一种含替诺福韦双(维生素e)酯的药物制剂和用图
【专利摘要】本发明公开了一种替诺福韦双(维生素E)酯、含替诺福韦双(维生素E)酯的口服药物制剂及用途。所述的替诺福韦双(维生素E)酯具有如下结构：本发明的替诺福韦双(维生素E)酯只需两步反应即可合成，且合成出的替诺福韦双(维生素E)酯可以重结晶纯化，具有制备工艺简单，生产成本低，易于工业化生产的优势。本发明的替诺福韦双(维生素E)酯不仅高效低毒、脂溶性好、生物利用度高，而且在抗病毒药物开发方面具有潜在的应用价值。
【专利说明】
一种含替诺福韦双(维生素E)酯的药物制剂和用途
技术领域
[0001] 本发明属于有机合成和药物领域，具体涉及用于病毒感染类疾病治疗的替诺福韦 双(维生素E)酯、含替诺福韦双(维生素E)酯的口服药物制剂及用途，特别是涉及通过将替 诺福韦制成磷酰氯，再与维生素E反应得到替诺福韦双(维生素E)酯，以及此替诺福韦双(维 生素E)酯在制备抗病毒药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 替诺福韦（5'_单磷酸腺苷类似物)是美国吉利德公司(Gilead Sciences)开发的 一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂，可有效治疗多种病毒感染性疾病。2001年10月经美国 FDA批准上市，用于治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染，2008年8月美国FDA又批准其用于慢 性乙型肝炎(HBV)的治疗 [1]。由于替诺福韦的抗病毒作用强、耐药性低，目前已经成为全球 口服抗病毒药物中的佼佼者，年销售额超过60亿美元，被医药专家和媒体誉为最好的抗乙 肝药物，同时也被世界卫生组织艾滋病治疗指南推荐为一线治疗药物 [2]。
[0003] 替诺福韦（化学结构见下式）的磷酸酯基带负电荷，极性较强，导致其较难透过生 物膜，无法被胃肠道吸收，口服生物利用度较差 [34]。目前，临床上广泛使用的是富马酸替诺 福韦二吡呋酯(化学结构见下式），即替诺福韦双酯性前药，其具有水溶性，口服吸收进入体 内后可代谢降解成替诺福韦，发挥抗病毒作用，然而由于其化学结构的亲水性，导致部分药 物在吸收进入血液前即被水解，释放出的原药亦由于其膜透过性差而被迅速排出体外，无 法在感染部位保持足够的药物浓度，因而人体生物利用度只有25%左右 [5_6]。因此，对替诺 福韦的化学结构进一步修饰和改造，以期获得具有良好药物动力学性质的高效低毒的新型 替诺福韦衍生物具有重要的意义和价值。
[0005] 替诺福韦 富马酸替诺福韦二吡呋酯
[0006] 目前国内外许多研究组正在开展替诺福韦衍生物的研究，比如:江苏正大天晴药 业开发的富马酸替诺福韦双特戊酯和Gilead开发的GS-7340 m，与富马酸替诺福韦二吡呋 酯相比，均表现出更高的生物利用度和更低的生物毒性;李卓荣等[8]以替诺福韦为原料，在 碱性试剂作用下，与取代的烃氧基缩合，得到一系列替诺福韦单酯化合物，体外抗病毒活性 测定显示16烷氧基乙基/丙基酯和18烷氧基乙基/丙基酯的抗HIV和抗HBV活性均强于替诺 福韦，而14烷氧基乙基/丙基酯的抗HIV活性强于替诺福韦，抗HBV活性弱于替诺福韦；秦引 林等 [9]用替诺福韦与高级脂肪酸或甘油酯或胆酸类化合物缩合，得到具有肝靶向抗乙肝病 毒作用的前药，结果显示这些替诺福韦衍生物在肝脏中的浓度明显高于血液和肾脏，具有 明显的靶向性，提示对HBV治疗存在一定的增效减毒作用。
[0007] 但是上述替诺福韦衍生物的合成工艺相对冗长，需要柱层析色谱进行分离纯化， 不仅带来巨大的工作量，耗费大量能源、物力、人力和财力，同时也会带来巨大的环境污染， 且产品质量难以保证 [1(W2]。针对替诺福韦衍生物研究的以上特点，本课题组在替诺福韦分 子的磷酸基的两个羟基上引入脂溶性强的维生素 E，得到替诺福韦双酯化衍生物。由于维生 素本身既是生命延续必需的营养素，又是天然的抗氧化剂，因此用它来修饰替诺福韦不仅 可以改善化合物的药代动力学性质和脂溶性，而且降低了毒性，提高了抗病毒活性 [13<4]; 更为关键的是本发明的替诺福韦双(维生素 E)酯可以采用重结晶技术纯化，工艺简单、质量 可控，易于工业化批量生产，克服了在替诺福韦衍生物制备过程中的瓶颈问题。
[0008] 本发明的替诺福韦双(维生素 E)酯只需两步反应即可合成，且合成出的替诺福韦 双(维生素 E)酯可以重结晶纯化，因此具有制备工艺简单，生产成本低，易于工业化生产的 优势。本发明的替诺福韦双(维生素 E)酯不仅高效低毒、脂溶性好、生物利用度高，而且在抗 病毒药物开发方面具有潜在的应用价值。
[0009] 参考文献
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【发明内容】
[0024] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种生物相容性好的、亲脂性强、毒 性低、抗病毒活性高的替诺福韦双(维生素E)酯。
[0025] 本发明的第二个目的是提供一种口服药物制剂，其中包含作为活性成分的替诺福 韦双(维生素E)酯和药学上可接受的载体。
[0026]本发明的第三个目的是提供一种替诺福韦双(维生素E)酯及其口服药物制剂作为 抗病毒药物的用途。
[0027] 本发明的目的主要通过以下技术方案实现：
[0028] 替诺福韦双(维生素E)酯具有下述结构：
[0031] 本发明的一种含有替诺福韦双(维生素E)酯的口服药物制剂中替诺福韦双(维生 素E)酯可以单独使用或与甘草酸、富马酸组合使用，加入药学上可接受的药物载体，使所述 替诺福韦双(维生素E)酯占该药物制剂总重量的0.1-40%，制备成临床上可接受的任何口 服剂型，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂和缓控释制剂。
[0032] 所述的替诺福韦双(维生素E)酯具有下述结构：
[0035]所述药学上可接受的载体包括常规的稀释剂（如注射用水、微晶纤维素等至少一 种），填充剂（如甘露醇、蔗糖、乳糖、聚乙二醇、吐温80、山梨醇、薄荷脑、液体石蜡、凡士林、 硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、羊毛脂、矿物油、DMS0等至少一种），粘合剂(如卡波姆、阿拉伯胶、 淀粉、纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺等至少一种），崩解剂(如羧甲基淀粉钠、 交联羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、低取代的羟丙基纤维素等至少一种），润滑剂(如滑石 粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、固体聚乙二醇、卵磷脂、二氧化硅、微粉硅胶等至少一种），湿润剂 (如丙二醇、甘油、乙醇等至少一种），稳定剂（如乙二胺四乙酸二钠、硫代硫酸钠、焦亚硫酸 钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、乙醇胺、碳酸氢钠、醋酸钠、烟酰胺、维生素C等至少一种），渗透 压调节剂(如氯化钠、葡萄糖等至少一种），pH调节剂(如三乙醇胺、氢氧化钠、枸橼酸钠等至 少一种），防腐剂（如三氯叔丁醇、尼泊金酯、羟苯乙酯、苯扎溴铵等至少一种）。上述辅料可 以是常用剂量，以常用的配比与替诺福韦双(维生素E)酯混合，当替诺福韦双(维生素E)酯 用量确定后，各药用辅料之间的配比可以根据需要适当调节。
[0036]本发明的药物制剂每单位剂量含替诺福韦双(维生素E)酯l_500mg，施药量可根据 用药途径、患者年龄、体重、疾病类型和严重程度等诸多因素加以调整，并可根据临床病例 的表现适当加以改变。日剂量一般为200-400mg/kg，较好为250-350mg/kg，最佳为300-350mg/kg〇
[0037] 本发明的替诺福韦双(维生素E)酯和含有替诺福韦双(维生素E)酯的口服药物制 剂在制备抗病毒药物中的应用。
[0038] 本发明所涉及的替诺福韦双(维生素E)酯和含有替诺福韦双(维生素E)酯的口服 药物制剂生物相容性好、毒性低，在抗病毒方面有显著的效果，且制备方法简洁易行。
【附图说明】
[0039] 图1为本发明实施例1替诺福韦双(维生素E)酯的合成路线。
[0040] 图2为本发明实施例1替诺福韦双(维生素 E)酯的红外光谱。
[0041] 图3为本发明实施例1替诺福韦双(维生素 E)酯的质谱。
[0042] 图4为本发明实施例1替诺福韦双(维生素E)酯的核磁共振氢谱。
[0043] 图5为本发明实施例1替诺福韦双(维生素 E)酯的核磁共振碳谱。
【具体实施方式】
[0044] 下面通过实施例对本发明作进一步说明，其目的仅在于更好的理解本发明的内容 而非限制本发明的保护范围：
[0045] 实施例1
[0046] 将(4.31g，15mmol)替诺福韦置于反应瓶中，加入50mL氯化亚砜，再加入催化量N, N-二甲基甲酰胺（1-2滴），回流1小时，反应液由白色悬浊液变为黄色溶液后，旋转蒸发仪减 压蒸馏除去氯化亚砜，再用二氯甲烷洗涤2次，得到替诺福韦磷酰氯。
[0047] 取(0.972g，3mmol)替诺福韦磷酰氯溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，再将2.59g维生 素E溶解于二氯甲烷中，然后加入(0.844mL，6mmol)三乙胺，室温搅拌反应24小时，薄层色谱 (TLC)监测反应进程。反应完全后，向反应液中加入30mL水和10mL甲醇，分液漏斗分液，将水 层和甲醇层用二氯甲烷洗3次，收集二氯甲烷层，旋干，得到粗品。将粗品用少量乙醚溶解， 置于-20°C冷却重结晶，得到替诺福韦双(维生素E)酯2.67g，收率79.80%(合成路线见图1， 表征图谱见图2-5)。
[0048] 实施例2
[0049] 将(0.54g，2mmol)阿德福韦置于反应瓶中，加入50mL氯化亚砜，再加入催化量N，N-二甲基甲酰胺（1-2滴），回流1小时，反应液由白色悬浊液变为黄色溶液后，旋转蒸发仪减压 蒸馏除去氯化亚砜，再用二氯甲烷洗涤2次，得到阿德福韦磷酰氯。
[0050] 取(0.648g，2mmol)阿德福韦磷酰氯溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，再将1.73g维生 素E溶解于二氯甲烷中，然后加入(0.563mL，4mmol)三乙胺，室温搅拌反应24小时，薄层色谱 (TLC)监测反应进程。反应完全后，向反应液中加入30mL水和10mL甲醇，分液漏斗分液，将水 层和甲醇层用二氯甲烷洗3次，收集二氯甲烷层，旋干，得到粗品。将粗品用少量乙醚溶解， 置于-20°C冷却重结晶，得到阿德福韦双(维生素E)酯1.77g，收率79.36%。
[0051 ] 实施例3
[0052] 将(2.59g，2mmol)替诺福韦置于反应瓶中，加入50mL氯化亚砜，再加入催化量N，N-二甲基甲酰胺（1-2滴），回流1小时，反应液由白色悬浊液变为黄色溶液后，旋转蒸发仪减压 蒸馏除去氯化亚砜，再用二氯甲烷洗涤2次，得到替诺福韦磷酰氯。
[0053] 取(0.808g，2.5mmo 1)替诺福韦磷酰氯溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，再将2.16g维 生素E溶解于二氯甲烷中，然后加入(0.704mL，5mmol)三乙胺，室温搅拌反应24小时，薄层色 谱(TLC)监测反应进程。反应完全后，向反应液中加入30mL水和10mL甲醇，分液漏斗分液，将 水层和甲醇层用二氯甲烷洗3次，收集二氯甲烷层，旋干，得到粗品。将粗品用少量乙醚溶 解，置于-20 °C冷却重结晶，得到替诺福韦双(维生素E)酯2.21 g，收率79.46 %。
[0054]实施例4片剂(干法）
[0055]取实施例1制备的替诺福韦双(维生素E)酯150g，加入羟丙基纤维素75g、羧甲基淀 粉钠75g、淀粉180g，以等量递增法混合均匀后干法制粒；加入硬脂酸镁20g，混匀；压制成 片。
[0056]实施例5片剂(湿法）
[0057]取实施例2制备的阿德福韦双（维生素E)酯300g，加入500g淀粉、100g硬脂酸镁、 200g羧甲基纤维素、2700g乙醇(体积百分含量为70 % )、2500g微晶纤维素、3200g玉米淀粉， 充分搅拌混合制成湿颗粒，在60-70°C干燥2-4小时压制成片。压片制成片剂用作赋型剂的 辅料有硫酸镁、玉米淀粉、滑石粉。
[0058]实施例6胶囊剂
[0059]取实施例3制备的替诺福韦双(维生素E)酯300g，加入32g富马酸、20g硬脂酸镁、 200g羧甲基纤维素、480g微晶纤维素，充分搅拌混合制成湿颗粒，将制成的湿颗粒直接在 60-70°C干燥2-4小时，然后充填入空胶囊壳中，每粒胶囊含替诺福韦双(维生素E)酯300mg。
[0060] 实施例7颗粒剂
[0061]取实施例1制备的替诺福韦双(维生素E)酯600g，加入445g甘草酸、20g硬脂酸镁、 180g羧甲基纤维素、200g微晶纤维素，充分搅拌混合用12-14目筛制成颗粒。在60-70°C干燥 2-4小时，使每克颗粒剂含对替诺福韦双(维生素E)酯300mg。
[0062]实施例8缓控释片剂
[0063]取实施例2制备的阿德福韦双(维生素E)酯300g，加入222g甘草酸、70g羟丙基甲基 纤维素、250g羧甲基纤维素、370g乙醇(体积百分含量为70%)、10g硬脂酸镁等充分搅拌混 合制成湿颗粒，在60_70°C干燥2-4小时压制成片。
[0064]实施例9缓控释片剂
[0065]取实施例3制备的替诺福韦双(维生素E)酯600g，加入64g富马酸、280g羟丙基甲基 纤维素、30g硬脂酸、80g乳糖、10g硬脂酸镁，充分搅拌混合干法制粒，压片，每片含替诺福韦 双（维生素E)酯300mg。
[0066] 实施例10
[0067] 本发明实施例1-9所得替诺福韦双(维生素E)酯及其口服药物制剂的体外抗病毒 药效学评价，包括如下步骤：
[0068] (1)药物的细胞毒性检测取生长状态良好的HepG2 2.2.15细胞1瓶，用胰酶消化后 制备成单细胞悬液，加入细胞计数板计数，调整细胞浓度至2 X 104个/mL，接种于96孔培养 板，每孔接种l〇〇yL，置于37 °C，5 %C02细胞培养箱培养过夜待贴壁。次日吸取上清分别加入 1 OOyL含不同浓度药物的培养液(200、40、8、1.6、0.32、0.064yM)，每个浓度4个复孔，细胞对 照组4个复孔，置于37°C，5 %C02细胞培养箱培养72h，于各孔中加入10yL的MTT(5g/L)，继续 培养4h，然后仔细吸去上清，每孔再各加入150此的二甲基亚砜(DMS0)，轻轻振荡使甲臢颗 粒溶解，最后用自动酶标仪比色，以空白孔调零，测546nm处的A值。根据结果计算药物对Hep G2 2 ? 2 ? 15细胞的存活率，Reed-Meuench法计算半数有毒浓度TC50〇 [0069] 细胞存活率=A试验组/A对照组X 100%
[0070] (2)药物的抗病毒活性检测Hep G2 2.2.15细胞用胰酶消化后制备成单细胞悬液， 加入细胞计数板计数，调整细胞浓度至2 X104个/mL，加入24孔板细胞培养中，每孔接种 lmL，置于细胞培养箱37°C，5%⑶:^培养过夜。次日取出24孔细胞培养板，吸出上清后依次加 入用培养液梯度稀释的替诺福韦双(维生素6)酯（200.00、66.67、22.22、7.41、2.47虚)继 续培养，每个浓度4个复孔，细胞对照组4个复孔。于第2天、第4天、第6天、第8天、第10天、第 12天分别更换新鲜的含不同浓度替诺福韦双(维生素E)酯的培养液，第14天收集各孔上清 液至1.5mL的离心管中，-20 °C冻存，荧光定量PCR法检测HBV-DNA的含量，结果见表1。
[0071 ]表1替诺福韦双(维生素E)酯的抗HBV活性
a. TCsois 50 % cytotoxicity concentration in HepG2 2.2.15cells； b. ICsois 50%inhibitory concentration； c. SI is selectivity index(SI = TC5〇/IC5〇).
[0073]结果表明，本发明实施例1-9制备的替诺福韦双(维生素 E)酯和阿德福韦双(维生 素E)酯的细胞毒性明显低于阳性对照药替诺福韦和阿德福韦，而抗病毒活性明显优于替诺 福韦和阿德福韦，治疗指数也比阳性对照药替诺福韦高30倍，显示出高效低毒的抗病毒活 性。
【主权项】
1. 一种替诺福韦双(维生素 E)酯，其特征是具有下述结构： 其中，Ri = H 或 CH3，R2 =2. -种含有替诺福韦双(维生素 E)酯的口服药物制剂，其特征是将替诺福韦双(维生素 E)酯单独使用或与甘草酸、富马酸组合使用，加入药学上可接受的药物载体，使所述替诺福 韦双(维生素 E)酯占该药物制剂总重量的0.1-40%，制备成临床上可接受的任何口服剂型， 包括片剂、胶囊剂、颗粒剂和缓控释制剂，所述的替诺福韦双(维生素 E)酯结构如下： 其中，Ri = H 或 CH3，R2 =3. 权利要求1所述的替诺福韦双(维生素 E)酯在制备抗病毒药物中的应用。4. 权利要求2所述的含有替诺福韦双(维生素 E)酯的药物制剂抗病毒药物中的应用。
【文档编号】C07F9/6561GK105820188SQ201610095939
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年2月22日
【发明人】刘天军, 洪阁, 孟帅
【申请人】刘天军