专利名称：一种测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒的制作方法
技术领域：
一种测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒
技术领域：
本实用新型涉及一种试剂盒，特别是适用于医药检测实验室进行 乳果糖、甘露醇和乳糖含量测定的试剂盒。
背景技术：
甘露醇(Mannitol)和乳果糖(Lactulose)吸收试验被证明能反映 肠道屏障功能的有效方法，在临床上可以用于监测由于肝硬化、肠炎、 术后、烧伤以及消化不良、吸收不良等疾病引起的肠道粘膜通透性的 变化，因为其简单、安全、可靠在临床上广为应用。
目前报道的有关甘露醇和乳果糖的检测方法，最为常用的是高效 液相色谱(HPLC)法，由于没有紫外吸收基团，检测这两种糖类只能 用示差折光、电化学、蒸发光散射等检测器，具有快速和自动化检测 的优点，但是灵敏度和重复性比较差。另外还有气相色谱法(GC)、 LC-MS法测定尿中甘露醇和乳果糖的报道,GC法的样品需要衍生化， 处理过程比较费时，应用范围受到了限制；而LC-MS法则不受紫外吸 收和样品气化等条件的限制，与HPLC和GC相比，在检测灵敏度具 有优势。
液相色谱-质谱联用(LC-MS)具有专一性强、灵敏度高的优点，在 体内药物分析、新生儿遗传性代谢疾病筛选和临床生化等领域方面均 开始有成熟的应用，是近年来获得迅速发展的分析测试技术，已成为 临床科研的尖端武器。
发明内容
本实用新型所要解决的技术问题是克服上述现有技术中所存在的 缺陷，提供一种测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒。
本实用新型为了实现其目的，采用的下列技术方案
本实用新型所述的试剂盒包括盒体以及盒盖。盒体中置有一可以 固定试管的固定物，该固定物上至少置有二个可以搁置试管并加以固 定的孔，该孔中置有装有试剂的试管。
在本实用新型所述的试剂盒中装有试剂的试管的种类包括样品 管、对照品管、质控品管、内标溶液管、稀释剂管、蛋白沉淀剂管。 本实用新型将盒内的试剂管和样品管配套使用，采用液相色谱质谱联 用仪进行定量测定样品中乳果糖、甘露醇和乳糖的含量。提供了一种 操作简便、专一灵敏的，并与测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的定量 检测方法配套的试剂盒，以改进现有甘露醇和乳果糖浓度检测方法， 能满足大规模临床研究的需要。
附图是为本实用新型的结构示意图。
图中各序号分别表示为
l一盒体 2 —固定物 3 —样品管
4一对照品管 5 —质控品管 6—内标溶液管
7 —稀释剂管 8 —蛋白沉淀剂管 9一试管
IO —孔 U—盒盖
具体实施方式
以下结合实施例以及附图对本实用新型作进一步的描述。 参照附图，本实用新型包括盒体1以及盒盖11，这些盒体1以及 盒盖11可以采用塑料制作，也可以采用硬质纸张材料等构成。
本实用新型在盒体1中置有一可以固定试管9的固定物2，该固定
物2可用与盒体1相同的材料构成，如塑料或者是硬质纸张。在该固 定物2上至少置有二个可以搁置试管9并加以固定的孔10，本实施例
置有六个孔，每个孔10中都置有灌装试剂的试管9。
装有试剂的试管9包括样品管3、对照品管4、质控品管5、内 标溶液管6、稀释剂管7、蛋白沉淀剂管8。
其中，样品管3为1.5ml聚乙烯塑料管；对照品管4中置有浓度为 0.1—20吗/mL的甘露醇、浓度为0.1— 20 pg/mL的乳果糖，浓度为 0.2—40pg/mL乳糖的水溶液或冻干品；质控品管5中置有浓度为0.1 —16jig/mL的甘露醇、浓度为0.1 —16ng/mL的乳果糖、浓度为0.2— 32pg/mL的乳糖水溶液或冻干品；内标溶液管6中置有浓度为15-150 pg/mL的[UL^C,2]单水乳糖水溶液或冻千品；稀释剂管7中置有二次 蒸馏水；蛋白沉淀剂管8中置有乙腈溶液。
在本实施例中(图中未画出)，对照品管4中的试剂制作可将经二 次蒸馏的水分别加入甘露醇、乳果糖、乳糖化学品，配制成甘露醇、 乳果糖、乳糖浓度各为0.1吗/mL溶液一管；甘露醇、乳果糖、乳糖浓 度各为2pg/niL溶液-管；甘露醇、乳果糖、乳糖浓度各为40pg/mL 溶液一管。
质控品管5中的试剂制作可将经二次蒸馏的水分别加入甘露醇、 乳果糖、乳糖化学品，配制成甘露醇、乳果糖、乳糖浓度各为(U2fig/mL 溶液一管；甘露醇、乳果糖、乳糖浓度各为32ng/mL的溶液--管。
内标溶液管6中的试剂是浓度为15pg/mL的[UL-"Q2]单水乳糖水 溶液。
稀释剂管7中为二次蒸馏水。蛋白沉淀剂管8中为乙腈溶液。
上述试剂管和1.5ml聚乙烯塑料管3 —起装在一个由塑料或硬纸等 材料做成的盒体1中。组装好的检测盒可以放置在4-3(TC保存。
本实用新型试剂盒使用时须打开各号试剂瓶的密封瓶塞，并摇匀。 按样品处理方法处理后，即可采用液相色谱质谱联用仪进行测定，其 具体方法如下
1、 标准曲线制备用对照品绘制标准曲线，质控品进行验证；
2、 样品采集患者一次空腹口服15ml乳果糖口服液(杜秘克， 10g)和5ml甘露醇(20%)后收集6小时内样品，取lml;
3、 样品预处理取分离后的样品，加入内标溶液旋涡振荡，加入 蛋白沉淀剂，旋涡振荡后高速离心，取上清液进样；
4、 IX-MS观I淀
质谱条件电喷雾离子源，负离子扫描；喷雾口位置3:7;雾化 气流速10L/min，气帘气流速12L/min，碰撞气流速12L/min，离 子源电压-4500V,离子源温度30(TC; MRM扫描分析，离子选择 通道m/z (质荷比)分别为甘露醇181.1/88.9，乳果糖和乳糖 341.3/160.9，内标353.4/166.9。 Ql、 Q3设置为中分辨率；
液相条件分析柱为氨基柱(100x2.1mm， 5pm);流动相为乙腈-水(80:20， v/v)。等度洗脱，流速为0.3 mL/min，进样体积为10 ^L;
5、 按内标法以峰面积或峰高计算出样品中乳果糖、甘露醇和乳糖 浓度。
采用本实用新型试剂盒测定甘露醇、乳果糖和乳糖结果准确、操 作简便，能满足大规模临床研究的需要。
权利要求1、一种测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒，包括盒体以及盒盖，其特征在于盒体中置有一可以固定试管的固定物，该固定物上至少置有二个可以搁置试管并加以固定的孔，该孔中置有装有试剂的试管。
2、 根据权利要求1所述的测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒，其特征在于装有试剂的试管包括样品管、对照品管、质控 品管、内标溶液管、稀释剂管、蛋白沉淀剂管。
3、 根据权利要求2所述的测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒，其特征在于样品管为1.5ml聚乙烯塑料管;.对照品管中置有浓度为0.1—20 ng/mL的甘露醇、浓度为O.l— 20 [ig/mL的乳果糖， 浓度为0.2—4(Vg/mL乳糖的水溶液或冻干品；质控品管中置有浓度 为0.1—16 pg/mL的甘露醇、浓度为0.1—16 (ig/mL的乳果糖、浓度 为0.2--32吗/mL的乳糖水溶液或冻干品；内标溶液管中置有浓度为 15-150 pg/mL的[UL^Ci2]单水乳糖水溶液或冻干品；稀释剂管中置 有二次蒸馏水；蛋白沉淀剂管中置有乙腈溶液。
4、 根据权利要求1所述的测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒，其特征在于所述的盒体以及盒盖采用塑料或者硬质纸张材料 构成。
专利摘要一种测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒，包括盒体以及盒盖，其特征在于盒体中置有一可以固定试管的固定物，该固定物上至少置有二个可以搁置试管并加以固定的孔，该孔中置有装有试剂的试管。本实用新型将盒内的试剂管和样品管配套使用，采用液相色谱质谱联用仪进行定量测定样品中乳果糖、甘露醇和乳糖的含量，提供了一种操作简便、专一灵敏的，并与测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的定量检测方法配套的试剂盒，以改进现有甘露醇和乳果糖浓度检测方法，能满足大规模临床研究的需要。
文档编号G01N30/00GK201072414SQ20062016251
公开日2008年6月11日 申请日期2006年12月30日 优先权日2006年12月30日
发明者周菊珍, 莉 李, 李华芝, 林益华, 胡英伟, 捷 蔡 申请人:上海特敏生物医药科技有限公司