一种基于白蛋白假酯酶水解反应的特异性荧光探针及应用的制作方法
【专利摘要】一种基于白蛋白假酯酶水解反应的特异性荧光探针分子及应用，是基于人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）特有的假酯酶活性，即在生理pH值条件下HSA能催化具有酯键结构的荧光探针分子（λex=342nm，λem=416nm）发生类水解反应，其自身的氨基酸与探针分子结构中的羧酸基团形成共价结合，同时释放出含有游离酚羟基的水解产物，该产物是荧光发射谱显著不同于底物分子的荧光母体分子（λex=452nm，λem=564nm），根据检测到荧光母体分子的浓度可以检测体系中对应的HSA的含量。该探针分子可用于测定生物样品中白蛋白的绝对含量。该探针分子的优点在于准确度高，检测灵敏，受环境干扰小，可与各种内源性物质、外源性药物及表面活性剂等兼容。
【专利说明】-种基于白蛋白假醒酶水解反应的特异性巧光探针及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种基于白蛋白假醋酶水解反应的特异性英 光探针及应用。
【背景技术】
[000引 人血清白蛋白化uman serum a化umin, HSA)是血浆中含量最丰富的蛋白质，约占 到血浆中蛋白总量的 50-60%【Biochem Wiarmacol. 2005Nov25;70(ll) :1673-84.】。在体 液中人血清白蛋白可W运输脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和许多治疗分 子等，同时能维持血液正常的渗透压。人血清中白蛋白的正常值范围为34-54g/L【Nlm. nih. gov. Retrieved2010-05-12.】。但多种疾病，比如肝病(尤其是肝硬化)、肾病综合症、肿 瘤、蛋白丢失性肠病、烧伤W及营养不良等会导致血清白蛋白的水平下降，而高蛋白饮食W 及慢性脱水则会造成白蛋白水平升高。因此人血中白蛋白含量的定量测定已被临床用于疾 病相关诊断，如果人体白蛋白的含量较正常范围值低很多时就需要给患者注射人血清白蛋 白。大量临床实践已证实，监测血清白蛋白水平对于肝病或肾病患者的早期诊断W及疾病 的愈后都有十分重要的诊断参考价值。更为重要的是，尿液中出现微量白蛋白一般可作为 肾脏疾病(像是糖尿病、高血压、链球菌感染后的肾小球肾炎)、血管内皮功能障碍、也脏疾 病W及静脉血栓栓塞的标志物及诊断指标。下表1给出了人体微量蛋白尿诊断值的正常范 围。
[0003] 表1微量蛋白尿诊断值
【权利要求】
1. 一种基于白蛋白假酯酶水解反应的特异性荧光探针，其特征在于：该特异性荧光探 针的酯键可被人血清白蛋白特异性水解为与分子荧光发射波谱显著不同的荧光产物，借助 体系中产物的含量来确定白蛋白的含量及功能； 该特异性荧光探针为N-正丁基-4-羟基-1，8-萘酰亚胺母体C-4位羟基被取代的联 苯甲酰酯类衍生物，其结构通式如式（1)所示，其中R1为-H、-CH3、-〇CH3、-〇C 2H5中的任意一 种，R2为C2-C8烷基，卤代烷基或其衍生物中的任意一种，
式（1)。
2. -种权利要求1所述特异性荧光探针在定量测定不同样本中人血清白蛋白含量的 应用，其特征在于：采用上述式（1)化合物作为白蛋白特异性的水解代谢底物，进行水解反 应，通过定量检测单位时间内底物的消除量以及水解产物的生成量来测定不同样本中白蛋 白的含量。
3. 按照权利要求2所述特异性荧光探针在定量测定不同样本中人血清白蛋白含量的 应用，其特征在于：所述样本为重组表达的白蛋白单酶、人组织制备液或各类组织细胞。
4. 按照权利要求2所述特异性荧光探针在定量测定不同样本中人血清白蛋白含量 的应用，其特征在于：所述水解反应条件为：体系为磷酸缓冲液；探针底物的浓度介于 l/l〇_l〇Km之间；孵育体系pH值介于5. 5-10. 5之间；反应温度介于20-60°C之间。
5. 按照权利要求2所述特异性荧光探针在定量测定不同样本中人血清白蛋白含量的 应用，其特征在于：探针底物及其水解产物均具有荧光属性，采用荧光检测器实现底物及产 物的快速灵敏检测；荧光检测条件为：激发波长300-500nm，发射波长410-600nm。
【文档编号】C09K11/06GK104341346SQ201310338267
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年8月6日 优先权日:2013年8月6日
【发明者】杨凌, 崔京南, 葛广波, 刘兆明, 冯磊 申请人:中国科学院大连化学物理研究所