检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种多层硅胶净化色谱柱的制备和填充方法，该方法包括如下步骤：1)多层硅胶净化色谱柱填充物硝酸银硅胶、硫酸硅胶和氢氧化钠硅胶的制备；2)多层硅胶净化色谱柱填充物硅胶和无水硫酸钠的处理；3)多层硅胶净化色谱柱的填充。采用该方法制备的多层硅胶净化色谱柱能克服复杂的基体效应，能对含多溴联苯类化合物的基体中的多种杂质进行吸附分离，从而有效地除去多种杂质，避免了对后续多溴联苯类化合物检测的干扰，且该方法制备的多层硅胶净化色谱柱具有操作简单、重现性好、灵敏度高和准确度高的优点。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明涉及检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法，属于环境 或食品检测【技术领域】。 检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法
【背景技术】
[0002] 目前，环境和食品中的有机污染物种类越来越多，如多溴联苯类化合物，且这类有 机污染物所处的基体也十分复杂，基体里往往含有各种酸性化合物、碱性化合物、芳香族化 合物、含硫化物和含水化合物等杂质，如果这些杂质不经处理，则会对后续有机污染物的检 测结果产生较大干扰，影响检测的结果。硅胶作为一种良好的吸附，普通硅胶色谱柱制备方 法制备的硅胶色谱柱虽然可以去除基体中的部分杂质，但是当基体情况较复杂，检测基体 中的多溴联苯类化合物类有机污染物时，采用普通硅胶色谱柱制备方法制备的硅胶色谱柱 很难将基体中的各种酸性化合物、碱性化合物、芳香族化合物、含硫化物和含水化合物等杂 质去除，对后续多溴联苯类化合物的检测产生的干扰还是很大。因此，普通硅胶色谱柱制备 方法制备的硅胶色谱柱不能用于检测复杂基体中多溴联苯类化合物类有机污染物。
【发明内容】
[0003] 为解决现有技术存在的问题，本发明提供了检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净 化色谱柱的制备方法，采用该方法制备的多层硅胶净化色谱柱能克服复杂的基体效应，能 对含多溴联苯类化合物的基体中的多种杂质进行吸附分离，从而有效地除去多种杂质，避 免了对后续多溴联苯类化合物检测的干扰，且该方法制备的多层硅胶净化色谱柱具有操作 简单、重现性好、灵敏度高和准确度高的优点。
[0004] 实现本发明目的所采取的技术方案为：
[0005] -种检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法，包括如下步骤：
[0006] 1. 1多层硅胶净化色谱柱填充物硝酸银硅胶、硫酸硅胶和氢氧化钠硅胶的制备：
[0007] 1. 1. 1硝酸银硅胶的制备：
[0008] 配制质量百分浓度为10%?20%的硝酸银溶液，按质量比硝酸银溶液：硅胶= 1:8?10,在搅拌和避光条件下将硝酸银溶液滴加到硅胶中，每滴加一滴硝酸银溶液都要 搅拌至分散均匀后再滴加下一滴硝酸银溶液，硝酸银溶液滴加完毕后，在避光条件下用振 荡器将硝酸银溶液与硅胶的混合体系持续震荡至反应完毕后，在避光条件下进行分段干 燥，先在50?70°C下烘烤2?3小时，然后在80?100°C下烘烤2?3小时，再在110? 130°C下烘烤4?5小时，得到硝酸银硅胶；
[0009] 1. 1. 2硫酸硅胶的制备：
[0010] 按质量比浓硫酸：硅胶=11:14?18,在搅拌条件下将质量百分比浓度为95%? 97 %的浓浓硫酸滴加到硅胶中，每滴加一滴浓硫酸都要搅拌至分散均匀后再滴加下一滴浓 硫酸，浓硫酸滴加完毕后，用振荡器将浓硫酸与硅胶的混合体系持续震荡至反应完毕，得到 硫酸硅胶；
[0011] 1. 1. 3氢氧化钠硅胶的制备：
[0012] 按质量比氢氧化钠溶液：硅胶=1:2?3,在搅拌条件下将浓度为0.8mol/L? 1. 2mol/L的氢氧化钠溶液滴加到硅胶中，每滴加一滴氢氧化钠溶液都要搅拌至分散均匀后 再滴加下一滴氢氧化钠溶液，滴加完毕后，用振荡器将氢氧化钠溶液与硅胶的混合体系持 续震荡至反应完毕，得到氢氧化钠硅胶；
[0013] 1. 2多层硅胶净化色谱柱填充物硅胶和无水浓硫酸钠的处理：
[0014] 将硅胶在240?260°C下烘烤10?12小时后备用，再将无水浓硫酸钠在500? 600°C下烘烤10?12小时后备用；
[0015] 1. 3多层硅胶净化色谱柱的填充：
[0016] 1. 3. 1多层硅胶净化色谱柱中从下至上各填充物的填充顺序和质量份为：
[0017] ①玻璃奸维 1?2份： @硅胶 4?6份t ③ 氢氧化_聽胶 6?9份： ④ fiK 10?15份； ⑤ 硫酸硅胶 25?30份； _纖 卜6份； ⑦ 葡酸银砧胶 6?9汾； ⑧ ￡水浓硫1梭钠 25?30份；
[0018] 1. 3. 2取一支干燥洁净的色谱柱，所述色谱柱内径与长度之比为1:8?10,按步骤 1. 3. 1所述质量份称取各填充物，再按照步骤1. 3. 1的填充顺序将各填充物依次从色谱柱 的上端口灌入，每种填充物从色谱柱的上端口灌入后，让灌入的每种填充物平铺均匀，且色 谱柱内壁无填充物附着，灌装硝酸银硅胶时，硝酸银硅胶灌装好后，用锡箔纸包住色谱柱使 硝酸银硅胶层避光，所有填充物灌装完成后，打开色谱柱下端的旋转活塞，在色谱柱的下端 口接入真空泵，打开真空泵，边抽真空边用软木棒敲打色谱柱的外壁，当色谱柱内填充物的 高度不再下降时，继续抽真空至少3分钟后，旋紧色谱柱下端活塞；
[0019] 1. 3. 3打开色谱柱下端的活塞，使流入色谱柱的液体的流速最大，将二氯甲烷自色 谱柱上端口沿色谱柱内壁缓缓注入色谱柱，使所有填充物全部被润湿且无气泡，当色谱柱 内各填充物层次清晰、形态均一时，停止注入二氯甲烷，最后用足量的环己烷洗脱色谱柱， 洗脱完毕后关闭色谱柱下端的活塞。
[0020] 对上述技术方案进行改进，步骤1)中，制备硝酸银硅胶、硫酸硅胶和氢氧化钠硅 胶时，用振荡器震荡的时间均为6?8个小时；每种填充物从色谱柱的上端口灌入后，先用 手轻轻摇动色谱柱，然后用软木棒沿着色谱柱的外壁轻轻敲打，边敲打边旋转色谱柱，直至 色谱柱内壁无填充物附着；灌装玻璃纤维时，边敲打色谱柱边旋转色谱柱至色谱柱内壁没 有玻璃纤维附着后，用玻璃棒将玻璃纤维层的表面压实压平整。
[0021] 由上述技术方案可知，该方法对硅胶采用了不同的改性方法进行了改性，得到了 硝酸银硅胶、硫酸硅胶和氢氧化钠硅胶三种改性硅胶，硝酸银硅胶能有效吸附含多溴联苯 类化合物的基体中的硫和含硫化合物，硫酸硅胶能有效吸附含多溴联苯类化合物的基体中 的碱性物质、脂肪、蛋白质和芳香族化合物，氢氧化钠硅胶能有效吸附含多溴联苯类化合物 的基体中的酸性物质。在制备这三种改性硅胶的方法中，滴加硝酸银溶液、硫酸和氢氧化钠 溶液时滴加速度有严格要求，每滴加一滴硝酸银溶液、浓硫酸或氢氧化钠溶液后，都必须搅 拌至充分混合均匀后才能滴加下一滴，而且滴加完成后，必须用振荡器震荡6?8个小时。 采用这种方法制备的硝酸银硅胶、硫酸硅胶和氢氧化钠硅胶具有均匀性好、分散度高和吸 附杂质的能力强等优点。制备硝酸银硅胶时，采用分段干燥的方法对硝酸银硅胶进行干燥， 采用分段干燥，温度上升平缓，硝酸银硅胶内部和外部都彻底而缓慢地干燥，解决了硝酸银 硅胶容易发黑和结块的问题。
[0022] 该方法中在色谱柱的最底层填充玻璃纤维，玻璃纤维性质稳定，不与其他化合物 反应，在填充过程中将玻璃纤维层压实压平整，能有效支撑硅胶层和过滤固体杂质。该方法 中各改性硅胶层之间填充硅胶作为缓冲层，能有效防止各改性硅胶层相互间进行反应。该 方法中在色谱柱的最上层填充无水硫酸钠，能有效去除基体中的水分。针对环境和食品中 的多溴联苯类化合物类有机污染物，为消除杂质的干扰，检测出多溴联苯类化合物类有机 污染物，该方法中色谱柱的填充物采用了特殊的填充顺序和填充量，这种填充顺序和填充 量有如下好处：最上层的硫酸钠先去除样品中的水分，硝酸银硅胶去除硫和含硫化合物，硫 酸化硅胶去除样品中的碱性化合物、脂肪、蛋白质和芳香族化合物，最后氢氧化钠化硅胶去 除酸性化合物，还可以中和从硫酸化硅胶层带下的酸。
[0023] 该方法在填充过程中采用真空填充技术，使填充物质均匀、致密，且填充物质表面 平整，加入溶剂后，各填充物能被溶剂全部润湿，各填充物形态均一、层次清晰，且色谱质内 无气泡。
[0024] 本发明与现有技术相比，其有益效果和优点在于：
[0025] 该方法中制备的改性硅胶性能优越，而且该方法中填充物的填充顺序针对性强， 填充顺序合理，因此，该方法制备的多层硅胶净化色谱柱能克服复杂的基体效应，能去除含 多溴联苯类化合物类有机污染物基体中的多种杂质，消除了对后续多溴联苯类化合物类有 机污染物检测产生的干扰。更重要的是，该方法制备的多层硅胶净化色谱柱操作简单，经试 验表明，使用该方法制备的多层硅胶色谱柱检测多溴联苯类化合物等有机污染物具有灵敏 度高、准确度高、重现性好和回收率高的优点。
【具体实施方式】
[0026] 为检验本发明提供的检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法 制备的多层硅胶净化色谱柱的可行性和优越性，在水和底泥中加入多溴联苯醚及其代谢物 的混合标准溶液，将含有多溴联苯醚及其代谢物的混合标准溶液的水和底泥采用本发明提 供的检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法制备的多层硅胶净化色谱 柱进行吸附分离，检测经多层硅胶净化色谱柱吸附分离后的水和底泥中的多溴联苯醚及其 代谢物的含量，根据检出的结果浓度和已知的多溴联苯醚及其代谢物浓度的差异，对该方 法制备的多层硅胶净化色谱柱可行性和优越性进行评估。
[0027] 实施例1
[0028] 1)制备多层硅胶净化色谱柱
[0029] 称取lOg硝酸银，溶解在lOOmL水里，制成质量百分浓度为10 %硝酸银溶液。称 取20g硝酸银溶液，逐滴滴加到160g的硅胶60中，每滴加一滴都要用玻璃棒不停的搅动至 分散均匀。硝酸银溶液滴加完毕后，用振荡器将硝酸银溶液与硅胶60的混合体系持续摇动 8个小时后，将所得物进行分段干燥处理，在50°C下烘烤3小时；在80°C下烘烤3小时；在 110°C下烘烤5小时，得到硝酸银硅胶，整个过程都要避光，最后将硝酸银硅胶储存在棕色 玻璃瓶中。
[0030] 称取55g质量百分比浓度为97 %的浓硫酸，将浓硫酸逐滴滴加到70g的硅胶60 中，每滴加一滴都要用玻璃棒不停的搅动至分散均匀后再才能滴加下一滴。浓硫酸滴加完 毕后，用振荡器将硫酸与硅胶60的混合体系震荡6小时，得到硫酸硅胶，最后将硫酸硅胶储 存在棕色玻璃瓶中。
[0031] 称取4g氢氧化钠，溶解在100mL水里，配制成浓度为lmol/L的氢氧化钠溶液。称 取33g氢氧化钠溶液，逐滴滴加到66g的硅胶60中，每滴加一滴都要用玻璃棒不停的搅动 至分散均勻。氢氧化钠溶液滴加完毕后，用振荡器将氢氧化钠溶液与娃胶60的混合体系震 荡6小时，得到氢氧化钠硅胶，最后将氢氧化钠硅胶储存在棕色玻璃瓶中。
[0032] 称取200g硅胶60在240°C下烘烤10小时后备用，再称取50g无水硫酸钠在500°C 下烘烤12小时后备用。
[0033] 称取3份质量分别为2g、5g和2g的娃胶60,再称取0. 5g玻璃纤维、3g氢氧化钠 硅胶、12. 5g硫酸硅胶、3g硝酸银硅胶和12. 5g无水硫酸钠，取一支干燥洁净的色谱柱，色谱 柱的内径为2cm，长度为19cm，按照玻璃纤维、娃胶602g、氢氧化钠娃胶、娃胶605g、硫酸娃 胶、硅胶602g、硝酸银硅胶和无水硫酸钠的顺序将各填充物依次从色谱柱的上端口灌入，每 种填充物从色谱柱的上端口灌入后，先用手轻轻摇动色谱柱，让灌入的每种填充物平铺均 匀，然后用软木棒沿着色谱柱的外壁轻轻敲打，边敲打边旋转色谱柱，使附着在色谱柱内壁 上的微量硅胶滑落下去，直至色谱柱内壁无填充物附着。灌装玻璃纤维时，边敲打色谱柱 边旋转色谱柱至色谱柱内壁没有玻璃纤维附着后，用玻璃棒将玻璃纤维层的表面压实压平 整，灌装硝酸银硅胶时，硝酸银硅胶灌装好后，用锡箔纸包住色谱柱使硝酸银硅胶层避光。 所有填充物灌装完成后，打开色谱柱下端的旋转活塞，在色谱柱的下端口接入真空泵，打开 真空泵，边抽真空边用软木棒敲打色谱柱的外壁，当色谱柱内填充物的高度不再下降时，继 续抽真空3分钟，关掉真空泵并卸下真空泵，旋紧色谱柱下端活塞。本实施例中所用的硅胶 60可以用其它的硅胶来代替。
[0034] 打开色谱柱下端的活塞至活塞，使流入色谱柱的液体的流速最大，将二氯甲烷自 色谱柱上端口沿色谱柱内壁缓缓注入色谱柱，注意不要使填充物质被二氯甲烷冲起，使填 充物全部被润湿时且无气泡，当色谱柱柱内各填充物层次清晰、形态均一时，停止注入二氯 甲烷，最后用50mL环己烷洗脱色谱柱，洗脱完毕后关闭色谱柱下端的活塞。
[0035] 2)对上述方法制备的多层硅胶净化色谱柱进行评估
[0036] 量取500mL水样，将水样加入到2L分液漏斗，加入13种多溴联苯醚混标溶液 (BDE17、BDE28、BDE47、BDE66、BDE71、BDE85、BDE99、BDE100、BDE138、BDE153、BDE154、 BDE183、BDE190) ;8 种甲氧基多溴联苯醚混标溶液（2, -Me〇-BDE68、6-Me〇-BDE47、 5-Me〇-BDE47、4' -Me〇-BDE49、5' -Me0-BDE100、4' -Me0-BDE103、5' -Me〇-BDE99、 4' -Me〇-BDE101) ;7 种定量用同位素内标 Surrogate internal standards 溶液 (13C12-BDE-28、13C12-BDE-47、 13C12-BDE-99、13C12-BDE-100、 13C12-BDE-153、13C12-BDE-154、 13C12-BDE-183)，设置3个加标水平即0· 05 μ g/L、0. 2 μ g/L、0. 5 μ g/L。将溶液混合均匀并 平衡1?2h。
[0037] 加入60mL二氯甲烷进行萃取，萃取完毕后，在经二氯甲烷润洗的分液漏斗上叠上 滤纸，在滤纸上装入体积大约为漏斗体积二分之一的无水硫酸钠，将经二氯甲烷萃取后的 混合物倒入漏斗中，并在漏斗的下端放一个浓缩瓶接收漏斗流出的液体。
[0038] 重复上述两个步骤两次，再用20mL二氯甲烷清洗分液漏斗，并在分液漏斗的下端 放一个浓缩瓶接收漏斗流出的液体。重复二氯甲烷清洗分液漏斗的步骤1次。
[0039] 将各浓缩瓶接收的液体混合，约220mL，然后浓缩至5mL并转移至玻璃试管中，并 加入甲苯或异辛烷作为保护剂，再用氮吹仪浓缩至近干，最后加入2mL正己烷溶解浓缩后 的残留物，得到正己烷提取液。
[0040] 将2mL正己烷提取液倒入多层硅胶净化色谱柱中，用2mL的正己烷清洗玻璃试管， 总共清洗2次，并将清洗后的液体倒入多层硅胶净化色谱柱中。先用50mL环己烷洗脱多层 硅胶净化色谱柱，然后用40mL环己烷和10mL二氯甲烷的混合液体洗脱多层硅胶净化色谱 柱，收集两次洗脱多层硅胶净化色谱柱时流出的液体，多层硅胶净化色谱柱流出的液体即 为接收液，合并两次收集的接收液并转移至玻璃试管中，加入2mL甲苯或异辛烷作保护剂， 再用氮吹仪浓缩至近干，最后加入lmL正己烷溶解浓缩后的残留物。
[0041] 用同位素稀释法或GC-MS法测定正己烷溶解的残留物中多溴联苯类化合物的含 量，测定的结果为：
[0042] 水样中多溴联苯醚（13种）和甲氧基多溴联苯醚（8种）在0· 05 μ g/L的加标水 平下的回收率为：72%?90% ;
[0043] 水样中多溴联苯醚（13种）和甲氧基多溴联苯醚（8种）在0. 2 μ g/L的加标水平 下的回收率为：78%?103% ;
[0044] 水样中多溴联苯醚（13种）和甲氧基多溴联苯醚（8种）在0. 5 μ g/L的加标水平 下的回收率为：86%?102%。
[0045] 上述回收率的结果满足欧盟指令（European Union document2002/657/EC)中的 相关要求。即P < lug/L时回收率需在50%?120%范围内，P指待测物的浓度。
[0046] 实施例2
[0047] 1)制备多层硅胶净化色谱柱
[0048] 称取20g硝酸银，溶解在100mL水里，制成质量百分浓度为20%硝酸银溶液。称取 20g硝酸银溶液，逐滴滴加到200g的硅胶60中，每滴加一滴都要用玻璃棒不停的搅动至分 散均匀后才能滴加下一滴。硝酸银溶液滴加完毕后，用振荡器将硝酸银溶液与硅胶60的混 合体系持续摇动6个小时后，将所得物进行分段干燥处理，在70°C下烘烤2小时；在100°C 下烘烤2小时；在130°C下烘烤4小时，得到硝酸银硅胶，整个过程都要避光，最后将硝酸银 硅胶储存在棕色玻璃瓶中。
[0049] 称取55g的浓度为95 %的浓硫酸，将浓硫酸逐滴滴加到90g的硅胶60中，每滴加 一滴都要用玻璃棒不停的搅动至分散均匀。浓硫酸滴加完毕后，用振荡器将浓硫酸与硅胶 60的混合体系震荡8小时，得到硫酸硅胶，最后将硫酸硅胶储存在棕色玻璃瓶中。
[0050] 称取4. 8g氢氧化钠，溶解在100mL水里，配制成浓度为L 2mol/L的氢氧化钠溶 液。称取33g氢氧化钠溶液，逐滴滴加到99g的硅胶60中，每滴加一滴都要用玻璃棒不停 的搅动至分散均匀。氢氧化钠溶液滴加完毕后，用振荡器将氢氧化钠溶液与硅胶60的混合 体系震荡8小时，得到氢氧化钠硅胶，最后将氢氧化钠硅胶储存在棕色玻璃瓶中。
[0051] 称取200g硅胶60在260°C下烘烤12小时后备用，再称取50g无水硫酸钠在550°C 下烘烤12小时后备用。
[0052] 称取3份质量分别为3g、7. 5g和3g的硅胶60,再称取lg玻璃纤维、4. 5g氢氧化 钠硅胶、15g硫酸硅胶、4. 5g硝酸银硅胶和15g无水硫酸钠，取一支干燥洁净的色谱柱，色谱 柱的内径为2. 5cm，长度为25cm，按照玻璃纤维、娃胶603g、氢氧化钠娃胶、娃胶607. 5g、硫 酸硅胶、硅胶603g、硝酸银硅胶和无水硫酸钠的顺序将各填充物依次从色谱柱的上端口灌 入，每种填充物从色谱柱的上端口灌入后，先用手轻轻摇动色谱柱，让灌入的各填充物平铺 均匀，然后用软木棒沿着色谱柱的外壁轻轻敲打，边敲打边旋转色谱柱，使附着在色谱柱内 壁上的微量硅胶滑落下去，直至色谱柱内壁无填充物附着。灌装玻璃纤维时，边敲打色谱柱 边旋转色谱柱至色谱柱内壁没有玻璃纤维附着后，用玻璃棒将玻璃纤维层的表面压实压平 整。灌装硝酸银硅胶时，硝酸银硅胶灌装好后，用锡箔纸包住色谱柱使硝酸银硅胶层避光。 所有填充物灌装完成后，打开色谱柱下端的旋转活塞，在色谱柱的下端口接入真空泵，打开 真空泵，边抽真空边用软木棒敲打色谱柱的外壁，当色谱柱内填充物的高度不再下降时，继 续抽真空5分钟，关掉真空泵并卸下真空泵，旋紧色谱柱下端活塞。
[0053] 打开色谱柱下端的活塞至活塞，使流入色谱柱的液体的流速最大，将二氯甲烷自 色谱柱上端口沿色谱柱内壁缓缓注入色谱柱，注意不要使填充物质被二氯甲烷冲起，使填 充物全部被润湿时且无气泡，当色谱柱柱内各填充物层次清晰、形态均一时，停止注入二氯 甲烷，最后用80mL环己烷洗脱色谱柱，洗脱完毕后关闭色谱柱下端的活塞。
[0054] 2)对上述方法制备的多层硅胶净化色谱柱进行评估
[0055] 称取10g底泥样品加入到研磨器中，加入3g无水硫酸钠（加入无水硫酸钠是为 了吸收样品中的水分），再加入13种多溴联苯醚混标溶液（BDE17、BDE28、BDE47、BDE66、 BDE71、BDE85、BDE99、BDE100、BDE138、BDE153、BDE154、BDE183、BDE190) ;8 种甲氧基多溴联 苯醚混标溶液（2，-Me〇-BDE68、6-Me〇-BDE47、5-Me〇-BDE47、4，-Me〇-BDE49、5，-Me〇-BDE 100、 4' -Me0-BDE103、5' -Me〇-BDE99、4' -MeO-BDElOl) ;7 种定量用同位素内标 Surrogate internal standards 溶液（13C12-BDE-28、13C12-BDE-47、 13C12-BDE-99、13C12-BDE-100、 13C12-BDE-153、13C12-BDE-154、 13C12-BDE-183)，设置 3 个加标水平即 2. 5μ g/kg、10y g/kg、 25 μ g/kg。将溶液混合均勻并平衡1?2h，转移到滤纸筒中。
[0056] 加入125mL丙酮和125mL二氯甲烷的混合液体，再采用索氏提取的方法提取16个 小时，并收集提取后的提取液，提取液约250mL。将提取液浓缩至5?10mL后，转移至玻璃 试管中，加入2mL甲苯或异辛烷作保护剂，再用氮吹仪浓缩至近干，最后加入2mL正己烷溶 解浓缩后的残留物，得到正己烷提取液。
[0057] 将2mL正己烷提取液倒入多层硅胶净化色谱柱中，用2mL的正己烷清洗玻璃试管， 总共清洗2次，并将清洗后的液体倒入多层硅胶净化色谱柱中。先用50mL环己烷洗脱多层 硅胶净化色谱柱，然后用40mL环己烷和10mL二氯甲烷的混合液体洗脱多层硅胶净化色谱 柱，收集两次洗脱多层硅胶净化色谱柱时流出的液体，多层硅胶净化色谱柱流出的液体即 为接收液，合并两次收集的接收液并转移至玻璃试管中，加入2mL甲苯或异辛烷作保护剂，
【权利要求】
1.检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法，其特征在于包括如下步 骤： 1. 1多层硅胶净化色谱柱填充物硝酸银硅胶、硫酸硅胶和氢氧化钠硅胶的制备： 1. 1. 1硝酸银硅胶的制备： 配制质量百分浓度为10%?20%的硝酸银溶液，按质量比硝酸银溶液：硅胶=1:8? 10,在搅拌和避光条件下将硝酸银溶液滴加到硅胶中，每滴加一滴硝酸银溶液都要搅拌至 分散均匀后再滴加下一滴硝酸银溶液，硝酸银溶液滴加完毕后，在避光条件下用振荡器将 硝酸银溶液与硅胶的混合体系持续震荡至反应完毕后，在避光条件下进行分段干燥，先在 50?70°C下烘烤2?3小时，然后在80?100°C下烘烤2?3小时，再在110?130°C下 烘烤4?5小时，得到硝酸银硅胶； 1. 1. 2硫酸硅胶的制备： 按质量比浓硫酸：硅胶=11:14?18,在搅拌条件下将质量百分比浓度为95%?97% 的浓浓硫酸滴加到硅胶中，每滴加一滴浓硫酸都要搅拌至分散均匀后再滴加下一滴浓硫 酸，浓硫酸滴加完毕后，用振荡器将浓硫酸与硅胶的混合体系持续震荡至反应完毕，得到硫 酸硅胶； 1. 1. 3氢氧化钠硅胶的制备： 按质量比氢氧化钠溶液：硅胶=1:2?3,在搅拌条件下将浓度为0· 8mol/L?1. 2mol/ L的氢氧化钠溶液滴加到硅胶中，每滴加一滴氢氧化钠溶液都要搅拌至分散均匀后再滴加 下一滴氢氧化钠溶液，滴加完毕后，用振荡器将氢氧化钠溶液与娃胶的混合体系持续震荡 至反应完毕，得到氢氧化钠硅胶； 1. 2多层硅胶净化色谱柱填充物硅胶和无水浓硫酸钠的处理： 将硅胶在240?260°C下烘烤10?12小时后备用，再将无水浓硫酸钠在500?600°C 下烘烤10?12小时后备用； 1. 3多层硅胶净化色谱柱的填充： 1. 3. 1多层硅胶净化色谱柱中从下至上各填充物的填充顺序和质量份为： ① 玻璃纤维 1?2份； ② 硅胶 4?6份； ③ Μ氣化钠 tt胶 6?9份； ④ 硅胶 10?15份； ⑤ 硫_硅胶 25?30份； ⑥ tt胶 4?6份； ⑦ 硝酸《硅胶 6?9份; ⑧ 无水浓硫變钠 25?30份； 1. 3. 2取一支干燥洁净的色谱柱，所述色谱柱内径与长度之比为1:8?10,按步骤 1. 3. 1所述质量份称取各填充物，再按照步骤1. 3. 1的填充顺序将各填充物依次从色谱柱 的上端口灌入，每种填充物从色谱柱的上端口灌入后，让灌入的每种填充物平铺均匀，且色 谱柱内壁无填充物附着，灌装硝酸银硅胶时，硝酸银硅胶灌装好后，用锡箔纸包住色谱柱使 硝酸银硅胶层避光，所有填充物灌装完成后，打开色谱柱下端的旋转活塞，在色谱柱的下端 口接入真空泵，打开真空泵，边抽真空边用软木棒敲打色谱柱的外壁，当色谱柱内填充物的 高度不再下降时，继续抽真空至少3分钟后，旋紧色谱柱下端活塞； 1. 3. 3打开色谱柱下端的活塞，使流入色谱柱的液体的流速最大，将二氯甲烷自色谱柱 上端口沿色谱柱内壁缓缓注入色谱柱，使所有填充物全部被润湿且无气泡，当色谱柱内各 填充物层次清晰、形态均一时，停止注入二氯甲烷，最后用足量的环己烷洗脱色谱柱，洗脱 完毕后关闭色谱柱下端的活塞。
2. 根据权利要求1所述检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法，其 特征在于：步骤1)中，制备硝酸银硅胶、硫酸硅胶和氢氧化钠硅胶时，用振荡器震荡的时间 均为6?8个小时。
3. 根据权利要求1所述检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法，其 特征在于：每种填充物从色谱柱的上端口灌入后，先用手轻轻摇动色谱柱，然后用软木棒沿 着色谱柱的外壁轻轻敲打，边敲打边旋转色谱柱，直至色谱柱内壁无填充物附着。
4. 根据权利要求1所述检测多溴联苯类化合物的多层硅胶净化色谱柱的制备方法，其 特征在于：灌装玻璃纤维时，边敲打色谱柱边旋转色谱柱至色谱柱内壁没有玻璃纤维附着 后，用玻璃棒将玻璃纤维层的表面压实压平整。
【文档编号】B01J20/281GK104084180SQ201410308520
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年6月30日 优先权日:2014年6月30日
【发明者】胡小钟, 胡德聪, 陈魏 申请人:中华人民共和国湖北出入境检验检疫局