一种黑曲霉真菌对多环芳烃菲的生物降解方法与流程

文档序号:12391777阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种黑曲霉真菌对多环芳烃菲的生物降解方法,其特征在于,该方法包括如下过程:

(1)制备固体生长培养基:将200g 去皮马铃薯切碎,加入1000mL 水,煮沸30min,双层纱布过滤并收集滤液,滤液中加入20g 葡萄糖和20g 琼脂,用水定容至1000mL,分装到试管中,112-125℃灭菌20min,制成固体生长培养基(斜面);

(2)制备液体生长培养基:将200g 去皮马铃薯切碎,加入1000mL 水,煮沸30min,双层纱布过滤并收集滤液,滤液中加入20g 葡萄糖,用水定容至1000mL,分装到250mL锥形瓶中,每瓶40mL,112-125℃灭菌20min,制成液体生长培养基;

(3)制备液体营养限制培养基:将100g 去皮马铃薯切碎,加入1000mL 水,煮沸30min,双层纱布过滤并收集滤液,滤液中加入10g 葡萄糖,用水定容至1000mL,分装到250mL锥形瓶中,每瓶40mL,制成液体营养限制培养基;

(4)降解实验:中科院友情提供的黑曲霉真菌接种到固体生长培养基斜面上,在培养箱中28-30℃培养5-7d,制备斜面菌种;在无菌条件下将斜面菌种接种到液体生长培养基中,放入摇床30℃、150r/min条件下培养24小时,制备黑曲霉降解剂;在液体营养限制培养基中,调节至不同pH值,加入不同浓度的菲(微量丙酮助溶)后112-125℃灭菌20min,在无菌条件下将黑曲霉降解剂接种到液体营养限制培养基中,30℃、150r/min条件下摇床培养,不同时间后取样测定;

(5)分析测定:用20mL二氯甲烷或乙酸乙酯超声萃取残留目标污染物3次,合并提取液,并定容到25 mL容量瓶中,用微量移液管取0.1mL于K.D.浓缩器,氮气吹干后,再以甲醇定容到1mL,当菲含量很低时,将合并的提取液用旋转蒸发仪浓缩近干,再以甲醇定容到1mL,移入色谱进样瓶,用高效液相色谱测定。

2.根据权利要求1所述的一种黑曲霉真菌对多环芳烃菲的生物降解方法,其特征在于:所述的不同的pH值分别为3、5、7、9。

3.根据权利要求1所述的一种黑曲霉真菌对多环芳烃菲的生物降解方法,其特征在于:所述的不同浓度的菲分别为60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL、140μg/mL、160μg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种黑曲霉真菌对多环芳烃菲的生物降解方法,其特征在于:所述的不同时间分别为0d、2d、4d、6d、8d。

5.根据权利要求1所述的一种黑曲霉真菌对多环芳烃菲的生物降解方法,其特征在于:所述的高效液相色谱检测条件:检测波长:254nm;柱温:38℃;流动相:乙腈∶水(90∶10);流速:0.5 mL/min;进样量:20μL。

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