真空抽滤得到的二次结晶体加入溶解罐中，加入二次结 晶体重量8-12倍的去离子水，搅拌30min至二次结晶体完全溶解形成溶解液。
[0010]所述药学可接受的酸为盐酸，所述盐酸的质量分数为10-20%。
[0011] 所述一次过柱纯化采用SP825树脂，所述二次过柱纯化采用HP20SS树脂。
[0012] 所述陶瓷膜为多通道陶瓷膜，通道数控制在8~16,其膜材质为二氧化硅，孔径为 0.2um〇
[0013] 所述纳滤采用孔径为0.5nm的芳香聚酰胺复合纳滤膜;纳滤过程中，压力控制在2 ~2.2MPa，滤液温度控制在20~25°C，纳滤的流速控制在300~400L/h;纳滤的浓缩体积倍 数为4~5倍，纳滤结束，采用纯化水顶洗8~lOmin。
[0014] 所述超滤采用中空纤维超滤膜组件，超滤时，控制压力0.1~0.2MPa。
[0015] 综上所述，本发明具有以下有益效果： (1)由于草酸钠中的C2042^能够与钙、镁、络、猛等多种金属离子进行结合，而在发酵液 中存在着多种金属离子，因此通过草酸钠能够除去发酵液中存在的金属离子，提高产物纯 度，增强安全性和有效性。
[0016] (2)在板框的过滤介质上预涂活性炭，从而起到助滤的作用，避免因待过滤的悬浮 液中颗粒太小将滤板的空隙堵住，从而影响正常过滤。在过滤过程中，在一次板框上预涂的 活性炭和二次板框上预涂的活性炭会有部分进入后续步骤中，但是由于需要采用活性炭进 行脱色，因此不会对产物的纯度造成影响，反而能够助滤提高产物的收率和纯度。
[0017] (3)相比于将二次结晶体的湿粉直接进行冻干，将经过真空抽滤器真空抽滤后得 到的二次结晶体用去离子水溶解为溶解液进行冻干，能够提高产物的纯度。
【附图说明】
[0018] 图1为工艺流程图。
【具体实施方式】
[0019] 以下结合附图1对本发明作进一步详细说明。
[0020] 本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人 员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本 发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
[0021] 实施例1 步骤1:万古霉素发酵液10m3,效价8.4g/L。将10m3万古霉素发酵液置于预处理罐中，控 制转速为80rad/min，温度为25°C，加入发酵液体积的0.1 %的质量分数为10 %的盐酸进行 成盐，搅拌30min得到预处理液。
[0022] 步骤2:陶瓷膜过滤，选用多通道陶瓷膜，通道数为10,其膜材质为二氧化硅，孔径 为0.2μπι。采用错流模式进行循环过滤，压力控制为0.IMPa。
[0023] 步骤3:经过陶瓷膜过滤后进入一次纳滤机组，纳滤采用孔径为0.5nm的芳香聚酰 胺复合纳滤膜;纳滤过程中，压力控制在2.2MPa，滤液温度控制在25°C，纳滤的流速控制在 400L/h;纳滤的浓缩体积倍数为4倍，纳滤结束，采用纯化水顶洗lOmin。
[0024] 步骤4:经过一次纳滤后进入草酸沉淀罐，再加入一次纳滤得到的浓缩液重量的 0.001 %的固体草酸钠，搅拌时间50min后静置。
[0025] 步骤5:进入一次板框过滤除去草酸沉淀罐中的沉淀，板框中过滤介质为滤板，滤 板上预涂有2mm的助滤剂活性炭。
[0026]步骤6:进入一次过柱纯化，一次过柱纯化采用SP825树脂。
[0027] 步骤7:将一次过柱纯化得到的洗脱液进入二次纳滤机组，纳滤采用孔径为0.5nm 的芳香聚酰胺复合纳滤膜;纳滤过程中，压力控制在2MPa，滤液温度控制在25°C，纳滤的流 速控制在400L/h;纳滤的浓缩体积倍数为4倍，纳滤结束，采用纯化水顶洗lOmin。
[0028]步骤8:进入一次结晶罐中进行一次结晶，加入二次纳滤得到的浓缩液的重量10倍 的乙醇，起始温度控制为45°C，终点温度为15°C，降温速度为3°C/min。
[0029]步骤9:进入二次板框过滤得到一次结晶体，板框中过滤介质为滤板，滤板上预涂 有2mm的助滤剂活性炭。
[0030]步骤10:将二次板框过滤得到的一次结晶体加入活性炭脱色罐，加入去离子水溶 解，搅拌并加热，待一次结晶体的溶液沸腾时加入一次结晶体重量的6%的活性炭进行脱色 30min〇
[0031]步骤11:进入脱色板框进行脱色，脱色板框中过滤介质为滤板，滤板上预涂有2mm 的助滤剂活性炭。
[0032] 步骤12:将脱色板框中得到的过滤液进入二次过柱纯化，二次过柱纯化采用 HS20SS树脂。
[0033]步骤13:进入超滤机组，超滤采用中空纤维超滤膜组件，超滤时，控制压力O.IMPa。
[0034] 步骤14:进入三次纳滤机组，纳滤采用孔径为0.5nm的芳香聚酰胺复合纳滤膜;纳 滤过程中，压力控制在2MPa，滤液温度控制在25°C，纳滤的流速控制在400L/h;纳滤的浓缩 体积倍数为4倍，纳滤结束，采用纯化水顶洗lOmin。
[0035]步骤15:进入二次结晶罐中进行二次结晶，加入三次纳滤得到的浓缩液的重量10 倍的乙醇，起始温度控制为45°C，终点温度为15°C，降温速度为3°C/min。
[0036]步骤16:真空抽滤至干燥。
[0037]步骤17:将真空抽滤得到的二次结晶体加入溶解罐中，加入二次结晶体重量12倍 的去离子水，搅拌30min至二次结晶体完全溶解形成溶解液。
[0038] 步骤18:置于冷冻干燥机内，_45°C冷冻4h，开启真空至15Pa以下进行升华，并升温 至-10°c，在此温度保持真空10h，随后继续升温到0°C并保持真空5h。最后升温至30°C保持 真空3h，打粉包装。
[0039] 总收率为92.3%，纯度为96.93%。
[0040] 实施例2 步骤1:万古霉素发酵液l〇m3,效价8.4g/L。将10m3万古霉素发酵液置于预处理罐中，控 制转速为80rad/min，温度为25°C，加入发酵液体积的0.5%的质量分数为12%的盐酸进行 成盐，搅拌30min得到预处理液。
[0041] 步骤2:陶瓷膜过滤，选用多通道陶瓷膜，通道数为8,其膜材质为二氧化硅，孔径为 0.2μπι。采用错流模式进行循环过滤，压力控制为0.IMPa。
[0042] 步骤3:经过陶瓷膜过