专利名称：生物小分子或其类似物键合手性固定相的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物小分子或其类似物键合手性固定相及其制备方法。生物小分子或其类似物键合手性色谱柱固定相是一类手性分离材料，制备方法采用有机合成技术，特别是固相合成技术。
背景技术：
手性分离分析方法和技术越来越重要，尤其是在化学、生物、环境科学、精细化工、制药以及各种产品质量检验领域。色谱技术是手性分离最主要的方法，目前主要包括毛细管气相色谱、高效液相色谱、超临界流体色谱、毛细管电泳和电色谱等方法。直接的手性分离方法就是用手性色谱柱进行手性分离，这种分离可以应用于分析和不同规模的制备。手性色谱柱是实现手性分离的主要工具，色谱柱中的手性固定相就是决定色谱手性分离能力的关键。
目前高效液相色谱手性固定相主要有多糖型、刷型、环糊精型、蛋白质型、大环糖肽抗生素型、配体交换型、冠醚型、酰胺型以及奎宁型等。使用的载体材料主要有硅胶，锆胶、钛胶、聚合物和石墨碳等，使用最广泛的是硅胶。此外还有另一类手性固定相，就是以寡肽为手性选择剂的固定相。Naobumi i等报道了采用L-缬氨酸为手性选择剂，制备了s-三嗪L-缬氨酸酯、s-三嗪L-缬氨酸二肽酯和s-三嗪L-缬氨酸三肽酯手性柱，发现s-三嗪L-缬氨酸三肽酯手性柱有着较强的手性分离能力(Naobumi i，J.Chromatogr.A，1996，722，229)。Tingyu Li发现脯氨酸寡肽手性固定相有着很强的手性分离能力(美国专利公开号，US2004/0226889 A1，US2005/0092686 A1)。手性分子与手性固定相通过包和作用、氢键作用、偶极-偶极作用、π-π作用等形成暂时的非对映异构配合物，由于两个对映体与手性选择剂间的键合能不同，使得形成的非对映异构配合物稳定性不同，而得以实现手性分离。寡肽类固定相的手性分离主要是基于氢键的作用，以及立体作用。Pirkle系统地研究了手性固定相连接臂对手性分离的影响，研究结果指出连接臂对于发挥手性选择剂的功能有着重要作用(William H.Pirkle，J.Chromatogr.A，1992，589，45)。Pirkle还制备了双齿硅烷键合手性固定相，双齿连接臂可以减少手性分子与固定相间的非特异性作用，增强手性选择剂与被分离手性分子间的氢键强度，有环状结构的连接臂刚性强，从而大幅增加柱效和手性分离能力(William H.Pirkle，J.Chromatogr.A，1994，659，69)。Kirkland制备了双齿硅烷键合C18非手性固定相，可以在pH＝11的流动相下分离碱性物质(J.J.Kirkland，Anal Chem.1998，70，4344)，说明液相色谱柱的双齿连接臂可以减少硅胶表面残留硅羟基作用，增加柱的稳定性。s-三嗪L-缬氨酸三肽酯手性柱用s-三嗪做连接臂，由于s-三嗪是一个富电子的结构，在手性分离过程中，起着供电子的π碱的作用，能与被分离的手性分子中的π酸形成π-π作用，这里连接臂实际上已成为手性选择剂的一部分。连接臂、手性选择剂和载体是一个有机的整体，连接臂可以直接影响手性选择剂在载体上功能的发挥。因此有着广泛和较强的手性分离能力的键合手性固定相，是由手性选择剂和与其相适应的连接臂通过共价键或离子键连接到载体表面形成的。Tingyu Li制备的脯氨酸寡肽手性固定相采用直链的甲基己氨酸作为连接臂。所用的Fmoc保护的甲基己氨酸是一种粘稠液体，合成纯化困难，长期保存条件要求高。这种固定相的连接臂都是单齿结构，因此不具备双齿结构的稳定性。该固定相是共价键键合的。我们知道通过离子键键合的手性固定相也是有着手性分离能力的(Naobumi i等，J.Chromatogr.A，1989，462，382)。而这种脯氨酸寡肽手性固定相并没有离子键键合的结构。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一类生物小分子或其类似物键合手性色谱柱固定相及其制备方法。所采用的连接臂包含环状结构或侧链，以生物小分子及其类似物作为手性选择剂，通过共价键或离子键和载体上的连接臂键合。本发明所提供的固定相结构稳定，制备方法较简单。
本发明所指的载体可以是硅胶，锆胶、钛胶、聚合物和石墨碳等，具体讲本发明优选的载体材料是硅胶。载体粒径随所用的柱子尺寸而变化，但通常为1μm至10mm，优选1μm至300μm。载体可以是无定形或球形，优选球形。最好用多孔载体。用多孔载体时，载体的平均孔径1nm～100nm，优选5nm～50nm。
具体而言，本发明提供一种键合手性固定相，其包含载体、与载体键合的连接臂和与连接臂键合的手性选择剂，其中所述载体上键合的连接臂包含环状结构或侧链，通过共价键或离子键同手性选择剂键合。
在本发明的一个实施方案中，所述载体是硅胶，其粒径为1μm至300μm，并且平均孔径为5nm～50nm。
在本发明的另一个实施方案中，所述连接臂具有双齿结构或单齿结构。
在本发明的另一个实施方案中，所述手性选择剂是由脯氨酸、α取代的脯氨酸或羟基脯氨酸及它们的类似物组合而成，它们是L或D立体构型的，数量是2～20个。
本发明所提供的硅胶键合连接臂如下 式中Y1和Y2是0～3的整数，必须使该环从三元环到八元环。Y3是0～10的整数。
本发明所涉及的生物小分子及其类似物主要是由L或D型脯氨酸、L或D型α取代的脯氨酸、L或D型羟基脯氨酸及它们的类似物所组成的寡肽或寡肽类似物。其中优选L型的立体构型。具体讲本发明所涉及的生物小分子及其类似物有以下结构特征 式中，作为结构单元的每一个五元环上的取代基，可以相同，也可以不同，因而可以有不同的组合，产生许多种类似物。L代表以共价键和离子键相连的硅胶键合连接臂。R1是封端基。R1可以是氢原子、碳原子数为1～12的烷氧羰基、碳原子数为1～12的酰基、碳原子数为1～12的取代氨基羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氧羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族取代氨基羰基、特别优选如下基团
n＝0-20的整数。
当X＝O，S，CH2时，没有R5。
当X＝CH时，R5是羟基、是碳原子数为1～12的氨基甲酸酯基、碳原子数为1～12的脲基或硫脲基、碳原子数为1～12的酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氨基甲酸酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的脲基或硫脲基、特别优选如下基团 R2，R3，R4是碳原子数为1～12的烷基、碳原子数为1～18的芳香基、特别优选如下基团 下面是本发明的手性固定相的具体结构。
一、双齿结构连接臂手性色谱固定相的结构
式中R1，R2，R3，R4，R5，X，n同上。
Y1，Y2＝1～2，Y3＝0～10，m＝0～1的整数R6＝-CH3-CH2-CH3-O-CH3-O-CH2-CH3二、单齿结构连接臂手性色谱固定相的结构
式中R1，R2，R3，R4，R5，X，n，Y1，Y2，Y3，m同上。
式中R，R2，R3，R4，R5，L，X，n同上。
在一个优选实施方案中，本发明的手性色谱固定相具有如下结构之一
本发明还提供一种液相色谱手性分离方法，采用上述任何一种键合手性固定相。
本发明还提供一种液相色谱柱，包括分析型柱、制备型柱、模拟移动床、以及电色谱柱，其中填充了上述任何一种键合手性固定相。
本发明的手性色谱固定相共价键合型的制备方法是硅胶载体经过酸洗，干燥，与二(三甲氧基硅丙基)胺、3-氨基丙基硅烷化试剂或氮取代的3-氨基丙基硅烷化试剂等反应，得到氨基键合硅胶，同时这也是短联接臂键合硅胶。该氨基键合硅胶可以进一步和氨基保护的环氨基酸反应，氨基脱保护后，得到长的联接臂氨基键合硅胶。然后这些联接臂键合硅胶和氨基保护羧基未保护的手性选择剂的一个或多个五元环结构单元反应，氨基脱保护后，再经过适当次数的偶联后，最后脱掉氨基保护基，与封端试剂反应得到本发明所述的共价键合型固定相。
本发明的手性色谱固定相离子键合型的制备方法是上述氨基联接臂键合硅胶用匀浆法装入高效液相色谱柱后。用三乙胺的四氢呋喃(THF)溶液和100％ THF作流动相冲洗柱子，然后让带N端封端基的手性选择剂的THF溶液的流动相流过柱子，最后用10％的异丙醇的正己烷冲洗柱子，直到基线稳定，得到本发明所述的离子键合型手性色谱固定相。
本发明所提供的手性色谱柱固定相的具体合成步骤如下1、硅胶的预处理硅胶中加入一定量的浓硫酸和浓硝酸混合液，硅胶重量(g)与酸的体积(mL)比为1∶10～1∶20，于90℃～160℃油浴中加热10-48小时，冷却后，过滤，硅胶用蒸馏水洗至中性，再用丙酮洗三次，于110℃～180℃干燥备用。
2、制备联接臂键合硅胶短联接臂键合硅胶用硅胶与硅烷化试剂偶联得到。在预处理后的硅胶中，加入干燥的甲苯、和硅烷化试剂，硅胶(g)∶偶联剂(mL)∶甲苯(mL)的比为1∶3～10∶10～40。在氮气保护下，于90℃～150℃油浴中加热12-36小时，冷却后，过滤，固体用甲苯和丙酮洗充分洗涤，于60℃～80℃真空干燥备用，这样就得到短联接臂键合硅胶。硅烷化试剂可以是二(三甲氧基硅丙基)胺、3-氨丙基硅烷化试剂、氮取代的3-氨丙基硅烷化试剂等。为合成更长链的连接臂的氨基键合硅胶，在无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入短联接臂键合硅胶、DIC、N-羟基苯并三氮唑(HOBT)和叔丁氧氧羰基(Boc)或芴甲氧羰基(Fmoc)保护氨基环状氨基酸，比例DMF(mL)∶硅胶(g)∶DIC(N，N’-二异丙基碳二亚胺)(mmol)∶HOBT(mmol)∶环状氨基酸(mmol)为5～10∶1∶1～8∶1～3∶1～8，搅拌2～24小时后，过滤，固体用DMF、甲醇和二氯甲烷洗涤。Boc保护基用50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液反应30～120分钟脱去，过滤，固体用DMF、二氯甲烷和50％N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)二氯甲烷溶液洗涤，干燥。Fmoc保护基用哌啶的20％DMF溶液反应30～60分钟脱去，过滤，固体用DMF和二氯甲烷洗涤。得到长链连接臂的氨基键合硅胶。
3、本发明的共价键合型的手性色谱固定相的制备在无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入氨基连接臂键合硅胶、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)。然后加入有Boc或Fmoc保护氨基的手性选择剂单元。DMF(mL)∶硅胶(g)∶HATU(mmol)∶DIPEA(mmol)∶手性选择剂单元的比为5～10∶1∶1～6∶1～3∶1～5。搅拌2～24小时后，过滤，固体用DMF、甲醇和二氯甲烷洗涤。Boc保护基用50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液反应30～120分钟脱去，Fmoc用哌啶的20％DMF溶液反应30～60分钟脱去。过滤和洗涤后干燥。这是一次偶联过程。经过适当次数的偶联后，所得硅胶和封端用的酸、酸酐或酰氯反应，酸、酸酐或酰氯相对于氨基至少要过量3～6倍。搅拌2～24小时反后，过滤，固体用DMF、甲醇和二氯甲烷洗涤。得到本发明所述的共价键合型的固定相。
4、本发明所制备的共价键合型的固定相按匀浆法高压装填高效液相色谱柱。四氯化碳∶二氧六环(2∶1，体积比)为匀浆液，乙醇为顶替液。
5、本发明的离子键合型手性色谱柱固定相的制备硅胶载体键合上连接臂后，用匀浆法装柱子，用含有2mL三乙胺的THF(40mL)流动相洗柱，然后让含有2g含封端基的手性选择剂的THF溶液(40mL)流过柱子，最后用10％的异丙醇的正己烷冲洗柱子，直到基线稳定，得到本发明所述的手性色谱固定相的离子键合型固定相。
本发明所提供的共价键合型柱适用于正相、反相和极性流动相，共价键合型双齿结构的固定相可以耐受较高的pH值。离子键合型柱制备方法简单。本发明所采用的制备方法简便、成本较低，方法适用面广。所制备的硅胶键合固定相表面键合率较高，具有较高稳定性，适用于分析性和制备型高效液相色谱、微柱液相色谱、毛细管电色谱及用作相关分离材料等分离科学、技术领域。
图1是用实施例2固定相分离2，2，2-三氟-1-(蒽基)-乙醇(TFAE)对映体的高效液相色谱图，前后两峰分别是((+/-)-2，2，2-三氟-1-(蒽基)-乙醇)。
图2是用实施例2固定相分离法华令(Warfarin)对映体的高效液相色谱图，前后两峰分别是((+/-)-法华令)。
图3是用实施例3固定相分离1-(2-萘基)乙醇(1-(2-萘基)乙醇)对映体的高效液相色谱图，前后两峰分别是((+/-)-1-(2-萘基)乙醇(1-(2-萘基)乙醇))。
图4是用实施例3固定相分离分离Troger′s Base对映体的高效液相色谱图，前后两峰分别是((+/-)-Troger′s Base)。
图5是用实施例4固定相分离氢化安息香(Hydrobenzoin)对映体的高效液相色谱图，前后两峰分别是((+/-)-氢化安息香)。
图6是用实施例4固定相分离联萘胺(1，1′-Binaphthyl-2，2′-diamine)对映体的高效液相色谱图，前后两峰分别是((+/-)-联萘胺)。
具体实施例方式
下面通过实施例对本发明给予进一步的说明。实施例仅限于说明本发明而并非对本发明的限定。
实施例1一种双齿结构连接臂硅胶。手性色谱固定相的制备方法有两种，一种是连接臂和手性选择剂先和硅烷偶联剂反应，然后在偶联到硅胶上(William H.Pirkle，J.Chromatogr.A，1992，589，45)。另一种是硅烷偶联剂先偶联到硅胶上，然后再和连接臂或手性选择剂反应，得到固定相(美国专利公开号，US2004/0226889 A1)。本发明优选后一种制备方法。硅胶与硅烷化试剂偶联。在4.0克预处理的硅胶(Kromasil，5μm，100，Switzerland)中，加入干燥的甲苯120mL、二(三甲氧基硅丙基)胺(Gelest，Inc.，Morrisville，PA.USA)30mL。在氮气保护下，于140℃油浴中加热24小时，冷却后，过滤，固体用甲苯和丙酮洗充分洗涤，于80℃真空干燥，得到一种双齿结构连接臂硅胶。这是新的连接臂结构与文献(William H.Pirkle，J.Chromatogr.A，1992，589，45)中的类似，后者是三乙氧基硅丙基，并采用是第一种制备方法。本实施例中连接臂用元素分析表征键合量，％C，3.85；％H，0.90；％N，1.22；以氮元素计算键合量为0.87mol/g。
实施例2在20mL无水DMF中，加入实施例1中的键合硅胶3.8克、4克HATU(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)和1.4克DIPEA(Sigma-AldrichCorp.St.Louis，MO，USA)，然后加入芴甲氧羰基保护的脯氨酸(Fmoc-Pro-OH)(CHEM-IMPEX INTERNATIONAL，IL，USA)4.0克。搅拌12小时后，过滤，硅胶用DMF、甲醇和二氯甲烷洗涤。Fmoc保护基用20mL哌啶的20％DMF溶液反应60分钟脱去。过滤，固体用DMF和二氯甲烷洗涤。干燥。这是第一次偶联过程。所得硅胶经过再经过两次相同的偶联后，所得硅胶加入20mL二氯甲烷中，再加入1.6克DIPEA和1.4克三甲基乙酰氯(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)。搅拌12小时后，过滤，固体用DMF、甲醇和二氯甲烷洗涤。得到本发明所述的一种共价键合型的双齿结构的固定相(美国专利公开号，US2004/0226889A1)。偶联过程和脯氨酸键合量用紫外光谱检测脱保护的芴甲氧羰基浓度的文献方法检测((Wang，Y.；Li，T.Anal.Chem.，1999；71(19)；4178)，经过三次的偶联脯氨酸键合量为0.31mmol/g。键合硅胶按通常的匀浆法高压装填入柱套中(柱参数是4.6mm×50mm。Isolation Technologies，Hopedale，MA，USA)，得到手性高效液相色谱柱。
通常的高效液相色谱实验条件如下柱温为室温，紫外254nm检测，流速为1mL/min。样品溶于异丙醇中。
分离2，2，2-三氟-1-(蒽基)-乙醇(TFAE)对映体(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)，用正己烷/异丙醇(88/12，体积比)为流动相。手性分离谱图，如图1所示。2，2，2-三氟-1-(蒽基)-乙醇(TFAE)对映体得到了很好的手性分离。
分离法华令(Warfarin)对映体(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)，用正己烷(0.1％三氟乙酸)/异丙醇(96/4，体积比)为流动相。手性分离谱图，如图2所示。法华令(Warfarin)对映体得到了很好的手性分离。
实施例3按照实施例1的方法制备3-氨丙基硅胶。为合成更长链的单齿连接臂的氨基键合硅胶，在无水DMF中，加入4.0克该键合硅胶、750毫克DIC(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)、800毫克HOBT(Sigma-AldrichCorp.St.Louis，MO，USA)和700毫克4-(1-Boc哌啶)乙酸(Sigma-AldrichCorp.St.Louis，MO，USA)，搅拌12小时后，过滤，硅胶用DMF、甲醇和二氯甲烷洗涤。Boc保护基用50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液反应60分钟脱去，固体用DMF、二氯甲烷和50％N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)二氯甲烷溶液洗涤，干燥，得到长链的单齿连接臂的氨基键合硅胶。按实施例2的方法，用Fmoc-Pro-OH，经过三次的偶联后和封端，得到本发明所述的长连接臂共价键合型单齿结构的固定相。偶联过程和脯氨酸键合量的检测同实施例2，经过三次的偶联脯氨酸键合量为0.28mmol/g。键合硅胶按匀浆法高压装填入柱套中，得到手性高效液相色谱柱。
高效液相色谱实验条件如下柱温为室温，紫外254nm检测，流速为1mL/min。样品溶于异丙醇中。
分离1-(2-萘基)乙醇(1-(2-Naphthyl)ethanol)对映体(Sigma-AldrichCorp.St.Louis，MO，USA)，用正己烷/异丙醇(98/2，体积比)为流动相。手性分离谱图，如图3所示。1-(2-萘基)乙醇(1-(2-Naphthyl)ethanol)对映体得到了很好的手性分离。
分离Troger′s Base对映体(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)，用正己烷为流动相。手性分离谱图，如图4所示。Troger′s Base对映体得到了很好的手性分离。
实施例4按照实施例1的方法制备3-氨丙基硅胶，键合硅胶按匀浆法高压装填高效液相色谱柱。用含有2mL三乙胺的THF(40mL)流动相洗柱，然后让含有2g三甲基乙酰基保护的脯氨酸二肽(Boc-Pro-Pro-OH)(CHEM-IMPEX INTERNATIONAL，IL，USA)的THF溶液(40mL)的流动相流过柱子，最后用10％的异丙醇的正己烷冲洗柱子，所用的流速都是1mL/min，直到基线稳定，得到本发明所述的离子键合型单齿结构的固定相。脯氨酸键合量为0.48mmol/g。
高效液相色谱实验条件如下柱温为室温，紫外254nm检测，流速为1mL/min。样品溶于异丙醇中。用正己烷/异丙醇(95/5，体积比)为流动相。
分离氢化安息香(Hydrobenzoin)对映体(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)的手性分离谱图，如图5所示。氢化安息香(Hydrobenzoin)对映体得到了很好的手性分离。
分离联萘胺(1，1′-Binaphthyl-2，2′-diamine)对映体(Sigma-Aldrich Corp.St.Louis，MO，USA)的手性分离谱图，如图6所示。联萘胺(1，1′-Binaphthyl-2，2′-diamine)对映体对映体得到了很好的手性分离。
权利要求
1.一种键合手性固定相，其包含载体、与载体键合的连接臂和与连接臂键合的手性选择剂，其中所述载体上键合的连接臂包含环状结构或侧链，通过共价键或离子键同手性选择剂键合。
2.根据权利要求1的键合手性固定相，其中所述载体是硅胶，其粒径为1μm至300μm，并且平均孔径为5nm～50nm。
3.根据权利要求1的键合手性固定相，其中所述连接臂具有双齿结构或单齿结构。
4.根据权利要求3的键合手性固定相，其中所述连接臂具有如下所示的双齿结构或单齿结构 其中Y1和Y2是0～3的整数，必须使该环从三元环到八元环，Y3是0～10的整数，R6、R7选自由下列各项组成的组甲氧基、乙氧基、异丙基、甲基、乙基、R式烷基、烯基、环烷基、苯基、3，5-二甲基苯基、2，4-二硝基苯基和3，5-二硝基苯基。
5.根据权利要求1的键合手性固定相，其中所述手性选择剂是由脯氨酸、α取代的脯氨酸或羟基脯氨酸及它们的类似物组合而成，它们是L或D立体构型的，数量是2～20个。
6.根据权利要求1的键合手性固定相，其中所述手性选择剂具有以下结构特征 其中，作为结构单元的每一个五元环上的取代基，可以相同，也可以不同，L代表以共价键和离子键相连的硅胶键合连接臂，R1是封端基，可以是氢原子、碳原子数为1～12的烷氧羰基、碳原子数为1～12的酰基、碳原子数为1～12的取代氨基羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氧羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族取代氨基羰基、特别优选如下基团 n＝0-20的整数，当X＝O，S，CH2时，没有R5，当X＝CH时，R5是羟基、碳原子数为1～12的氨基甲酸酯基、碳原子数为1～12的脲基或硫脲基、碳原子数为1～12的酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氨基甲酸酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的脲基或硫脲基，特别优选如下基团 R2，R3，R4是碳原子数为1～12的烷基、碳原子数为1～18的芳香基，特别优选如下基团 -CH2-CH＝CH3
7.根据权利要求1的键合手性固定相，其具有如下两类结构之一(1)双齿结构连接臂的键合手性固定相的结构 其中R1是封端基，可以是氢原子、碳原子数为1～12的烷氧羰基、碳原子数为1～12的酰基、碳原子数为1～12的取代氨基羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氧羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族取代氨基羰基、特别优选如下基团 n＝0-20的整数，当X＝O，S，CH2时，没有R5，当X＝CH时，R5是羟基、碳原子数为1～12的氨基甲酸酯基、碳原子数为1～12的脲基或硫脲基、碳原子数为1～12的酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氨基甲酸酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的脲基或硫脲基，特别优选如下基团 R2，R3，R4是碳原子数为1～12的烷基、碳原子数为1～18的芳香基，特别优选如下基团 -CH2-CH＝CH3 Y1，Y2＝1～2，Y3＝0～10，m＝0～1的整数R6＝-CH3-CH2-CH3-O-CH3或-O-CH2-CH3；(2)单齿结构连接臂的键合手性固定相的结构 其中R1是封端基，可以是氢原子、碳原子数为1～12的烷氧羰基、碳原子数为1～12的酰基、碳原子数为1～12的取代氨基羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氧羰基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族取代氨基羰基、特别优选如下基团 n＝0-20的整数，当X＝O，S，CH2时，没有R5，当X＝CH时，R5是羟基、碳原子数为1～12的氨基甲酸酯基、碳原子数为1～12的脲基或硫脲基、碳原子数为1～12的酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的芳香族氨基甲酸酯基、碳原子数为1～18的含有或不含有杂原子的脲基或硫脲基，特别优选如下基团 R2，R3，R4是碳原子数为1～12的烷基、碳原子数为1～18的芳香基，特别优选如下基团 -CH2-CH＝CH3 Y1，Y2＝1～2，Y3＝0～10，m＝0～1的整数，
8.根据权利要求1的键合手性固定相，其具有如下结构
9.一种液相色谱手性分离方法，其中使用根据权利要求1-8中任何一项的键合手性固定相作为固定相。
10.液相色谱柱，包括分析型柱、制备型柱、模拟移动床、以及电色谱柱，其中填充了根据权利要求1-8中任何一项的键合手性固定相。
全文摘要
一种生物小分子或其类似物键合手性固定相及其制备方法，其特征是载体上键合的连接臂包含环状结构或侧链，通过共价键或离子键同手性选择剂键合。连接臂包含环状结构或侧链是双齿结构和带侧链的单齿结构。生物小分子或其类似物是手性选择剂，由2～20个L或D型的脯氨酸、α取代的脯氨酸或羟基脯氨酸及它们的类似物组合而成。适用于高效液相色谱、制备色谱、模拟移动床、微柱液相色谱、毛细管电色谱等领域。
文档编号B01J20/29GK1864853SQ20061001175
公开日2006年11月22日 申请日期2006年4月19日 优先权日2006年4月19日
发明者劳文剑 申请人:劳文剑, 初君