一种硫化钼‑四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备与应用的制作方法

本发明涉及一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米材料的制备技术领域，还涉及抑菌的方法技术。

背景技术：

细菌广泛存在于我们周围的环境中。细菌感染已经严重威胁到人们的身体健康。传统的抗菌剂(如纳米Ag，抗生素等)已广泛用于杀死细菌，但其对环境存在潜在的危害且效率较低、成本较高，具有一定的局限性。所以，对环境友好的、低成本、高效的抗菌材料的研究和开发是很重要的。

近年来，半导体由于其无毒、无害以及优异的抗菌性能受到显著的关注。硫化钼是一种优良的导电材料，且具有典型的二维结构，是一种很好的复合载体。四氧化三铁是一种常见的铁氧化物。利用水热合成法制备的硫化钼-四氧化三铁纳米复合材料具备极好的抗菌性能，本发明证实其抗菌性能具有很好的选择性，其对革兰氏阳性菌具有优良的抗菌效果。

技术实现要素：

本发明的目的在于，克服现有技术中存在的问题，提供一种新的抗菌剂，具体涉及硫化钼-四氧化三铁复合物制备方法及抑菌技术，此复合物具有优良的抗菌性能，是一种新型的革兰氏阳性抗菌剂。

实现本发明目的的技术解决方案是：

一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备方法，包括如下步骤：

(1)将六水三氯化铁与四水二氯化亚铁以Fe(III)：Fe(II)为2:1的摩尔比溶解在去离子水中，向溶液中鼓吹N₂进行脱氧；

(2)将溶液置于60℃的水浴中，保持N₂保护并大力搅拌5min，然后将NH₄OH溶液缓慢加入到溶液中直到pH为8，然后混合溶液并在60℃下老化；

(3)溶液中的沉淀物通过外部磁场力分离，上清液倒出。将沉淀用去离子水洗4次，然后在40℃下干燥过夜，即得到纳米四氧化三铁；

(4)称取二水钼酸钠，硫代乙酰胺以及适量步骤(3)的纳米四氧化三铁，加入水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，高温反应；

(5)对步骤(4)反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

步骤(4)所述二水钼酸钠和硫代乙酰胺，按物质的量计，比例为(1～2)：(3～7)；每1mmol～2mmol二水钼酸钠对应加入40mg～800mg纳米四氧化三铁和60mL水。

步骤(4)所述的反应温度为160～200℃，反应时间为10～18小时。

步骤(5)所述的乙醇和水的清洗次数为3～5次，烘箱温度60～80℃，烘干时间为8～16小时。

本发明还公开了利用上述硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料抑菌的方法，包括如下步骤：

a)取硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

b)称取20～50g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于0.5～2.0L水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份；在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入5～10g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中灭菌；将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用；

c)取-80℃下保存的大肠杆菌(革兰氏阴性菌)及葡萄球菌(革兰氏阳性菌)，分别在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，倒置活化培养过夜；然后挑取单克隆于含3～6mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在摇床上培养过夜，取0.5～1.5ml菌离心去除培养基，再用含5～15g氯化钠的灭菌水将菌稀释，即得大肠杆菌及葡萄球菌的试验用菌；

d)取不同量步骤a)产物加入到2～8mL步骤c)的产物中，从而将步骤a)产物产物配制成10～100mg/L的工作浓度；随后将这些溶液置于摇床处理；

e)将步骤d)的产物稀释，再各取50～200ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，倒置培养过夜并计数；

计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)。

步骤a)所述的加入无水乙醇的体积为1～1.5毫升，消毒时间为5～20分钟，加入灭菌水的体积为0.5～1.5毫升；步骤a)所述的离心速率为2000～6000转/分，乙醇和水的清洗次数为3～6次，烘箱稳定60～80℃。

步骤b)高压灭菌的温度为120～125℃，灭菌时间为10～30分钟。

步骤c)所述的活化培养温度为32～38℃，摇床培养温度为32～38℃，转速为150～220转/分，稀释后的浓度为0.5～1.0×10⁷CFU/mL。

步骤d)所述处理时间0.5～2小时；处理时的温度为32～38℃，转速不低于150～220转/分，光的功率为300～500瓦。

步骤e)所述的稀释后的浓度范围为10^-1～10^-4，培养温度为32～38℃。

相对于现有技术，本发明取得了以下有益效果：

①在硫化钼合成体系中加入四氧化三铁是为了调控硫化钼的结构，促使硫化钼复合物具有更大的比表面积和更好的分散性能，四氧化三铁与硫化钼的协同作用，能有效降低硫化钼的带隙宽度，从而确保所得复合物具有更好的光催化抗菌性能。

②步骤⑺中先用乙醇清洗去除未反应的聚乙烯吡咯烷酮，再用去离子水清洗去除未反应的无机离子，可以获得纯净的硫化钼-四氧化三铁复合物纳米材料。

③步骤⑻中加入无水乙醇的目的是去除硫化钼-四氧化三铁复合物纳米材料中可能携带的细菌，保证后续抗菌实验结果的准确性。

④本发明制得的硫化钼-四氧化三铁复合材料中钇：铁的摩尔比大约为(1.7～17):1，具有优异的抗菌性能以及光增强抗菌性能，且成本较低，用于细菌污染废水具有很高的去除率，具有较高的潜在工业应用价值。对于初始细菌浓度为0.5～1.0×10⁷CFU/mL的水，按照15mg/L硫化钼-四氧化三铁，处理葡萄球菌60分钟，细菌去除率可达90％以上。

本发明的硫化钼-四氧化三铁复合材料仅对革兰氏阳性菌具有优异的抑制效果，在一定的浓度范围内对革兰氏阳性菌的抑制具有良好的选择性。此外，该复合纳米材料还可以利用四氧化三铁的铁磁性进行回收，对环境友好不会引发细菌的耐药性等问题。

附图说明

图1为本发明实施例1的硫化钼-四氧化三铁复合物的红外图谱。

图2是本发明中硫化钼-四氧化三铁在不同工作浓度对大肠杆菌的抑菌率。

图3是本发明中硫化钼-四氧化三铁在不同工作浓度对葡萄球菌的抑菌率。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明，附图仅提供参考与说明用，非用以限制本发明。

实施例1

本发明的一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将六水三氯化铁与四水二氯化亚铁以Fe(III)：Fe(II)为2:1的摩尔比溶解在去离子水中，向溶液中鼓吹N₂进行脱氧；

⑵将溶液置于60℃的水浴中，保持N₂保护并大力搅拌5min，然后将NH₄OH溶液缓慢加入到溶液中直到pH为8，然后混合溶液并在60℃下老化；

⑶溶液中的沉淀物通过外部磁场力分离，上清液倒出。将沉淀用去离子水洗4次，然后在40℃下干燥过夜，即得到纳米四氧化三铁；

⑷称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑶的产物加60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑸对步骤⑷反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑹取步骤⑸的产物2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

⑺称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑻取-80℃下保存的大肠杆菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑼取不同量步骤⑹产物加入到2～8mL步骤⑻的产物中，从而将步骤⑹产物配制成15mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床上，以180rpm/min的转速处理2小时；

⑽将步骤⑼的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⑾计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝13.4％

实施例2

本发明的一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将六水三氯化铁与四水二氯化亚铁以Fe(III)：Fe(II)为2:1的摩尔比溶解在去离子水中，向溶液中鼓吹N₂进行脱氧；

⑵将溶液置于60℃的水浴中，保持N₂保护并大力搅拌5min，然后将NH₄OH溶液缓慢加入到溶液中直到pH为8，然后混合溶液并在60℃下老化；

⑶溶液中的沉淀物通过外部磁场力分离，上清液倒出。将沉淀用去离子水洗4次，然后在40℃下干燥过夜，即得到纳米四氧化三铁；

⑷称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑶的产物加60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑸对步骤⑷反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑹取步骤⑸的产物2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

⑺称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑻取-80℃下保存的大肠杆菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑼取不同量步骤⑹产物加入到2～8mL步骤⑻的产物中，从而将步骤⑹产物配制成30mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床上，以180rpm/min的转速处理2小时；

⑽将步骤⑼的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⑾计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝17.1％

实施例3

本发明的一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将六水三氯化铁与四水二氯化亚铁以Fe(III)：Fe(II)为2:1的摩尔比溶解在去离子水中，向溶液中鼓吹N₂进行脱氧；

⑵将溶液置于60℃的水浴中，保持N₂保护并大力搅拌5min，然后将NH₄OH溶液缓慢加入到溶液中直到pH为8，然后混合溶液并在60℃下老化；

⑶溶液中的沉淀物通过外部磁场力分离，上清液倒出。将沉淀用去离子水洗4次，然后在40℃下干燥过夜，即得到纳米四氧化三铁；

⑷称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑶的产物加60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑸对步骤⑷反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑹取步骤⑸的产物2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

⑺称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑻取-80℃下保存的大肠杆菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑼取不同量步骤⑹产物加入到2～8mL步骤⑻的产物中，从而将步骤⑹产物配制成60mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床上，以180rpm/min的转速处理2小时；

⑽将步骤⑼的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⑾计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝24.1％

实施例4

本发明的一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将六水三氯化铁与四水二氯化亚铁以Fe(III)：Fe(II)为2:1的摩尔比溶解在去离子水中，向溶液中鼓吹N₂进行脱氧；

⑵将溶液置于60℃的水浴中，保持N₂保护并大力搅拌5min，然后将NH₄OH溶液缓慢加入到溶液中直到pH为8，然后混合溶液并在60℃下老化；

⑶溶液中的沉淀物通过外部磁场力分离，上清液倒出。将沉淀用去离子水洗4次，然后在40℃下干燥过夜，即得到纳米四氧化三铁；

⑷称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑶的产物加60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑸对步骤⑷反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑹取步骤⑸的产物2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

⑺称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑻取-80℃下保存的葡萄球菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到葡萄球菌试验用菌；

⑼取不同量步骤⑹产物加入到2～8mL步骤⑻的产物中，从而将步骤⑹产物配制成15mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床上，以180rpm/min的转速处理1小时；

⑽将步骤⑼的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⑾计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝99.4％

实施例5

本发明的一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将六水三氯化铁与四水二氯化亚铁以Fe(III)：Fe(II)为2:1的摩尔比溶解在去离子水中，向溶液中鼓吹N₂进行脱氧；

⑵将溶液置于60℃的水浴中，保持N₂保护并大力搅拌5min，然后将NH₄OH溶液缓慢加入到溶液中直到pH为8，然后混合溶液并在60℃下老化；

⑶溶液中的沉淀物通过外部磁场力分离，上清液倒出。将沉淀用去离子水洗4次，然后在40℃下干燥过夜，即得到纳米四氧化三铁；

⑷称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑶的产物加60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑸对步骤⑷反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑹取步骤⑸的产物2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

⑺称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑻取-80℃下保存的葡萄球菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到葡萄球菌试验用菌；

⑼取不同量步骤⑹产物加入到2～8mL步骤⑻的产物中，从而将步骤⑹产物配制成30mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床上，以180rpm/min的转速处理1小时；

⑽将步骤⑼的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⑾计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝99.6％

实施例6

本发明的一种硫化钼-四氧化三铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将六水三氯化铁与四水二氯化亚铁以Fe(III)：Fe(II)为2:1的摩尔比溶解在去离子水中，向溶液中鼓吹N₂进行脱氧；

⑵将溶液置于60℃的水浴中，保持N₂保护并大力搅拌5min，然后将NH₄OH溶液缓慢加入到溶液中直到pH为8，然后混合溶液并在60℃下老化；

⑶溶液中的沉淀物通过外部磁场力分离，上清液倒出。将沉淀用去离子水洗4次，然后在40℃下干燥过夜，即得到纳米四氧化三铁；

⑷称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑶的产物加60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑸对步骤⑷反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑹取步骤⑸的产物2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

⑺称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑻取-80℃下保存的葡萄球菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到葡萄球菌试验用菌；

⑼取不同量步骤⑹产物加入到2～8mL步骤⑻的产物中，从而将步骤⑹产物配制成60mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床上，以180rpm/min的转速处理1小时；

⑽将步骤⑼的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⑾计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝99.9％

对实施例1～6的数据汇总如下表，并且根据实施例1～3的数据绘制成图2，根据实施例4～6的数据绘制成图3。

以上所述仅为本发明之较佳可行实施例而已，非因此局限本发明的专利保护范围。除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式，例如可以将各成分的质量和体积等比例放大若干倍。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围内。本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述。