抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法，包括：利用原子转移自由基聚合方法聚合磷脂酰胆碱，得到聚磷脂酰胆碱；聚磷脂酰胆碱利用叶酸分子进行修饰；利用开环聚合方法聚合O-苄基-L-丝氨酸羧酸酐，得到聚O-苄基-L-丝氨酸；聚O-苄基-L-丝氨酸通过腙键接枝阿霉素；将聚磷脂酰胆碱和聚O-苄基-L-丝氨酸通过点击化学方法进行键连，得到嵌段共聚物；将嵌段聚合物分别溶解于四氢呋喃后，移入透析袋中，用纯水透析，透析液用滤膜过滤；过滤后的溶液进行冷冻干燥，得到载药胶束。该药物载体胶束具有核壳双层结构，外层为亲水性聚磷脂酰胆碱，内层为药物分子包裹层。该材料具有以下优点：属于纳米微粒；可实现药物对癌细胞靶向传递以及癌细胞内pH敏感性释放；载药量大；稳定性好；其靶向功能可有效减小药物对正常组织器官毒副作用。
【专利说明】抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法，特别是涉及一种具有癌 症细胞靶向性的嵌段高分子材料药物载体胶束的制备方法。属于高分子化学及聚合物技术 领域。
【背景技术】
[0002] 癌症已成为危害人类健康的最主要疾病，治疗癌症的重要手段之一是药物治疗， 然而许多抗癌药物存在着难溶于水、稳定性差等缺陷。如喜树碱、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧 啶等都因溶解度差而难以被生物体很好地利用，解决其水溶性问题是这类药物制剂临床应 用的关健。此外，肿瘤治疗和诊断药物其作用大多是非选择性的，一些正常组织器官常有较 多分布，治疗剂量下对正常组织器官毒副作用大。故解决如何增溶难溶性抗癌药物以及增 加药物稳定性、提高对癌细胞的选择性迫在眉睫。因此，寻找一种可靠的靶向药物载体是解 决以上两个问题的关键。
[0003] 高分子胶束药物载体一般采用的都为线性高分子胶束。Bae课题组开展的研 究工作最为引人注目，其在所发表的研究论文中指出，以腙键将Dox键连到聚合物主链 上，并利用癌细胞微环境中PH呈弱酸性使腙键断裂，实现了 Dox的靶点释放。而且， Bae 于 2005 年在 Molecular BioSystems 杂志上发表的一篇论文（Bae Y, Jang W-D, Nishiyama N, Fukushima S, Kataoka K. #〇/ 2005; 1 (3): 242-250.),首次 同时将Fol和Dox分别键连到PEG以及PASP (聚天冬氨酸）上，从而兼具药物的靶向传递 以及靶点释放多功能性，流式细胞实验（FCM)表明细胞对聚合物胶束的摄入量较不含Fol 的聚合物胶束有明显增加。Gong Shaoqin课题组也从事了相似的研究。其以聚马来酸 -E-己内酯无规共聚物为内核，PEG为壳，制备了聚合物纳米胶束。以腙键连接Dox，并利用 Fol修饰了 PEG端基，制备了 pH敏感型靶向载药胶束，测试了细胞摄入量以及细胞毒性，证 明在酸性条件下Dox由于腙键的断裂而快速释放（Yang X，Grailer JJ, Pilla S, Steeber DA, Gong S. 收ate ^6? 2010; 21(3): 496-504.)。
[0004] 尽管线性聚合物胶束作为水难溶性药物的载体，在递药过程中已显示出巨大的优 势和潜力，但仍然存在胶束稳定性差、增溶效果不明显、药物释放率低的问题。目前聚合物 胶束的载药量通常只能达到5%左右，要获得更高的载药量很困难。研究发现，聚合物通过 化学键连接药物单体，可达到较高的载药量。而线性嵌段共聚物负载能力往往偏低，但如果 过多键连药物分子其胶束结构又不稳定。而星型聚合物可以克服这个不足。
[0005] 上海交通大学颜德岳（Liu J, Pang Y, Huang W, Huang X，Meng L, Zhu X，Zhou Y, Yan D. 2011; 12(5): 1567-1577.)合成了树枝状聚憐酸醋-聚 乳酸嵌段共聚物应用于药物载体研究，包裹Dox后对海拉细胞有明显抑制作用。另一具有 代表性的研究是中国科技大学刘世勇，利用功能化P-环糊精制备了用Fol和Dox修饰的聚 马来酸酐星型聚合物，同时键连了对磁共振效应敏感的钆元素，在小鼠实验中发现，聚合物 胶束在肝、肾部位的聚集有明显加强（Liu T, Li X，Qian Y, Hu X，Liu S. 2012; 33(8): 2521-2531. )〇
[0006] 但是，由于星型聚合物中聚合物结构较为复杂，所制备的药物载体出现生物相容 性差，药物包载能力下降，dendrimer表面药物分子水溶性降低等问题。此外，dendrimer结 构复杂，合成成本较高。这些问题都限制了星型聚合物纳米载药系统的应用。因此，不论是 性聚合物还是普通星型聚合物药物载体，并不能同时具备：药物靶向性，高药物负载能力， 胶束结构稳定，靶点释放的PH敏感性，生物相容性高这几项对聚合物药物载体系统的临床 应用起至关重要作用的性能。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是建立一种抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法，该药物载体微 胶囊具有以下优点：属于纳米微粒；可实现药物对癌细胞靶向传递以及癌细胞内PH敏感性 释放；载药量大；稳定性好；其靶向功能可有效减小药物对正常组织器官毒副作用。
[0008] 该胶束是一种具有亲水性和疏水性嵌段的星型嵌段聚合物；可以将阿霉素键连与 嵌段聚合物之上；高分子材料具有两条亲水链段，一条疏水链段：高分子材料其亲水段为 聚磷脂酰胆碱，通过叶酸进行修饰。疏水段为聚丝氨酸，通过腙键接枝阿霉素；高分子的胶 束结构具有核壳双层结构，外层为亲水性聚磷脂酰胆碱，内层为药物分子包裹层。
[0009] 所述的嵌段聚合物为以下结构式中的聚合物：
【权利要求】
1. 一种抗肿瘤祀向纳米载药微胶囊，其结构特征在于：所述的高分子材料是由两条亲 水性的聚磷脂酰胆碱链段和一条疏水性的聚0-苄基-L-丝氨酸链段偶联而成的AB2型共 聚物。
2. -种制备权利要求1所述的抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的方法是通过如下步骤进 行的： 1) 用于引发磷脂酰胆碱单体的叠氮小分子引发剂的合成； 2) 利用叶酸小分子进行NHS活化，制备叶酸-NHS分子； 3) 利用步骤1)所制备的叠氮小分子引发剂，引发磷酰胆碱小分子进行原子转移自由基 聚合，得到聚磷脂酰胆碱，同时利用叶酸-NHS分子修饰聚磷脂酰胆碱； 4) 双臂炔端基聚0-苄基-L-丝氨酸的合成； 5) 利用阿霉素分子对聚0-苄基-L-丝氨酸进行接枝，该反应是利用腙键进行连接； 6) 利用点击化学反应合成星型嵌段共聚物； 7) 用透析法制备聚合物纳米胶束。
3. 根据权利要求2所述的一种抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法，其特征在于上 述方法中步骤1)所合成叠氮小分子引发剂所使用的溶剂是丙酮、丁酮、二氧六环、乙腈中的 任一种。
4. 根据权利要求2所述的一种抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法，其特征还在于 上述方法中步骤4)所使用的聚合单体为0-苄基-L-丝氨酸羧酸酐。
5. 根据权利要求2所述的一种抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法，其特征还在于 上述方法中步骤6)所进行的聚合物偶合反应须采用Huisgen 1,3-偶极环加成反应。
6. 根据权利要求2所述的一种抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊的制备方法，其特征还在于 上述方法中需采用以下小分子引发剂： 1) 2-氯代叠氮乙氧基乙烷， 2. N-胺乙基3, 5-二乙炔氧基苯胺。
7. 根据权利要求2所述的抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊，其特征还在于：该高分子材料 是由叶酸修饰的聚磷脂酰胆碱链段和阿霉素接枝的聚丝氨酸通过偶联所形成的星型嵌段 共聚物。
8. 根据权利要求2所述的抗肿瘤靶向纳米载药微胶囊，其特征还在于：所述的高分子 胶束具有核壳双层结构，外层为亲水性聚磷脂酰胆碱，内层为药物分子包裹层。
【文档编号】B82Y5/00GK104414999SQ201310361675
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年8月19日 优先权日:2013年8月19日
【发明者】不公告发明人 申请人:成都市绿科华通科技有限公司