含α,β-不饱和酮氟硼吡咯化合物及其在亚硫酸盐检测中的应用
【专利摘要】本发明涉及一种含α,β-不饱和酮氟硼吡咯化合物及其在亚硫酸盐检测中的应用。新型的荧光探针利用α,β-不饱和酮上碳碳双键与亚硫酸盐发生亲核加成的特性，其与亚硫酸盐反应前后化合物的吸收和发射光谱均发生显著蓝移。探针对亚硫酸盐具有较高的检测灵敏度和选择性，发射波长达620nm、位于红光区，适用于实际试样中亚硫酸盐的检测。
【专利说明】
含a, (3-不饱和酮氟硼吡咯化合物及其在亚硫酸盐检测 中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及亚硫酸盐检测技术领域，具体地说，是一种含a，e -不饱和酮氟硼吡 咯类及其在亚硫酸盐检测中的应用。
【背景技术】
[0002] 各种形式的亚硫酸盐（二氧化硫、亚硫酸、亚硫酸盐等）是一类很早即在世界范围 内广泛使用的食品、饮料的防腐剂以保护食物不被氧化，同时也有助于防止食物的微生物 继续生长，延长食物的保存时间，另外，亚硫酸盐在日常生活中可作为漂白剂、防腐剂和抗 氧化剂，在染料、造纸、制革和有机合成等方面作为还原剂等。然而，亚硫酸根离子对皮肤、 目艮、呼吸道有刺激性。研究发现，一定浓度的亚硫酸盐可能引起一些人群的哮喘或过敏反 应。同时，工业生产排放的大量以二氧化硫形式存在的亚硫酸盐是环境的主要污染、也是全 球变暖的主要原因。鉴于亚硫酸盐的毒性，各国纷纷出台各种法规标准来限制亚硫酸盐的 使用。
[0003] 荧光探针分析技术具有灵敏度高，操作性好的特点，荧光光谱法因其便捷、无损、 实时、快速、灵敏等优点在很多领域具有广泛的应用。已设计、合成的亚硫酸盐比色或荧光 探针主要基于亚硫酸盐与金属离子的螯合作用、与胺形成复合物、或者利用亚硫酸盐与醛 的选择性加成以及对乙酰丙酸盐的选择性脱保护等机理。但上述大多探针在对亚硫酸盐响 应时只是发生颜色或荧光强度的变化，其检测灵敏度相对较低，且可能因样品环境或探针 浓度变化引起测量信号的波动，从而导致测量准确性的降低。
[0004] 相反，比例荧光探针能提供稳定的自校正信号，环境或样品浓度的变化对检测结 果的影响较小，其检测灵敏度也比纯强度变化探针高，具有较高的应用前景。
[0005] 因此，发展高灵敏、高选择性检测食品或环境中亚硫酸盐含量的分析方法具有非 常重要的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种长发射波长、比率型含 a，0 _不饱和酮氟硼吡咯化合物及其在亚硫酸盐检测中的应用。
[0007] 本发明的第一方面，提供了一种氟硼吡咯类化合物，其特征在于，其结构通式：
[0008]
[0009] 式中：Ri、R2如上述结构通式所示；R3为烷基、羟基、氨基、或卤素。
[0010] 本发明的第二方面，提供了一种本发明第一方面所述的含a，不饱和酮氟硼 吡咯类化合物的合成方法，其特征在于，其具体步骤为：
[0011] (1)将溶剂，苯甲醛，吡咯加入到反应器中，再滴加几滴盐酸，其中苯甲醛和吡咯的 摩尔比为1:1~1:6,优选为1:3 ;苯甲醛与溶剂的摩尔比为7~9:100~150,优选7:110 ; 将混合物冰浴反应2~8小时后，过滤，用超纯水和石油醚洗涤，得到灰绿色固体，干燥；粗 产物经硅胶柱分离，旋蒸去溶剂，得到淡黄色固体1 ;
[0012] 所述溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、二甲基甲酰胺或它们的混合溶剂；
[0013] (2)在氮气保护、冰浴下逐滴滴加三氯氧磷于有机溶剂中，其中，三氯氧磷和溶剂 的体积比为1:1~1:30,优选为1:7 ;在-25~25°C下反应30min，再将溶有由步骤（1)得 到的淡黄色固体1的二氯甲烷溶液快速加入上述溶液中，其中，淡黄色固体1和二氯甲烷的 摩尔体积比为1:3~1:30,优选为1:8 ;然后将反应液倒入两倍体积的二氯甲烷中，用NaOH 溶液调节pH至9左右，有机相用饱和食盐水萃取3次，再用无水Na2S0 4干燥；减压旋蒸除去 CH2C12，旋干过硅胶柱，得到淡粉色固体2 ;
[0014] 所述溶剂为乙醇，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，和/或四氢呋喃；
[0015] (3)将步骤⑵得到的淡粉色固体2加入至有机溶剂中，冰浴下加入2,3_二 氯-5, 6-二氰基苯醌（DDQ)，其中，淡粉色固体2和DDQ的摩尔比为1:0.5~1:3,优选为 1:1. 2 ;淡粉色固体2和溶剂的摩尔体积比为1:10~1:50,优选为1:30 ;反应20min后待反 应液自然升温至室温；向上述体系依次加入三乙胺和三氟化硼乙醚，其中，三乙胺和三氟化 硼乙醚的体积比为1:0. 5~1:3,优选为1:1 ;继续搅拌15min，用上述溶液两倍当量的二氯 甲烷萃取所述溶液，有机相用饱和食盐水有机相洗涤后干燥，旋干过硅胶柱，得到红色固体 3〇
[0016] 所述溶剂为乙醇，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，四氢呋喃，和/或二氯甲烷；
[0017] (4)将步骤（3)得到的红色固体3溶于混合溶剂中，室温下向上述溶液中加入 4-乙酰吡啶和吡咯烷，其中，红色固体3和混合溶剂的摩尔体积比为1:100~1:300,优选 为1:150 ;红色固体3和4-乙酰吡啶的摩尔比为1:1~1:5,优选为1:1.8 ;红色固体3和 吡石各烧的摩尔体积比为1:0. 5~1:5,优选为1:1. 5 ;室温反应1~10天，旋干反应液。过 硅胶柱，得到红褐色固体4;
[0018] 所述混合溶剂为乙醇或甲醇与二氯甲烷的混合溶液，其体积比为1:1~1:5 ;
[0019] (5)将步骤⑷得到的红褐色固体4溶于溶剂中，在氮气保护下，常温逐渐滴加碘 甲烧于混合液中，其中，红褐色固体4和溶剂的摩尔体积比为1:20~1:300,优选为1:100 ; 红褐色固体4和碘甲烷的摩尔比为1:1~1:30,优选为1:10 ;将上述溶液在室温下避光反 应至原料消失，旋干反应液。过硅胶柱，得到紫色固体即为目标产物；
[0020] 所述溶剂为乙醇，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，四氢呋喃，二氯甲烷。
[0021] 在另一优选例中，所述的苯甲醛和吡咯的摩尔比为1:3。
[0022] 在另一优选例中，在所述的步骤（1)中，所述溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、二甲基 甲酰胺或它们的混合溶剂。
[0023] 在另一优选例中，在步骤⑷中，所述的红色固体3和4-乙酰吡啶的摩尔比为 1:1. 8〇
[0024] 本发明的第三方面，提供一种含有a，不饱和酮氟硼吡咯类在亚硫酸盐检测 中的应用，其具体步骤为：
[0025] (1)制备含有a，0 _不饱和酮氟硼吡咯类化合物的DMF或DMS0溶液，为储备液 1 ;
[0026] (2)制备亚硫酸盐（S032 )和CTAB的磷酸缓冲溶液（pH 7. 4,20mM)分别为储备液 2和储备液3 ;
[0027] (3)准确移取33. 3 y L储备液1至10mL的容量瓶中，用pH 7. 4的20mM磷酸缓冲 溶液或储备液3稀释至刻度，再加入166. 7 y L储备液2至上述溶液中，使得S032的最终浓 度为500 iiM，测试溶液在不同时间的紫外和荧光光谱，即为亚硫酸盐对含a，不饱和酮 氟硼吡咯类化合物的时间滴定曲线。
[0028] (4)准确移取33. 3 y L储备液1至10mL的容量瓶中，用20mM的磷酸缓冲溶液 (PH7. 4)或储备液3稀释至刻度，再滴加储备液2至上述溶液中，使得S032的最终浓度 为1~500 yM，测试溶液在不同浓度S032存在时的紫外和荧光光谱，即为亚硫酸盐对 a，0 _不饱和酮氟硼吡咯类化合物的浓度滴定曲线。
[0029] (5)准确移取33. 3 y L储备液1至10mL的容量瓶中，向容量瓶加入0? 5g白糖或 者100 yL白葡萄酒，用20mM的磷酸缓冲溶液（PH 7.4)或储备液3稀释至刻度，再分别加 入0,16. 7 y L和33. 3 y L的储备液2,测定各个试液的紫外和荧光光谱。将所得结果与由 步骤（4)得到的标准曲线对照，求得白糖以及白葡萄酒中亚硫酸盐的含量。
[0030] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0031] 图1为BSP 1和BSP2的分子结构式。
[0032] 图2为化合物BSP1和BSP2的合成路线
[0033] 图3为不同浓度S032对探针BSP1吸收光谱（a)和发射光谱（b)的影响；CTAB-磷 酸缓冲溶液（PH 7.4,20mM)，[BSP1] = 10uM，[CTAB] = ImM，荧光激发波长为 512nm。
[0034] 图4为荧光比值（I554/I61S)随亚硫酸盐浓度的变化曲线；CTAB-磷酸缓冲溶液 (PH7.4,20mM), [BSP1] = lOuM, [CTAB] = ImM，荧光激发波长为 512nm。
[0035] 图5为对照化合物结构图。
[0036] 表1白糖和葡萄酒中亚硫酸盐的含量
【具体实施方式】
[0037] 氟硼吡硌类荧光探针具有灵敏度高、特异性识别、吸收和发射波长长等优点，是荧 光探针分子设计时常用的发色团。通过将a，不饱和酮共辄连接在氟硼吡硌分子上可 以延长化合物的共辄体系，使得最大吸收和发射波长红移。当探针分子与亚硫酸盐发生亲 核加成后，共辄体系变短，导致化合物的吸收和发射波长显著蓝移，从而实现对亚硫酸盐的 检测。
[0038] 与现有技术相比，本发明的积极效果是：
[0039] 新型的荧光探针分子具有较长的发射波长位于近红外区，有利于消除背景的干 扰，而且是比率型的荧光探针，有更好的选择性和更高的灵敏性。采用表面活性剂水溶液体 系代替有机溶剂减少了测试过程队环境的污染。在生理pH条件下（pH = 7. 4)，该类探针对 亚硫酸盐具有很高的光谱响应，对其他含硫的小分子化合物如硫化氢、硫醇以及其他阴离 子基本无响应。
[0040] 以下提供一种含a，0 -不饱和酮氟硼吡咯类化合物及其在亚硫酸盐检测中应用 的【具体实施方式】：
[0041] 实施例1 :
[0042] 1.化合物BSP1和BSP2的合成：
[0043] (1)化合物1的合成：称取1. 0g苯甲醛（9. 43mmol)和1. 9g吡咯（28. 29mmol) 于250mL的单口烧瓶中，加入150mL的超纯水，搅拌下滴加7~8滴盐酸，溶液很快变为 乳白色，将上述反应液在冰浴中搅拌4h，TLC跟踪反应至原料消失，溶液中有大量固体析 出，过滤，用超纯水和石油醚洗涤固体，得到灰绿色固体，产物用无水Na 2S04干燥；粗产 物经硅胶柱分离（石油醚：二氯甲烷=1:1)，旋蒸去溶剂，得到1.79g淡黄色固体。4 NMR(400MHz，CDC1 3) S (ppm):9.51(s，2H)，8.93 ~8.80(m，6H)，8.28(s，2H)，7.75(d，J = 2. 69Hz, 2H), 7. 51 (s, 2H).
[0044] (2)化合物2的合成：
[0045] 在100mL三口烧瓶中加入3. 7mL DMF，队保护下用针管吸取0? 5mL P0C13缓慢滴加 至上述烧瓶中，-25~25°C下反应30min，再将溶有2g(4. 51mmol)苯基二吡咯甲烷（化合 物1)的36mL的CH2C12溶液用针管快速加到上述烧瓶中。溶液颜色由无色变为红褐色，在 0°C下继续反应3h，点板（石油醚：乙酸乙酯=50 :35)至原料点消失，将反应液倒入65mL的 012(：12中，用NaOH溶液调节PH至9左右，保留有机相，有机相用100mL的饱和食盐水萃取3 次，再用无水Na 2S04干燥；减压旋蒸除去CH2C12，过硅胶柱（石油醚：乙酸乙酯=50 :10)，得 淡粉固体 400mg。4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :9. 32 (s, 1H)，7. 34 ~7. 17 (m, 5H)，6. 90 (s ,1H), 6. 72 (s, 1H), 6. 16 (s, 1H), 6. 10 (s, 1H), 5. 97 (s, 1H), 5. 52 (s, 1H).
[0046] (3)化合物3的合成：
[0047] 称取400mg(l. 6mmol)的化合物2加入到装有50mL的CH2C12的圆底烧瓶中，在 冰浴下向反应液中加入400mg 2, 3-二氯-5, 6-二氰基苯醌（DDQ，1. 76mmol)，反应20min 后再向烧瓶中加入1. 6mL的三乙胺和1. 6mL的三氟化硼乙醚，室温搅拌15min，点板（石 油醚：乙酸乙酯=50 :35)，待原料点消失后，将反应液用饱和食盐水萃取3次，再用无水 Na2S04干燥；减压旋蒸除去CH 2C12，过硅胶柱（石油醚：CH2C12= 1 :1)，得到红色的固体。1H NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) : 10. 37 (s，1H)，8. 21 (s，1H)，7. 62 ~7. 55 (m，5H)，7. 13 (d，J = 4. 57, 1H)，7. 08 (d, J = 4. 34, 1H)，6. 84 (d, J = 4. 35, 1H)，6. 72 (d, J = 4. 67, 1H) ;MS 测量值 m/z: 319. 1 (M+Na)+，计算值 C16HnBF2N20 (M+Na)+ : 319. 09.
[0048] (4) BSP 1 的合成：
[0049] 称取100mg(0. 34mmol)的化合物3,73. 64g(0. 61mmol)的4-乙酰吡啶溶于装有 60mL的溶剂（EtOH :CH2C12= 1 :2)的单□烧瓶中，室温搅拌下加入7~8滴吡咯烧，反应 1~10天，点板（CH2Cl2:MeOH = 50 :1)至原料点消失。旋转蒸发除去溶剂，过硅胶柱，得 到 60mg 的红褐色固体。1H NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :9. 64(d, J = 5. 85, 2H), 9. 17(d，J =15.65, 1H)，8.62 (d，J = 5.99, 2H)，8. 32 ~8.26 (m，6H)，8.15 (s，lH)，7.82 (d，J = 4. 07, 1H), 7. 75 (d, J = 5. 19, 1H), 7. 20 (d, J = 4. 04, 1H), 7. 15 (d, J = 5. 19, 1H) ；13C NMR(400MHz, DMS0-d6) S (ppm) :188. 9, 161. 8, 151. 7, 145. 3, 139. 2, 138. 0, 137. 2, 137. 1，13 6. 1, 135. 1, 131. 4, 130. 1, 129. 6, 126. 9, 122. 5, 120. 7, 119. 2, 118. 1, 117. 9.
[0050] (5)探针BSP2的合成：
[0051] 称取100mg(0. 25mmol)的BSP1溶于25mL的乙腈中，在氮气保护下，加入过量的 碘甲烷，室温下避光反应5~20天，点板（CH 2Cl2:MeOH = 50 :1)至原料点消失。旋转蒸发 除去溶剂，过硅胶柱，得到50mg的紫色固体。虫NMR(CD30D，400MHz) S (ppm) :9. 07(d，J = 6. 59, 2H)，8. 56 (d，J = 6. 67, 2H)，8. 45 (d，J = 15. 15, 1H)，7. 60 ~7. 45 (m，7H)，7. 28 (d，J = 4. 12, 1H), 6. 98 (d, J = 5. 33, 1H), 6. 69 (d, J = 5. 35, 1H), 6. 31 (d, J = 4. 09, 1H), 4. 47 (s, 7H) ；13C NMR (400MHz, CD30D) 8 (ppm) : 184. 8, 182. 0, 152. 3, 147. 1, 140. 1, 138. 9, 135. 8, 135. 0, 1 30. 8, 130. 3, 129. 4, 128. 8, 127. 9, 126. 9, 126. 3, 125. 5, 119. 5, 118. 2, 117. 8, 116. 3.
[0052] 实施例2
[0053] 缓冲溶液-CTAB体系测定亚硫酸盐：
[0054] 准确称取一定量的化合物BSP1溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中制得30mM的储备 液低温保存；准确称取一定量的S032溶于10mL磷酸缓冲溶液（PBS，20mM，pH = 7. 4)中，制 得30mM的亚硫酸盐储备液；准确称取一定质量的CTAB溶于10mL缓冲溶液中，制得ImM的 CTAB-PBS储备溶液。准确移取33. 3 y L化合物BSP 1的储备液至10mL容量瓶中，用CTAB-PBS 储备液稀释至刻度，得10 yM BSP1的缓冲溶液。向上述溶液中加入167 y L的亚硫酸盐储 备液，测定不同时间下探针溶液荧光和紫外光谱，经数据处理可得探针BSP1在CTAB缓冲 溶液体系对亚硫酸盐的时间响应曲线。向探针-CTAB磷酸缓冲溶液中滴加不同体积（1~ 500 y M)的亚硫酸盐储备液，测定不同浓度亚硫酸盐对探针溶液荧光和紫外光谱的影响，经 数据处理可得探针BSP1在缓冲溶液体系对亚硫酸盐的浓度响应曲线。
[0055] 缓冲溶液-CTAB体系测定白糖或白葡萄酒中的亚硫酸盐
[0056] 准确移取33. 3yL储备液1至10mL的容量瓶中，再向其中加入0. 5g白糖或者 100 y L白葡萄酒，用20mM的磷酸缓冲溶液（PH 7. 4)或储备液3稀释至刻度，分别加入0， 16. 7 y L和33. 3 y L的储备液2,测定各个试液的紫外和荧光光谱。由上述的浓度响应曲线 求得白糖或白葡萄酒中以及加标后的亚硫酸盐含量。 表1白糖和白葡萄酒中亚硫酸盐含量的测定
[0057] 对照例1
[0058] 目前文献报道的亚硫酸盐荧光探针主要存在以下两点不足：1)在较高比例的有 机溶剂存在下检测，如图5所示的probe 1，在DMS0:水=1 :1的溶剂中实现对亚硫酸盐的 检测（X. Gu，C. Liu, Y. -C. Zhu，? Y. -Z. Zhu，J. Agric. Food Chem. 2011，59, 11935 - 11939) ;2) 发射波长较短，如香豆素类化合物probe 2,在DMS0:PBS = 3:7的溶剂中与亚硫酸盐反应 产物的发射波长为 477nm(Z. Liu, S. Guo, J. Piao, X. Zhou, X. Wu, RSC Adv.，2014, 4, 54554 -54557)。本实施例以表面活性剂水溶液为检测体系代替有机溶剂降低了对环境的污染，另外 探针与亚硫酸盐反应前后的发射波长均较长（分别为618nm和554nm)，在对实际样品和生 物试样中亚硫酸盐的检测有潜在应用。
[0059] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种氟硼吡咯类化合物，其特征在于，其结构通式：式中：Ri、R2如上述结构通式所示；R3为烷基、羟基、氨基、或卤素。2. -种如权利要求1所述的含α，β -不饱和酮氟硼吡咯类化合物的合成方法，其特征 在于，其具体步骤为： ⑴将溶剂，苯甲醛，吡咯加入到反应器中，再滴加几滴盐酸，其中苯甲醛和吡咯的摩尔 比为1:1~1:6,优选为1:3 ;苯甲醛与溶剂的摩尔比为7~9:100~150,优选7:110 ;将混 合物冰浴反应2~8小时后，过滤，用超纯水和石油醚洗涤，得到灰绿色固体，干燥；粗产物 经硅胶柱分离，旋蒸去溶剂，得到淡黄色固体1 ; 所述溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、二甲基甲酰胺或它们的混合溶剂； (2) 在氮气保护、冰浴下逐滴滴加三氯氧磷于有机溶剂中，其中，三氯氧磷和溶剂的体 积比为1:1~1:30,优选为1:7 ;在-25~25°C下反应30min，再将溶有由步骤（1)得到的 淡黄色固体1的二氯甲烷溶液快速加入上述溶液中，其中，淡黄色固体1和二氯甲烷的摩尔 体积比为1:3~1:30,优选为1:8 ;然后将反应液倒入两倍体积的二氯甲烷中，用NaOH溶 液调节pH至9左右，有机相用饱和食盐水萃取3次，再用无水Na2S0 4干燥；减压旋蒸除去 CH2C12，旋干过硅胶柱，得到淡粉色固体2 ; 所述溶剂为乙醇，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，和/或四氢呋喃； (3) 将步骤（2)得到的淡粉色固体2加入至有机溶剂中，冰浴下加入2, 3-二氯-5, 6-二 氰基苯醌（DDQ)，其中，淡粉色固体2和DDQ的摩尔比为1:0. 5~1:3,优选为1:1. 2 ;淡粉 色固体2和溶剂的摩尔体积比为1:10~1:50,优选为1:30 ;反应20min后待反应液自然升 温至室温；向上述体系依次加入三乙胺和三氟化硼乙醚，其中，三乙胺和三氟化硼乙醚的体 积比为1:0. 5~1:3,优选为1:1 ;继续搅拌15min，用上述溶液两倍当量的二氯甲烷萃取所 述溶液，有机相用饱和食盐水有机相洗涤后干燥，旋干过硅胶柱，得到红色固体3。 所述溶剂为乙醇，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，四氢呋喃，和/或二氯甲烷； (4) 将步骤（3)得到的红色固体3溶于混合溶剂中，室温下向上述溶液中加入4-乙 酰吡啶和吡咯烷，其中，红色固体3和混合溶剂的摩尔体积比为1:100~1:300,优选为 1:150 ;红色固体3和4-乙酰吡啶的摩尔比为1:1~1:5,优选为1:1. 8 ;红色固体3和吡硌 烧的摩尔体积比为1:0. 5~1:5,优选为1:1. 5 ;室温反应1~10天，旋干反应液。过硅胶 柱，得到红褐色固体4; 所述混合溶剂为乙醇或甲醇与二氯甲烷的混合溶液，其体积比为1:1~1:5 ; (5) 将步骤（4)得到的红褐色固体4溶于溶剂中，在氮气保护下，常温逐渐滴加碘甲烷 于混合液中，其中，红褐色固体4和溶剂的摩尔体积比为1:20~1:300,优选为1:100 ;红褐 色固体4和碘甲烷的摩尔比为1:1~1:30,优选为1:10 ;将上述溶液在室温下避光反应至 原料消失，旋干反应液。过硅胶柱，得到紫色固体即为目标产物； 所述溶剂为乙醇，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，四氢呋喃，二氯甲烷。3. 如权利要求2所述的合成方法，其特征在于，在步骤（1)中，所述的苯甲醛和吡咯的 摩尔比为1:3。4. 如权利要求2所述的含有α，β -不饱和酮氟硼吡咯类化合物的合成方法，其特征在 于，在所述的步骤（1)中，所述溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、二甲基甲酰胺或它们的混合溶 剂。5. 如权利要求2所述的含有α，β -不饱和酮氟硼吡咯类化合物的合成方法，其特征在 于，在步骤（4)中，所述的红色固体3和4-乙酰吡啶的摩尔比为1:1.8。6. -种含有α，β-不饱和酮氟硼吡咯类在亚硫酸盐检测中的应用，其具体步骤为： (1) 制备含有α，β -不饱和酮氟硼吡咯类化合物的DMF或DMSO溶液，为储备液1 ; (2) 制备亚硫酸盐（S032 )和CTAB的磷酸缓冲溶液（pH 7. 4,20mM)分别为储备液2和 储备液3 ; ⑶准确移取33. 3 μ L储备液1至10mL的容量瓶中，用pH 7. 4的20mM磷酸缓冲溶液 或储备液3稀释至刻度，再加入166. 7 μ L储备液2至上述溶液中，使得S032的最终浓度为 500 μΜ，测试溶液在不同时间的紫外和荧光光谱，即为亚硫酸盐对含α，β-不饱和酮氟硼 吡咯类化合物的时间滴定曲线。 (4) 准确移取33. 3 μ L储备液1至10mL的容量瓶中，用20mM的磷酸缓冲溶液（ΡΗ7. 4) 或储备液3稀释至刻度，再滴加储备液2至上述溶液中，使得S032的最终浓度为1~ 500 μ M，测试溶液在不同浓度S032存在时的紫外和荧光光谱，即为亚硫酸盐对α，β -不饱 和酮氟硼吡咯类化合物的浓度滴定曲线。 (5) 准确移取33. 3yL储备液1至10mL的容量瓶中，再向其中加入0. 5g白糖或者 100 μ L白葡萄酒，用20mM的磷酸缓冲溶液（PH 7. 4)或储备液3稀释至刻度，分别加入0， 16. 7 μ L和33. 3 μ L的储备液2,测定各个试液的紫外和荧光光谱。将所得结果与由步骤 (4)得到的标准曲线对照，求得白糖以及白葡萄酒中亚硫酸盐的含量。
【文档编号】G01N21/64GK105820183SQ201510567769
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2015年9月8日
【发明人】钱俊红, 刘姗姗, 孙倩, 陈兆洋, 张维冰, 刘天奇
【申请人】华东理工大学