方法

专利名称：：方法方法发明领域本发明一般涉及细胞培养-例如原代细胞、细胞系、多能细胞、全能细胞和干细胞培养。发明背景近年来，细胞培养已成为生命科学中的核心技术。细胞培养在'BasicCellCulture'OxfordUniversityPress(2002)Ed.J.M.Davis;和'AnimalCellCulture'OxfordUniversityPress(2000)Ed.JohnR.W.Masters中得到描述；所述参考文献整体引入本文作为参考。细胞培养提供了用于研究细胞进程的基础，所述细胞进程例如细胞存活力、表型、基因型、增殖和分化，以及生物分子、中间物和产物形成。它还已经提供了研究这些进程调节的方法，从遗传水平-无论是在分离还是完整转基因动物中-下至个别蛋白质分子水平。尽管它对当前生物学状态有着巨大贡献，但在许多方面细胞培养保持发展纪律，虽然不寻常地令人兴奋的科学最终提供遗传治疗和组织工程的可能性。细胞培养的重要目标是能够体外培养广泛多样的细胞。可以在培养中生长的不同细胞类型列表是广泛的(参见美国典型培养物保藏中心http:〃www.atcc.org;欧洲纟田月包i咅养物j呆藏中心,http:〃www.ecacc.org.uk;德意志微生物保藏中心，http:〃www.dsmz.de),包括大多数细胞类型的代表且不断增加，因为越来越多的培养条件得到发现。尽管本领域中有稳定进展，但确定关于新细胞类型的合适培养条件的方法仍是完全根据经验的生长条件几乎总是通过试验与误差来开发。起始点的选择将通常基于其他人对于类似细胞先前使用的那种，或甚至是目前在实验室中对于不同细胞使用的那种。许多次这些将筒单地是完全不适当的，且试验与误差的过程必须重新开始。即使当新培养条件是成功的时，值得记住的是先前方案的适应将已对实验引入历史偏差。例如，许多早期组织培养实验广泛使用成纤维细胞，且迄今为止最标准的细胞培养条件促进来源于中胚层的细胞(成纤维细胞、内皮、成肌细胞)生长。基于这些条件开发适合于上皮和其他细胞类型的选择性生长培养基是个挑战。对于这些细胞类型中的一些，现在已知的是血清-用于中胚层细胞的许多培养基的正常组分-实际上抑制生长。本文描述的本发明的一个方面是用于开发合适培养条件的方法，所述培养条件允许存活力、增殖或生长，和保留特定细胞类型的表型。细胞培养中仍遇到的某些常见问题是原代细胞系的有限寿命、细胞系传代的特性改变、及其伴随感兴趣的细胞特性丧失的转化。这些结果严重显著了培养细胞用于在实验或测定法中使用的效用，例如下文描述的基于细胞的测定法。原代细胞，即从组织中新分离的细胞，到目前为止提供了最精确的细胞培养模型，因为它们以广泛类似其起源组织的方式表现。值得注意的是，培养原代细胞的可靠方法仍未被开发，且因此这些细胞在体外显示有限的寿命。这呈现严重的技术限制，例如当企图扩大原代培养时，或当企图进行较长期实验时。与原代培养物使用相关的进一步问题是，因为它们需要不断的新分离，所以难以特别是从人中获得原始材料，且也难以获得一致表现的细胞系。本发明的第3个方面因此是培养原代细胞以获得具有延长寿命的存活培养物的方法。如果原代物培养在体外维持延长期间，那么它们通常经历其中大多数细胞死亡的危机，然而存活细胞活得更长，且可以进4亍无限期地培养。当在完整动物组织中发现时，大多数这些连续细胞系几乎总是细胞的不良代表。关于这点的一个原因存在于下述事实允许细胞成为永生的过程也对细胞特性具有影响。例如，大多数建立的细胞培养已停止表达组织特异性基因，且改为只表达在细胞培养物中连续生长所需的管家基因-因此大多数此类细胞系更像彼此而不像它们最初来源的组织。例如，大多数肝细胞系已停止表达药物代谢酶，所述药物代谢酶将通常使得它们成为测试药物毒性的有利工具。本文描述的本发明的一个进一步的方面是培养细胞的方法，从而使得它们提供更精确的组织模型。这依次将改善基于细j包的实验和测定法的可靠性和预测力。用于培养细胞的改良技术以及用于开发和实现此类技术调节细胞进程的方法呈现于我们共同未决的国际申请WO2004/031369中，所述细胞进程例如生长、分化、代谢活性和表型表达。当处理大量细胞单位时，它们的标识和/或细胞培养史(例如，任何一个群体或单位可能已暴露于的一系列培养条件的时间排列和确切性质)可能变得混乱。WO2004/031369描述了用于测定细l包单位的标识和/或细月包培养史的改良方法。在一个方面描述了细胞单位的使用，所述细胞单位可以在细胞生物学实验中方便地进行处理，使得例如能够分裂和合并所述单位。本发明寻求提供克服现有技术的某些限制的进一步改进。发明概述在第一个方面，提供了用于测定用超过一种标记(例如标记类型)进行标记的细胞单位的细胞培养史的方法，所述方法包括下述步骤(a)测量用于标记细胞单位的每种标记的一种或多种参数；(b)鉴定细i包单位中的每种标记；和(c)使每种标记的标识与细胞单位的标识/或细胞单位已暴露的特定细胞培养条件关联。在一个进一步的方面，提供了计算机程序产品，所述计算机程序产品包括用于控制计算机执行本文所述方法的计算机程序。在一个进一步的方面，提供了用于测定细胞单位的细胞培养史的装置，所述装置包含依照本文所述方法执行数据处理操作的可操作数据处理逻辑。在一个进一步的方面，提供了包含微载体和带电(例如带负电荷的)标记的复合物。在一个进一步的方面，提供了包含微载体和杆状标记的复合物。改进包含例如特定标记类型和特定细胞单位类型的改善标记，来自细胞单位的标记的改善分离，和标记的改善分析。在一个进一步的方面，提供了用于分离包含微载体和标记的复合物的方法，所述方法包括使复合物与蛋白酶接触的步骤，其中所述微载体包含蛋白质、由蛋白质组成、或基本上由蛋白质组成。在一个进一步的方面，提供了用于分离包含微载体和标记的复合物的方法，所述方法包括使所述复合物与酸接触的步骤。得标记可以使用本文所述方法进行分析。此外，这些方法不会导致标记被此类处理破坏。此外进一步地，这些方法解决了标记以严重地使其分析复杂化的方式获得的问题-例如标记变得在大表面积上分散和/或漂浮在较稠密的水溶液上。在一个进一步的方面，提供了用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，所述方法包括本文所述复合物的使用。在一个进一步的方面，提供了用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，所述方法包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使第2个库再细分，以产生另外一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d);和(f)评估培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与本文所述复合物附着或结合的一种或多种细胞。在一个进一步的方面，提供了用于使细胞暴露于各种细胞培养条件的方法，所述方法包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使第2个库再细分，以产生另外一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；和(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d)，其中每个细胞单位包含与本文所述复合物附着或结合的一种或多种细胞。在一个进一步的方面，提供了用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，所述方法包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使第2个库再细分，以产生另外一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d);和(f)评估培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与本文所述复合物附着或结合的一种或多种细胞。在一个进一步的方面，提供了用于鉴定影响细胞进程的基因的方法，所述方法包括下述步骤a)依照本文所述方法测定一种或多种培养条件对细胞单位的影响；b)分析当暴露于所述培养条件时所述细胞单位中的基因表达；和c)鉴定在所需培养条件下差异表达的基因。在一个进一步的方面，提供了用于产生编码影响细胞进程的基因产物的核酸的方法，所述方法包括依照本文所述方法鉴定基因，和通过核15酸合成或生物复制至少产生所述基因的编码区。在一个进一步的方面，提供了用于诱导细胞进程的方法，所述方法包括下述步骤(a)依照本文所述方法鉴定与细胞进程相关而差异表达的一种或多种基因；和(b)调节所述一种或多种基因在细胞中的表达。在一个进一步的方面，提供了用于鉴定细胞的细胞进程状态的方法，所述方法包括下述步骤(a)依照本文所述方法鉴定与细胞进程相关而差异表达的一种或多种基因；和(b)检测所述一种或多种基因在细胞中的表达的调节，从而测定所述细胞的细胞进程状态。在一个进一步的方面，提供了用于诱导细胞进程的方法，所述方法包括下述步骤(a)依照本文所述方法测定一种或多种培养条件对细胞单位的影响；(b)使细胞暴露于诱导细胞进程的培养条件；和(c)分离所需细胞。在一个进一步的方面，提供了用于鉴定能够诱导细胞进程的试剂的方法，所述方法包括下述步骤(a)依照本文所述方法测定一种或多种试剂对细胞单位的影响；和(b)鉴定诱导细胞单位中的细胞进程的那些试剂。在一个进一步的方面，提供了用于制备能够诱导细胞进程的试剂的方法，所述方法包括下述步骤(a)依照本文所述方法测定一种或多种试剂对细胞单位的影响；(b)鉴定诱导细胞单位中的所需细胞进程的那些试剂；和(c)合成或分离所述试剂。在一个进一步的方面，提供了用于体外培养干细胞或来源于干细胞的细胞的方法，所述方法包括下述步骤a)温育干细胞培养物；和b)将培养物分成2个或更多干细胞群体，且在2个或更多不同组的培养条件下培养所述干细胞群体，其中细胞以细胞单位进行培养，每个细胞单位包含与本文所述复合物附着或结合的一种或多种细胞。在一个进一步的方面，提供了用于培养干细胞的方法，所述方法包括培养与本文所述复合物附着的所述干细胞。在一个进一步的方面，提供了用于在体外从干细胞获得分化细胞的方法，所述方法包括下述步骤(a)在培养基中培养与本文所述复合物附着的干细胞；(b)将复合物从一种培养基转移到另一种中；(c)需要时任选重复步骤(b);和(d)获得与复合物附着的分化细胞。在一个进一步的方面，提供了体外培养多能干细胞的方法，所述方法包括下述步骤(a)在本文所述复合物上接种所述细胞；和(b)在与复合物附着的同时增殖细胞。在一个进一步的方面，提供了用于体外或体外培养细胞的方法，所述方法包括培养与本文所述复合物附着的所述细胞。在一个进一步的方面，提供了用于鉴定从细胞单位获得或可获得的标记的方法，所述方法包括下述步骤(a)分离细胞单位和标记；(b)使用显微技术获得标记的一个或多个图像；和(c)分析图像以确定标记的一个或多个特征。在一个进一步的方面，提供了本文所述复合物用于测定多种培养条件对细胞的影响的用途。在一个进一步的方面，提供了杆状标记-例如纳米丝(nanowire)用于标记微载体的用途。在一个进一步的方面，提供了杆状标记-例如纳米丝用于测定多种培养条件对细胞的影响的用途。在一个进一步的方面，参考附图提供了基本上如本文所述的方法、复合物、计算机程序、装置或用途。实施方案在某些实施方案中，方法是自动化方法。在某些实施方案中，细胞单位与微载体结合或附着。在某些实施方案中，微载体是多孔或固体微载体。在某些实施方案中，多孔微载体选自Cytopore微载体(例如Cytopore1微载体或Cytopore2微载体)、Cultispher微载体、Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体、Informatrix微载体、Microsphere微载体、Siran微载体和MicroporousMC微载体。在某些实施方案中，固体微载体选自Cytodex微载体(例如Cytodex1、Cytodex2或Cytodex3微载体)、Biosilon微载体、Bioglass微载体、FACTIII微载体或DE52/53微载体。在某些实施方案中，参数是标记尺寸和/或标记的光学特性。在某些实施方案中，光学特性选自光反射率、颜色、荧光发射波长和荧光发射强度。在某些实施方案中，测量目的—见野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像。在某些实施方案中，使用显微术测量目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像。在某些实施方案中，显微术方法选自明视野显微术、相差显微术、斜射照明显微术、暗视野显微术、微分干涉相差显微术、反射相差显微术、varel相差显微术、偏光显微术、干涉显微术和荧光显微术。在某些实施方案中，描绘关于目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像的轮廓。在某些实施方案中，测量目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个荧光图像。在某些实施方案中，将关于一个或多个图像的轮廓加载到一个或多个荧光图像上。在某些实施方案中，对于用于标记标签的每种荧光团测量目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像。在某些实施方案中，细胞单位中的每种标记通过读出一个或多个4仑廓内的标记的一种或多种参数进行鉴定。在某些实施方案中，标记的一种或多种参数是标记的面积和/或光密度。在某些实施方案中，将标记的一种或多种参数输入空白表格软件(spreadsheet)。在某些实施方案中，荧光团选自发出蓝色、绿色、近红或远红荧光的荧光团。在某些实施方案中，当使用2种或更多荧光团时，荧光团不会互相捽灭。在某些实施方案中，尺寸选自至少3种不同尺寸-例如4、5、6或7种不同尺寸。在某些实施方案中，尺寸选自约1.9^im、约4.4ium、约5.4pm、约5.8|um、约7.4ium、约9.7|iim禾口约9.8>im。在某些实施方案中，荧光团选自UV2、StarfireRed和TRITC。在某些实施方案中，荧光团的量选自5种不同量。在某些实施方案中，这些量由范围(例如荧光强度范围)指出。在某些实施方案中，每种不同量在亮度方面产生约5-10倍的差异。在某些实施方案中，存在至少2种不同的参数。在某些实施方案中，存在至少5个不同整数。在某些实施方案中，微载体是多孔微载体。在某些实施方案中，微载体具有净电荷。在某些实施方案中，微载体包含下述物质、由下述物质组成、或基本上由下述物质组成蛋白质、纤维素、聚乙烯、聚苯乙烯、玻璃、胶原、胶原-gylcose-氨基聚糖和/或明胶。在某些实施方案中，标记具有电荷。在某些实施方案中，标记具有净电荷。在某些实施方案中，标记具有负电荷。在某些实施方案中，带电标记是球体。在某些实施方案中，球体是微球体。在某些实施方案中，微球体直径为约9iliM或更小。在某些实施方案中，微球体是羧酸盐/酯修饰的(CML)微球体。在某些实施方案中，标记包含聚苯乙烯、由聚苯乙烯组成、或基本上由聚苯乙烯组成。在某些实施方案中，复合物(例如微载体)与细胞单位附着或结合。在某些实施方案中，至少一种抗体与细胞单位结合。在某些实施方案中，杆状标记是纳米丝。在某些实施方案中，纳米丝是铝纳米丝。在某些实施方案中，纳米丝用银和/或金包被。在某些实施方案中，纳米丝直径为约1iiM或更小。在某些实施方案中，纳米丝长度为约10pM或更小。在某些实施方案中，微载体是多孔微载体。在某些实施方案中，多孔微载体是电中性的微载体。在某些实施方案中，至少一种抗体与细胞单位结合。在某些实施方案中，微载体包含明胶、由明胶组成、或基本上由明胶组成。在某些实施方案中，微载体是Cultispher微载体。在某些实施方案中，微载体选自Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体。在某些实施方案中，蛋白酶选自蛋白酶K、胰蛋白酶(typsin)、嗜热菌蛋白酶和胱天蛋白酶。在某些实施方案中，蛋白酶K以约0.5U/ml或更少的量使用。在某些实施方案中，复合物与蛋白酶K接触至少20-60分钟。在某些实施方案中，复合物与体积为约5pl或更少的蛋白酶接触。在某些实施方案中，微载体包含纤维素、由纤维素组成、或基本上由纤维素组成。在某些实施方案中，微载体是Cytopore微载体。在某些实施方案中，微载体是Cytopore2微载体。在某些实施方案中，标记是球体。在某些实施方案中，酸选自盐酸、石危酸和次氯酸钠。在某些实施方案中，酸是37%盐酸(约12M)。在某些实施方案中，酸是浓缩硫酸。在某些实施方案中，复合物与体积为约5pl或更少的酸接触。在某些实施方案中，复合物在酸的存在下进行加热。在某些实施方案中，细胞以细胞单位进行培养，每个细胞单位包含一种或多种细月包。在某些实施方案中，细胞单位是单细胞。在某些实施方案中，培养条件是细胞暴露的培养基。在某些实施方案中，培养基包含影响细胞进程的一种或多种特定试剂。在某些实施方案中，细胞培养条件包含在一种或多种特定温度下培养。在某些实施方案中，细胞培养条件包含在一种或多种特定基质上培养。在某些实施方案中，所需培养条件影响细胞进程。在某些实施方案中，细胞中的基因表达的调节包含将所述一种或多种基因转染到细胞内。在某些实施方案中，基因表达的调节包含基因产物的外源性施用。在某些实施方案中，所述一种或多种基因编码标志物。在某些实施方案中，所述标志物可以通过免疫测定法进行4全测。在某些实施方案中，细胞进程是细胞增殖或分化。在某些实施方案中，细胞单位是单细胞。在某些实施方案中，对所述干细胞实施培养条件的至少一种变化。在某些实施方案中，培养条件的所述变化包含培养基的变化。在某些实施方案中，分化细胞通过从复合物酶促或化学脱离而进行分离。在某些实施方案中，分化细胞通过消化复合物进行分离。附图描述图1显示在光学显微术下用黑色、红色和蓝色标记观看的、2种不同尺寸(5.4pm和7.6pm)的彩色Duke微珠样品。图2显示在洗涤期间在70)um滤器上捕获的Cultispher-G微载体，所述洗涤是为了去除能够通过的未结合的微珠(尺寸范围4.4|um-9.8|um)。图3显示用2U/ml蛋白酶K消化Cultispher-G微载体(如指出的，图显示经过15分钟的时间段的相同微载体)图4显示用37%HC1(约12M)消化Cytopore2微载体(如指出的，图显示经过l小时30分钟的时间段的相同微载体)。图5显示用于显孩i《竟分析的Imagepro标记分冲斤流程图，以鉴定孩i珠的一个或多个区域和/或光密度值。使用各种曝光和滤光器获取图像UV2滤光器；Ex340-380nm;Em435-485nm;TRITC滤光器Ex540/25腿；Em605/55腿；StarfireRed:Ex620/60應；Em700/75誦。图6显示微珠(标记)具有2种不同尺寸，各自具有4种荧光团A土荧光团B水平的标记ID流程图。荧光团A是UV2且荧光团B是TRITC。Fl-使用UV2通道关于标记的平均光密度测量值；F2J吏用StarfireRed通道关于标记的平均光密度测量值；F3-使用TRITC通道关于标记的平均光密度测量值；fl-关于标记1的荧光下限；f2-关于标记l的焚光上限；f3-关于所有标记的TRITC荧光阈值下限；f4-关于标记2的荧光下限；f5-关于标记2等的荧光上限；面积-面积测量值；al-关于尺寸1标记的面积下限；a2-关于尺寸1标记的面积上限；a3-关于尺寸2标记的面积下限；a4-关于尺寸2等标记的面积上限；丫=是；N二否。更详细地，方框(a)显示第1种参数的下限小于第1种参数的平均测量值，且第1种参数的上限大于第1种参数的平均测量值；方框(b)显示第2种参数的下限小于第2种参数的平均测量值，且第2种参数的上限大于第2种参数的平均测量值；方框(c)、(f)、(i)、(k)、(o)、(q)、(t)和(v)各自显示第3种参数的平均测量值大于第3种参数的下限；方框(e)显示如果来自方框(b)的结果是阴性的，那么测量参数的另一整数的上、下和平均测量值。特别地，方框(e)显示参数整数的面积下限小于参数的平均测量值，且参数整数的面积上限大于参数的平均测量值。这对于方框(h)、(_j)、(n)、(p)、(s)和(u)中的参数的其它整数进行重复。图7显示参数的一个或多个整数进行连续检查的备选流程图，从而使得来自图6的最终'否，结论将继续询问另一参数的那些整数。荧光团A是StarfireRed，且焚光团B是TRITC。例如，F1和F2可以进行连续检查，从而使得来自图6的最终'否，结论将继续询问关于相关尺寸标记的StarfireRed值。Fl-关于UV2通道的平均密度测量值；F2-关于StarfireRed通道的平均密度测量值；F3-关于TRITC通道的平均密度测量值；fl8-关于标记9的荧光下限；fl9-关于标记9的荧光上限；fi-关于所有标记1的TRITC荧光阈值下限；Y^是；N二否。图8显示用小鼠ES细胞接种和用试剂盒染色的大孔CultiSpher-G明胶微载体(PercellBiolyticaAB),其显示碱性磷酸酶活性，即一种多能性标记。图9显示通过组合细胞培养经由表1中显示的矩阵处理、和在D13与巨噬细胞测定试剂DQ-卵白蛋白(MolecularProbes)温育的140,000个微载体。顶端左侧小图显示微载体的相差图像。顶端右侧图像显示使用FITC滤光器组的相同视野，由此巨噬细胞可容易地区分为用绿色荧光在内部标记的大的圆形细胞。底部左侧图像显示使用FITC滤光器组的相同视野，显示与微载体相关的UV2加载的标记。图10与图9相同^旦关于不同碎见野。图11表示的图表显示在具有巨噬细胞的微载体a)C5、b)A22和c)E6上发现的所有标记的数目和标识。在b)和c)中用星号标记的条指示随后进行测定导致可重复的巨噬细胞分化的条件。图12是具有用DQ-卵白蛋白(MolecularProbes)染色的大量巨"藍细胞的微载体例子。图13是委托BangsLaboratories(Fishers,IN)制备的50种微球体标记的图解表示。微球体具有1.87fim至9.77|Lim的尺寸，且用荧光团StarfireRed或备选地UV2的5种可区分强度进行染色。图14是根据标记尺寸和荧光强度在给定曝光设定下分析的StarfireRed染色的微球体标记的校准样品。相似校准样品用于测定参数(由椭圆形指示)用于分类与微载体结合的标记。图15显示使用430nm处的照明和63X物镜获得的，在实-验中使用的杆状颗粒的质量控制图像。左侧图像101010;右侧图像100001(其中l=Ag和0=Au)图16是使用明^L野照明和20X物镜获得的，用中性红活体染料染色的标记细胞单位图像，以显示活细胞和显示相关杆状颗粒(用箭头指出)。图17是使用明视野照明和20X物镜获得的，标记的细胞单位进行蛋白酶K消化后释放的杆状颗粒图像。图18的图Y象显示使用CFP滤光器组(Ex.436/10;Em.465/30)用lOOx油浸物镜获得的，标记的细胞单位进行蛋白酶K消化后释^:的2种不同颗粒的区别。左侧颗粒是100001和右侧颗粒是101010。发明详述定义培养条件如本文使用的，术语"培养条件，，指细胞置于或暴露于其以便促进所述细胞生长或分化的环境。因此，该术语指可以影响细胞生长和/或分化的培养基、温度、大气条件、基质、搅拌条件等。更具体而言，该术语指可以掺入培养基内和可以影响细胞生长和/或分4匕的特定试剂。细胞如本文使用的，细胞定义为能够独立起作用的最小生物结构单位，或单细胞生物，由一个或多个细胞核、细胞质和各种细胞器组成，全部由半透性细胞膜或细胞壁包围。细胞可以是原核的、真核的或古细菌的。例如，细胞可以是真核细胞。哺乳动物细胞是优选的，特別是人细胞。细胞可以是天然或修饰的，例如通过遗传操作或培养传代，以达到所需特性。干细胞在下文更详细地进行定义，且是能够产生超过一种分化细胞类型的全能、多向或多能细胞。干细胞可以在体外进行分化以产生分化细胞，所述分化细胞自身可以是多能的，或可以是最终分化的。体外分化的细胞是已通过将干细胞暴露于促进细胞分化的一种或多种试剂而人工制备的细胞。细胞进程细胞进程是发生或观察到或可以归因于细胞的，细胞内或细胞外的任何特性、功能、过程、事件、原因或效应。细胞进程的例子包括但不限于，存活力、衰老、死亡、多能性、形态学、信号传导、结合、识别、分子产生或破坏(降解)、突变、蛋白质折叠、转录、翻译、催化、突触传递、小泡运输、细胞器功能、细胞周期、代谢、增殖、分裂、分化、表型、基因型、基因表达或这些过程的控制。细胞单位细胞群体，这可以是一个细胞的群体。无需显著分离细胞单位自身即可对细胞单位库进行分选、细分和处理，从而使得细胞单位作为细胞集落表现，并且细胞单位中的每种细胞暴露于相同的培养条件。对于某些实施方案，细胞单位可以包含与细胞群体附着的微载体或珠。细胞类型的潜能的细胞。因此，任何所需细胞可以通过某些方法来源于全能细胞。多能多能细胞是可以分化成超过一种但并非所有细胞类型的细胞。标记在一个方面，如本文4吏用的，术语"标记"指用于鉴定细月包单位和/或测定细胞单位已暴露的培养条件、或一系列培养条件的任何标记。在另一个方面，术语"标记"指添加给细胞单位的任何标记，其作为特异性标记那种细胞单位的手段，从而促进细胞单位的鉴定和/或细胞单位已暴露的培养条件和/或一系列培养条件的测定。适当地，标记存在于许多相关但不同的变体中，所述变体可如本文更详细地所述容易地区分。标记一般与微载体-例如Cultispher-G微载体或Cultispher2微载体形成复合物的部分。对于某些实施方案，标记是球体或珠-例如微球体或微珠。对于某些实施方案，标记是杆状颗粒-例如纳米丝。如本文提及的，术语"标记(tag)"与术语"标记(label)"是同义的。暴露于培养条件当置于与培养基接触，或在影响一种或多种细胞进程的条件下生长时，所述细胞进程例如细胞生长、分化、或代谢状态，细胞暴露于培养条件。因此，如果培养条件包含在培养基中培养细胞，那么将细胞置于培养基中足够其具有效应的时间段。类似地，如果条件是温度条件，那么细胞在所需温度下进行培养。合并一种或多种细胞单位群体的合并涉及使群体混合，以产生单一群体或包含超过一种背景的细胞单位的库，即，已暴露于超过一种的不同组的培养条件。库可以进一步随机或非随机地细分成群体；此类群体自身不是用于本目的的"库"，但自身可以通过组合，例如暴露于不同组的培养条件后进行合并。增殖细胞生长和细胞增殖在本文中可互换地用于指细胞数目增加而不分化成不同细胞类型或谱系。换言之，该术语指示存活细胞数目的增加。在某些实施方案中，增殖不伴随表型或基因型中可评估的变化。分化细胞分化是由细胞类型发展不同的细胞类型。例如，双潜能、多能或全能细胞可以分化成神经细胞。分化可以伴随增殖，或其可以是独立的。术语'分化，一般指由发育较不确定的细胞类型例如神经元或淋巴细胞获得成熟细胞类型表型，但不预先排除转分化，因此一种成熟细月包类型可以转变成另一种成熟细l包类型，例如神经元至、淋巴细月包。分化状态细胞的分化状态是细胞已沿着特定途径或谱系分化的水平。细胞进程状态细胞进程状态指细胞进程是否发生，或在复杂细胞进程中可以指那种细胞进程中的特定步骤或阶段。例如，细胞中的细胞分化途径可以是无活性的，或可以已被i秀导且可以包含许多离散步骤或组分，例如通过特征性的酶或中间体组存在表征的信号传导事件。基因基因是编码基因产物的核酸，所述基因产物是多肽或RNA基因产物。如本文使用的，基因至少包括编码基因产物的编码序列；任选地它可以包括编码序列转录和/或翻"^所需的一个或多个调节区。基因产物基因产物一般是由基因以常规方式编码的蛋白质。然而，该术语还包含由基因编码的非多肽基因产物，例如核糖核酸。核酸合成核酸可以根据任何可用技术合成。在某些实施方案中，核酸合成是自动化的。此外，核酸可以根据本领域已知操作通过生物复制，例如通过在细菌和真核细胞中克隆和复制来产生。差异表达反应于细胞培养条件以不同水平表达的基因可以通过基因表达分析来鉴定，例如通过本领域已知方法在基因阵列上鉴定。相对于总体基因表达水平，差异表达的基因在测试条件下比在备选条件下在细胞中显示更多或更少量的mRNA或基因产物。转染基因可以通过合适方法转染到细胞内。该术语在本文中用于表示例如使用磷酸钙的常规转染，但还包括用于将核酸转移到细胞内的其他技术，包括转化、病毒转导、电穿孔等。调节术语调节用表示待调节参数的增加和/或减少。因此基因表达的调节包括增加基因表达和减少基因表达。整数(integer)这个术语指参数的单个实体。例如，如果参数是标记的尺寸，那么整数将是参数内的一个或多个特定尺寸。鉴定与一个或多个细l包单位相关的标记在一个方面，提供了用于测定用超过一种标记(例如超过一种类型的标记)进行标记的细胞单位的细胞培养史的方法，所述方法包括下述步骤(a)测量用于标记细胞单位的每种标记的一种或多种参数；(b)鉴定细胞单位中的每种标记；和(c)使每种标记的标识与细胞单位的标识/或细胞单位已暴露的特定细胞培养条件关联。在一个进一步的方面，还提供了用于测定用一种或多种类型的标记进行标记的细力包单位的细胞培养史的方法，所述方法包括下述步骤(a)以适合于分析的形式获得来自细胞单位的标记；(b)测量用于标记细胞单位的每种标记的一种或多种参数；(c)鉴定细胞单位中的每种标记；和(d)使每种标记的标识与细胞单位已暴露的细胞培养条件的时间排列和标识关联。参数可以是标记的尺寸和/或标记的光学特性。标记的光学特性的例子包括但不限于，光反射率、颜色、荧光发射波长和/或荧光发射强度。待分析的细胞单位可以与样品分离，所述样品可以包含许多不同细胞单位。目的细胞单位中的标记可以与细胞单位分离。在某些实施方案中，这通过酶促消化和/或酸水解细胞单位来完成。在某些实施方案中，这通过使用本文所述方法来完成。有利地，在某些实施方案中，这导致细胞单位破坏但标记纟皮完整获得。在本发明的一个实施方案中，测量关于细胞单位的一种或多种不同标记-例如在包含多个细胞单位的样品中包含的细胞单位。在某些实施方案中，将存在约2种-约50种或更多不同标记(类型)/纟田胞单位。在某些实施方案中，将存在约2种-约40种不同标记(类型)/细胞单位。在/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约2种-约20种不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约2种-约IO种不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约5种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约10种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约15种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约20种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约25种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约30种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约35种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约40种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约45种-约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，预期将存在约50种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约55、60、65、70、75种或甚至80种或更多不同标记(类型)/细胞单位。在某些实施方案中，将存在约55、60、65、70、75种或甚至80、卯、100、250、500、750或1000种或更多不同标记(类型)/细胞单位。上述每种参数可以具有许多不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少2、3、4或5个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少10个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少15个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少20个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少25个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少30个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少35个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少40个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少45个不同整数。在某些实施方案中，对于每种参数存在至少50个不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在至少5个不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在超过5个和少于50个不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在50个或更少不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在50个或更多不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在40个或更少不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在30个或更少不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在20个或更少不同整数。在某些实施方案中，存在至少2种不同参数且对于每种参数存在IO个或更少不同整数。每个细胞单位可以包含每个种类的超过一种(例如多种)标记。有利地，这种方法可以是自动化的，从而使得可以处理许多细胞单位和/或许多样品。这是特别有利的，因为每个样品在其中可以具有许多(例如数百个)不同标记，/人而产生大量数据。对于本发明的某些实施方案，存在最多50种不同标记。例如，4吏用如本文所述CML亲水微珠一般将产生这种数目的微珠。CML亲水微珠可以连同一种或多种微载体一起使用。在某些实施方案中，CML亲水微珠连同Cytopore2微载体一起使用。样品中的标记可以全部是不同的，或它们可以全部是相同的。标记可以具有不同尺寸，例如约l-10pm,优选约1.9pm、约4.4)iim、约5.4)Lim、约5.8)um、约7.4|um、约9.7|um和/或约9.8pm。标i己可以是樣O求体-例如CML樣iJ求体-且此类樣O求体的直径可以是1-10|um,优选约1.9jam、约4.4pm、约5.4|um、约5.8jam、约7.4pm、约9.7jam和约9.8^m。对于某些实施方案，存在最多1000种不同标记。例如，使用如本文所述有4艮和金条紋的杆状纳米丝可以产生这种数目的标记。所述纳米丝可以连同一种或多种微载体一起使用。在某些实施方案中，纳米丝连同Cultispher-G微载体一起使用。在一个实施方案中，特定标记与已知细胞培养条件相关。因此，一旦细胞单位已用这种标记进4亍标记且已在相应条件下进行培养，就可以鉴定或选择已产生特定目的细胞单位的那些培养条件。尽管各种成像分析方法是本领域可用的，4旦可以使用MediaCybernetics(www.mediacy.com)的ImageProPlus成像软件、NikonTE2000-S焚光显微镜和EvolutionVFMediaCybernetics提供的冷单色照相才几的组合。在一个实施方案中，测量目的一见野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像。一般地，这可以使用显微术来完成-例如明视野显微术、相差显微术、斜射照明显微术、暗^L野显微术、微分干涉相差显樣l术、反射相差显微术、varel相差显微术、偏光显微术、干涉显微术和荧光显微术。适当地，可以描绘关于目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像的轮廓和/或测量目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个荧光图像。荧光团可以发出例如，蓝色、绿色、近红或远红荧光。适当地，荧光团选自UV2、StarfireRed和TRITC。荧光团量可以选自5个不同范围(例如焚光强度范围)且每个不同范围是离散的。在某些实施方案中，范围在亮度方面可以相差约2-5倍或更多。在某些实施方案中，范围在亮度方面可以相差约5-10倍或更多。在某些实施方案中，范围在亮度方面可以相差约2-10(H咅或更多。在某些实施方案中，范围在亮度方面可以相差约2-1000倍或更多。在某些实施方案中，范围在亮度方面可以相差约2、5、10、100或1000倍或更多。适当地，将关于一个或多个图像的轮廓加载到一个或多个荧光图像上，且对于用于标记标签的每种荧光团可以测量目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个荧光图像。细胞单位中的每种标记可以通过读出一个或多个轮廓内的标记的一种或多种参数-例如面积和/或光密度-进行鉴定。因此，例如，标记可以通过显微术进行分析，使用配备滤光器组的NikonTE2000-S倒置外焚光显微镜用于显现荧光团-例如TRITC、DAPI(UV2)、GFP-B(全部来自Nikon)和Cy5(ChromaTechnology)。图像可以使用EvolutionVF冷单色照相机来捕获，图像分析使用ImageProPlus(两者都来自MediaCybernetics)来进行。单一微球体的轮廓一般使用显微术方法来捕获，且计算这些内的面积来按大小排列标记。通过与包含已知标记的参考样品比较，不同通道中的荧光强度可以用于进一步指定每种标记的标识。适当地，显微术方法选自明—见野显樣i术、相差显微术、斜射照明显微术、暗视野显微术、微分干涉相差显微术、反射相差显微术、varel相差显微术、偏光显微术、干涉显微术和荧光显微术。在一个实施方案中，显微术方法是明视野显微术。任选地，获得的数据可以使用本文所述的进一步方法进行处理，所述进一步方法提供要确定的样品中的细胞单位已暴露的细胞培养条件的时间排列和标识。有利地，这种方法可以是自动化的，从而允许大量数据被快速地处理。有利地，该方法使用计数每种标记类型的数目随后以列表、曲线图或图表的形式输出这种数据的软件。有利地，可以将数据输入空白表格软件内用于高通量分析。在一个方面，分析这种数据的方法包括第1个步骤比较标记的至少一种参数的上和下限与标记的至少一种参数的平均测量值。在本发明的一个实施方案中，任何参数的上和下限通过分析相同种类的多个参考标记获得或可获得。如果下限小于平均测量值，且上限高于平均测量值，那么该方法比较标记的第2种参数的上和下限与标记的第2种参数的平均测量值。如果第2种参数的下限小于那种参数的平均测量值，第2种参数的上限高于那种参数的平均测量值，那么该方法比较一种或多种另外的参数相对于相应参数的下限。如果在任何点时任何参数的平均测量值没有包含在对于那种参数测定的上和下限内，那么该方法比较平均测量值相对于包含那种相同参数的不同限度的第2个范围。在一个方面，提供了用于测定细胞单位已暴露的细胞培养条件的时间排列和标识的方法，所述方法包括下述步骤比较标记的至少一种参数的上和下限与标记的至少一种参数的平均测量值。在一个进一步的方面，提供了用于测定细胞单位已暴露的细胞培养条件的时间排列和标识的方法，所述方法包括下述步骤(a)比较标记的至少一种参数的上和下限与标记的至少一种参数的平均测量值；(b)比较标记的至少一种参数的平均测量值与标记的至少一种参数的最低限；和(c)使标记的至少一种参数的测量与标记标识关联，所述标记与细胞单位相关。在一个实施方案中，如果下限小于平均测量值，且上限高于平均测量值，那么该方法比较标记的第2种参数的上和下限与标记的第2种参数的平均测量值。例如，第l种参数可以是尺寸，第2种参数可以是荧光强度或水平。在一个实施方案中，如果第2种参数的下限小于那种参数的平均测量值，且第2种参数的上限高于那种参数的平均测量值，那么该方法比较一种或多种另外的参数相对于相应参数的下限。在一个实施方案中，如果下限不小于平均测量值，且平均测量值不小于上限，那么测量标记的相同参数的至少一个另外的整数的上和下限。例如，另外的整数可以包括但不限于，不同尺寸、不同荧光团或不同荧光强度范围。因此，关于这些整数每一个的参数将分别是尺寸、荧光团类型和荧光强度。在一个实施方案中，如果下限小于平均测量值，且平均测量值小于上限，那么测量标记的至少一种另外的参数-例如标记的尺寸、荧光团类型和/或荧光团水平。在一个实施方案中，如果标记的至少一种参数的平均测量值大于标记的至少一种参数的最低限，那么结果与具有一种或多种参数的一种或多种标记相关。在一个实施方案中，如果标记的至少一种参数的平均测量值不大于标记的一种或多种参数的最低限，那么结果与具有该参数的标记相关。在一个实施方案中，如果下限不小于平均测量值，且平均测量值不小于至少一种另外的参数的上限，那么测量标记的相同参数的至少一个另外的整数的上和下限。在一个实施方案中，该方法可以对于标记的相同参数的一个或多个另外的整数进行重复。在另一个实施方案中，该方法甚至可以对于标记的相同参数的所有整数进行重复。在一个实施方案中，如果下限小于平均测量值，且平均测量值小于至少一种另外的参数的上限，且标记的至少一种参数的平均测量值大于标记的至少一种参数的最低限，那么结果与具有所述一种或多种参数的一种或多种标记相关。在一个实施方案中，如果下限小于平均测量值，且平均测量值小于至少一种另外的参数的上限，且标记的至少一种参数的平均测量值不大于标记的一种或多种参数的最低限，那么结果与具有该参数的标记关联。在一个实施方案中，如果标记的至少一种参数的测量不能与标记的标识相关，所述标记与细胞单位相关，那么该方法可以包括另外步骤，例如，连续检查荧光团，从而使得来自其的最终'否'结论将继续询问相关尺寸标记的荧光团值。适当地，本文所述方法使用本文所述的一种或多种复合物来进行。在一个进一步的方面，提供了用于鉴定标记的一个或多个面积和/或密度值的方法，所述方法包括下述步骤(a)获得用于标记细胞单位的标记的一个或多个图像；(b)描绘关于标记的一个或多个图像的轮廓；(c)加载关于标记的一个或多个图像的轮廓；和(d)读出一个或多个轮廓内的面积和/或密度。测定细胞单位的标识或细J包培养史如上文已描述的，当处理大量细胞单位时，它们的标识和/或细胞培养史(例如，任何一个群体或单位可能已暴露的一系列培养条件的时间排列和确切性质)可能变得混乱。例如，细胞培养的分开-合并方案必须包括在每个循环中混合细胞单位，使得难以跟踪个别单位。测定细胞单位混合物中的细胞单位的细胞培养史，所述细胞单位可能已被实施多重培养条件，有时称为细胞培养史的'解巻积'。测定细胞单位混合物中细胞单位的细胞培养史的一种方法是标记细胞单位，且因此标记细胞单位是有利的。如本文所述，标记-例如杆状颗粒、微珠和/或微球体可以作为与微载体使用-例如细胞相关微载体缀合的标志或标记。后续检测和鉴定提供了细胞单位已暴露的细胞培养条件时间4非列和标识记录。微载体各种微载体是可用的，形状和大小不同，且由不同材料制成。例如，微载体可以是多孔微载体，选自Cytopore微载体(例如Cytopore1樣i载体或Cytopore2樣i载体)、Cultispher孩吏载体、Cultispher隱G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体、Informatrix微载体、Microsphere微载体、Siran樣吏载体和MicroporousMC微载体。作为进一步的例子，微载体可以是固体微载体-例如Cytodex微载体(例如Cytodex1、Cytodex2或Cytodex3微载体)、Biosilon微载体、Bioglass微载体、FACTIII微载体或DE52/53微载体。微载体培养具有显著优点，包括扩大培养，且需要时还允许细胞单位暴露于所选培养条件，以便获得所需生长和/或分化条件。微载体表面可以通过物理或化学处理进行进一步》f饰，例如具有所需电荷或其他所需特性的分子实体的吸附或共价交联。在一个广泛的实施方案中，因此，本发明提供了用于体外培养细胞的方法，包括培养与本文所述微载体复合物附着的细胞。在一个方面，提供了包含微载体和带电(例如带负电荷的)标记的复合物。换言之，提供了与带电(例如带负电荷的)微球体缀合或用其标记的微载体。在一个进一步的方面，提供了微载体和杆状标记。换言之，提供了与杆状标记缀合或用其标记的微载体。Cultispher微载体CultiSpher经由一种方法由制药级的猪明胶制成，所述方法产生具有高机械和热稳定性的高度交联的明胶基质。当在细胞培养中使用时，细胞可以与基质的外和内表面附着。基质的表面积增加连同给基质内部细胞提供的不受应激的保护，导致细胞生产能力增强。产品的另外优点是基质可以用蛋白水解酶进行溶解，导致收获具有几乎100%存活力的细胞。在一个实施方案中，微载体是Cultispher-G微载体。Cultispher-G具有130-380|nm的粒径、12-18ml/g的干体积、1.04g/ml的密度，而平均孑W圣为20)Lim。为了制备和使用Cultispher-G微载体，可以特别参考Biotech.Bioeng.(2000)68,1第59-70页；Brit.J.Cancer.Suppl.XXVII,S-78-S82(1996);和制造商的网站www.percell.se。Cytopore2微载体Cytopore微载体可从GEHealthcare(先前的Amersham)(www.microcarriers.com)获4寻。Cytopore由100%的纤维素制成,戶斤述纤维素对细胞是无毒的且是生物可降解的。由于N,N,-二乙氨乙基基团，它是带正电的。它具有非常精确的粒度分布和网状结构，表面积与颗粒材料的比率超过95比1。网状结构使得染色的细胞能够在它们在微载体内部生长的同时^皮接近地，见察。一般粒径是200-280^m且有效表面积是1.1m2/g干重。相对密度是1.03g/ml，孔口的平均直径是30^tm且体积是40ml/g干重。为了制备和使用Cytopore微载体，特别参考AppliedMicrobiologyandBiotechnology(1997)47,4p352-7;Cytotechnology(1999)30第143-147页；ChineseJournalofBiotechnology(1999)15,4第239-44页和ActaOto-Laryngologica(2002)122,5第541-5页。Cytopore2已对于需要约1.8meq/g电荷密度的依赖贴壁的细胞进行优化。在某些实施方案中，微载体是猪明胶微载体。在某些实施方案中，微载体由100%的纤维素制成。有利地，具有强正电荷的微载体对于携带强负电荷的标记是最佳的。如上所述，标记可以作为与微载体缀合-例如细胞相关微载体的标志或标记使用。后续检测和鉴定提供了细胞单位已暴露的细胞培养条件时间排列和标识的明确记录。各种分子或大分子标记可以与微载体组合使用，只要它们可以被检测。标记一般包含独特成形或用标记修饰的物体和/或彩色的和/或焚光化合物。在一个实施方案中，用于标记细l包单位的标记具有一个或多个(优选全部)下述性质i.它们的尺寸相对于它们标记的微载体很小，和/或小于多孔微载体的平均孔径；ii.它们能够与微载体形成复合物，从而使得结合在实验期间持续，.且无需影响标记的细胞单位的条件下未结合的标记就可以与复合物分开；in.它们可在不干扰标记独特性质的条件下和它们已与其形成复合物的细胞单位分开；iv.它们由一种或多种惰性物质制成，所述惰性物质基本上不影响细胞单位的生物学且反之不受细胞单位或其生物学的影响；v.,它们可以大的数量且此外以许多相关或不同变体中获得，所述变体使用合适技术可容易地区分；vi.它们通过方便、高度可靠和可以自动化的方法进行区分。在一个实施方案中，标记是微球体-例如荧光和/或彩色微球体。可以获得各种尺寸、密度、颜色等的超过2000种不同微球体，所述微球体由乳状液或悬浮液聚合、沉淀等制成，且包含聚苯乙烯、其他聚合物、共聚物、三聚物和/或石圭石等，例如来自DukeScientificCorporation(PaloAltoCA，USA)或BangsLaboratoriesInc.(FishersIN,USA)。苯乙烯(PS)和苯乙烯/二乙烯基苯共聚物(S/DVB)微球体。其他聚合物包括聚甲基丙烯酸曱酯(PMMA)、聚甲基苯乙烯(PVT)、苯乙烯/丁二烯(S/B)共聚物、苯乙烯/曱基苯乙烯(S/VT)共聚物。这些微球体中的许多可以进行官能化，例如，如在CML微球体中通过羧基，或通过氨基官能化或含氮化合物，如脂肪族伯、仲、叔、季胺，芳香族伯、仲、叔、季胺和吡咬，这些提供与COOH珠的备选偶联反应。适当地，微球体是亲水微球体。更适当地微球体是聚苯乙烯微球体。最适当地，微球体是表面修饰的微球体，例如来自DukeScientificCorporation(PaloAltoCA,USA)的羧酸盐/酯修饰的(CML)微球体。在一个实施方案中，一种或多种CML微球体连同一种或多种cytopore2微载体一起进行复合。CML微球体具有来源于共聚合过程的高度带电羧基的表面层。该表面是一定程度多孔和相对亲水的，但保留总体疏水性。这些颗粒的电荷密度为约10-125A"羧基，且它们对于高浓度的电解质(高达IM—价盐)是稳定的。CML乳胶将吸附蛋白质和其他生物分子，但比疏水微球体弱得多。在某些实施方案中，制备微球体和蛋白质例如链霉亲和素的缀合物。例如，与CML微球体的缀合物可以如下制备。CML微球体可以使用水溶性碳化二亚胺试剂进行活化，所述碳化二亚胺试剂使得羧基与待要偶联的蛋白质上的伯胺反应。制备pH6.0的50mM反应緩冲液。乙酸钠或2-[N-吗啉代)乙磺酸(MES)是合适的緩沖液。将蛋白质以10mg/mL的浓度溶解于反应緩冲液中。在反应緩冲液中制备1%(w/v)的微球体悬浮液。制备1体积的蛋白质溶液与IO体积的微球体悬浮液，且允许混合物于室温温育20分钟。在去离子水中制备10mg/mL(52jiMol/mL)1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDAC)溶液，且立即使用。向微球体悬浮液中加入计算量的EDAC溶液，且用0.1NNaOH将反应混合物的pH调整至6.5土0.2。混合物于室温在振荡器或混合轮上温育2小时。去除未结合的蛋白质且贮存于贮存緩冲液中。有利地，CML和其他微球体可以以各种形式获得-例如各种颜色(例如蓝色、红色、绿色、黄色、黑色)、各种荧光团(例如荧光素(绿色)、萸光素(红色)或焚光素和罗丹明(红色绿色)和各种尺寸(例如5.4(am(1.14x101(}个珠/克)，和7.6jum(4.10x109个珠/克))。CML和其他微球体可以这样制备，使得它们加载一种或多种可见染料和/或荧光团。在一个实施方案中，标记-例如微球体-不用蛋白质包被。有利地，不用蛋白质(例如链霉亲和素)包被的CML微球体是高度带负电荷的，且它们与Cytopore微载体非常紧密地粘附，所述Cytopore微载体携带高正电荷。产生大量复合物所需的CML微球体Cytopore微载体的比率可以低至约1:1。在本发明人已使用的先前系统中需要约1:250的比率，以便在多次洗涤后在每种复合物中获得甚至少数结合标记。通过改变制备过程中的各种参数，商业微球体供应者-例如BangsLaboratories-可以制造珠组，所述珠组可以基于不同尺寸(例如直径4.4)Lim和5.5)im的珠组)进行区分。每个尺寸群体内的珠可以基于不同荧光强度进一步彼此区分，所述不同荧光强度是由于差别加载了单一荧光染料。可以使用具有不同吸收或发射特性的许多不同染料，所述染料可以与本文所述樣i载体附着。因此，标记多样性可以由改变标记尺寸和/或荧光团加载(即发光体强度)和/或荧光团标识/组合产生。特别地，标记多样性可以由下述产生它们携带的荧光团类型(例如珠可以加载UV2或StarfireRed);尺寸(例如对于每种荧光团存在5种不同珠尺寸1.87、4.41、5.78、5.37和9.77微米)和/或它们携带的荧光团量(每种染料可获得5种不同强度)。可以使用其他荧光团-例如TRITC。随后可以使用滤光器以检测任何给定珠上的至少4种不同染料-例如来自Nikon的TRITC滤光器(ex540/25;dm565;ba605/55)用于TRITC显示；来自Nikon的DAPI滤光器(ex340-380;dm400;ba435-485)用于UV2显示；来自Nikon的GFP-B滤光器(ex460-500;dm505;ba510-560)用于FITC显示，和Cy5滤光器组(目录号41008来自41008)用于StrarfireRed显示。微球体可以使用可见或荧光染料在内部或外部进行染色。当染料整合到微球体团块内时，一般通过将微球体浸入包含染料或荧光团的溶液中，发生内部染色。当染料与微球体表面缀合时，例如用如本文所述异硫氰酸盐/酯衍生物修饰CML微球体，发生外部修饰。因此，在某些实施方案中，微球体可以使用可见或荧光染料在内部或外部进行染色。此外可以使用'量子点'，以获得可以方便地读出的非常大量的不同荧光标记。因此，在本发明的一个进一步的实施方案中，使用量子点代替荧光团。在某些实施方案中，由于当暴露于光时不会褪色(光漂白)的事实，量子点是优选的。例如，荧光团FITC已知是光漂白的，且用包含FITC的标记处理的细胞单位理想地在黑暗中进行处理，且难以可靠地分析。量子点可以在聚苯乙烯聚合时掺入微球体内，导致甚至加载标记。可以获得许多颜色的量子点，且它们可以在相同波长处进行激发，因此无需滤光器通过使用彩色CCD照相机允许显示多种颜色。关于量子点的进一步的背景信息可从US6,322,901、US6,576，291、US2003/0017264、US6，423,551、US6,251,303、US6,319，426US6，426,513、US6,444,143、US2002/0045045、US5,990,479、US6,207,392、US6，251,303、US6,319,426、US6,426，513和US6,444,143获得。有利地，标记,皮保护不受经由细胞培养组分的降解，例如通过化学或其他修饰或通过胶嚢化。标记胶嚢化可以在许多不同介质中发生，例如，如本文已描述的在珠中-例如来自BangsLaboratoriesInc.(FishersIN,USA)的那些，且胶嚢化可以用于标准化标记剂量，并且提供组分用于标记扩增和/或才佥测(例如通过提供PCR引物用于与DNA标记一起使用)。标记检测可以通过本领域技术人员熟悉的各种方法来完成。方法包括质语测定法、核;兹共振、测序、杂交、抗原4全测、电泳、光语法、显微术、图像分析、荧光检测等。在某些实施方案中，因为标记一般包含颜色或荧光团，所以使用显微术、光i普法、图像分析和/或荧光检测。在第1种情况下标记无需通过其化学或分子结构进行区分。可以设计非化学标记策略的多种变化，以测定混合物中给定细胞单位的标识，或推导包含混合物的不同细胞单位的标识。例如光学或视觉标记方法已得到描述，其中不同形状的物体、图解编码的物体或不同颜色指示样品的标识(例如参见1998，Gmles等人，Angew.Chem.IntlEdEngl，第37巻，第926页；LuminexCorp,AustinTX,USA;BDBiosciences;MemobeadTechnologies,Ghent,Belgium)。适当地，标记可以是带电标记(例如带负电荷的标记)。因此，在一个进一步的方面，提供了包含微载体-例如多孔微载体-和带电标记的复合物。一般地，微载体具有净电荷。它可以包含下述物质、由下述物质组成、或基本上由下述物质组成蛋白质、纤维素、聚乙烯、聚苯乙烯、玻璃、胶原、胶原-gylcose-氨基聚糖和/或明胶。因此，微载体可以选自Cytopore微载体、Cyt叩ore1微载体、Cytopore2微载体、Cultispher微载体、Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体、Informatrix微载体、Microsphere微载体、Siran微载体和MicroporousMC微载体。适当地，带电标记是球体-例如直径为约9pM或更小的微球体。微球体可以是羧酸盐/酯修饰的(CML)微球体。在一个进一步的实施方案中，标记是杆状颗粒。适当地，杆状颗粒是纳米丝。纳米丝可以包含各种金属、由各种金属组成、或基本上由各种金属组成-例如铝。纳米丝可以用各种金属-例如银和/或金进行包一皮。适当地，纳米丝直径为约1^M或更小和/或长度为约10^M或更小。纳米丝可以是如Science第294巻，第137-141页(2001)中所述的納米丝。因此，在一个进一步的方面，提供了包含微载体和纳米丝的复合物。简言之，纳米丝是用亚测微计条紋内在编码的多金属微杆。复合物模式可以通过将金属离子连续电化学沉积在具有一致尺寸的孔的才莫板上来产生。有利地，纳米丝足够小，以作为可以在每次分开后添加的标记使用。这是更方便的，因为只需要读出在阳性微载体中的标记。关于杆状颗粒-例如纳米丝-的参数包括但不限于尺寸、光学特性和/或金属组成。在一个实施方案中，光学特性选自光反射率-例如特定波长的光反射率、颜色、荧光发射波长和荧光发射强度。在某些实施方案中，杆状颗粒-例如纳米丝是外部染色的。连同杆状标记一起使用的微载体可以是多孔微载体-例如电中性的微载体。农￡载体可以包含下述物质、由下述物质组成、或基本上由下述物质组成蛋白质、纤维素、聚乙烯、聚苯乙烯、玻璃、胶原、胶原-gylcose-氨基聚糖和/或明胶。微载体可以选自Cyt叩ore微载体、Cytopore1微载体、Cytopore2微载体、Cultispher微载体、Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体、Informatrix微载体、Microsphere樣i载体、Siran樣￡载体和MicroporousMC樣i载体。在一个实施方案中，连同杆状微载体一起使用的微载体是Cultispher微载体-例如Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体或Cultispher-S微载体。在一个实施方案中，连同杆状微载体一起使用的微载体是Cultispher-G微载体。有利地，已发现在相同微载体上使用杆状标记和电中性的多孔微载体比使用球状标记更佳。不希望被具体理论束缚，认为标记越小，渗透微载体孔越佳，且变得塞满(推测是由于尺寸不对称)。因此，纳米丝的结合比例如微球体标记的结合更佳，且导致高水平的永久标记。在另一个实施方案中，一个或多个聚苯乙烯微珠连同一个或多个Cultispher-G微载体一起进行复合。对于某些实施方案，标记不是DNA标记。在某些实施方案中，标记是外部染色标记。干细胞干纟田胞在StemCells:ScientificProgressandFutureResearchDirections.DepartmentofHealthandHumanServices.2001年6月http:〃www.nih.gov/news/stemcell/scireport.htm中得到详纟田描述。该才艮道的内容引入本文作为参考。关于干细胞的构成仍存在相当大的争论，然而为了本讨论的目的，关键特性是分化成不同细胞类型的能力。干细胞的例子在下文给出。已用于诱导干细胞定向分化的各种因素包括视黄酸、表皮生长因子(EGF)、骨形态发生蛋白(BMPs)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、活化蛋白A、转化生长因子P-l(TFGP-1)、肝细胞生长因子、神经生长因子、sonichedgehog(SHH)、白介素-3(IL-3)、白介素-6(IL-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素、维生素D3、地塞米+〉、p巯基乙醇、丁鞋基茴香醚、5-氮杂胞苷、DMSO、胰岛素、甲状腺素(T3)、LIF、胎牛血清、血管内皮生长因子(VEGF)、青灰因子、氧浓度变化、抗坏血酸、p-甘油磷酸、烟酰胺、血小板衍生的生长因子(PDGF)、cAMP、各种细J包粘附分子和基质，及其他。除了这些确定因子外，很可能未确定提取物，例如条件培养基、人和动物组织匀浆、或植物提取物可以用于指导干细胞分化。这些未确定提取物的逐步分馏可以产生活性部分或甚至具有高效能的纯组分。在特定实验中使用的生长培养基中可以加入这些因子，单独或组合，或以对实验结果关键的确定顺序。细胞单位形成细胞群体(细胞集落)可以在各种条件下在细胞培养中生长，且集落在各种条件下、被扰乱时、和与其他集落混合时，可以在很大程度上维持其完整性。此类群体或集落在本文中称为细胞单位。细胞单位的形成可以通过例如在固体基质例如载体上培养作为贴壁培养物的细胞来完成。如果细胞增殖在接种在载体上后发生，那么子代细胞将附着在相同载体上，且形成相同集落的部分。一般而言，活贴壁细胞不会与其生长基质容易地分开，且因此不管载体的任何机械处理、搅动培养基、或转移到另一种组织培养系统内，细胞集落的完整性仍持续。类似地，如果在任何时候，将多个载体转移相同容器内(例如珠被合并)，那么将不存在细胞从一种珠大量转移到另一种。在固体载体上形成细胞单位的一个重要优点是基质-因此由于締合而附着的细胞-可以如本文所述进行标记。当细胞在较小型载体上生长时，它们可以作为悬浮培养进行处理。在小型载体上培养细胞的常见方法称为微载体细胞培养(参见'Microcarriercellculture,PrinciplesandMethods',EditionAA,可从AmershamBiosciences获得(18-1140-62);整体引入本文作为参考)。微载体培养在商业上用于在最高达4000升的发酵罐中生产抗体和干扰素。因为载体的物理性质是众所周知的，所以容易计算实验中使用的载体数目。载体可以作为干燥产品获得，所述干燥产品可以精确地称重，且随后通过在液体培养基中溶胀来制备。另外可以计算出和改变用于接种微载体培养的细胞数目。收获在本文所述的微载体上生长的细胞，或从微载体中释放标记，在如本文所述应用时可以通过细胞的酶促分离和/或通过消化载体来完成。标记与标记的细j包单位的分离在一个进一步的方面，本发明提供了用于使标记与细胞单位(例如与微载体复合的细胞单位)分离的改良方法。有利地，当标记依照本文所述方法进行分离时，它们以完整状态获得，从而使得每种标记的独特参数可以如实地进行测量。有利地，当标记进行分离以便通过光学方法-例如通过显微术-进行分析时，它们以彼此紧密的接近性进一步获得，从而使得它们可以方便地进行成像(例如仅使用1个或2个图像视野)。在一个方面，提供了用于分离包含微载体和标记的复合物的方法，所述方法包括使所述复合物与蛋白酶接触的步骤，其中所述微载体包含蛋白质、由蛋白质组成、或基本上由蛋白质组成。适当地，微载体包含胶原和/或明胶、由胶原和/或明胶组成、或基本上由胶原和/或明胶组成-例如Cultispher微载体(例如Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体)。蛋白酶可以是蛋白酶K、胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和/或胱天蛋白酶。如果蛋白酶是蛋白酶K，那么在某些实施方案中，它以约0.5U/ml或更多的量使用。适当地，复合物与蛋白酶接触至少约20-60分钟。适当地，复合物与体积为约5)Lll或更少的蛋白酶接触。在一个进一步的方面，提供了用于分离包含微载体-例如多孔微载体-和标记的复合物的方法，所述方法包括使所述复合物与酸接触的步骤。适当地，微载体具有净电荷且可以包含纤维素、由纤维素组成、或基本上由纤维素组成。因此，例如，微载体可以是Cytopore微载体-例如是Cyt叩ore2微载体。在某些实施方案中，标记是球体-例如微球体-它包含聚苯乙烯、由聚苯乙烯组成、或基本上由聚苯乙烯组成。在某些实施方案中，标记是杆状颗粒-例如纳米丝。各种试剂可以用于从微载体中释放标记-例如酸(例如盐酸和/或硫酸)或次氯酸钠和/或氢氧化钠，以及其他试剂-例如胰蛋白酶-EDTA、纤维素、蛋白酶K和氯化钠(例如5M氯化钠)。在某些实施方案中，试剂是盐酸，优选37%盐酸(约12M)。在某些实施方案中，试剂是次氯酸钠。在某些实施方案中，试剂是蛋白酶。在某些实施方案中，试剂是蛋白酶K。适当地，一种或多种微载体的消化在光学上透明的表面上进行-例如玻璃载玻片。这允许方便的原位成像，这是有利的因为没有材料损失。适当地，表面进行处理以预防包含微载体的液体扩散，例如使用硅化(使……硅烷化)试剂。适当地，待消化的微载体在蒸馏水中进行洗涤以去除任何痕量培养基和/或盐，且以最低限度的液体体积应用于表面。适当地，表面进行加热以达到微载体的完全脱水和使标记与表面粘附，从而防止分散。为了以最低限度的体积进行微载体消化，所述最低限度的体积优选小于5pl和更优选小于2消化在湿化盒中进行。在某些实施方案中，消化使用一种或多种蛋白酶来完成。蛋白酶溶液一般直接分散在干燥微载体上且置于湿化盒中。一旦微载体已溶解(一般为30-60分钟)，就从湿化盒中取出载玻片以检查完全消化。蛋白酶溶液被蒸发，提供释放标记在载玻片上的完全干燥以允许分析标记。在某些实施方案中，一种或多种微载体的消化在微量离心机或PCR管例如由Eppendorf制造的那些中进行。管内部可以进行处理以阻止标记从微载体中释放后与管附着。在某些实施方案中，将管置于PCR机器中允许精确的温度控制。在某些实施方案中，PCR机器使用加热盖，允许使用最低限度的液体体积。适当地，一旦一种或多种标记已与细胞单位和标记分开，就可以获得一种或多种标记的一个或多个图像(使用，例如显微技术)。图像随后可以进行分析以测定标记的一个或多个特征。在一个进一步的方面，还提供了用于鉴定从一种或多种细胞单位获得或可获得的一种或多种标记的方法，所述方法包括下述步骤(a)分离细胞单位和标记；(b)获得标记的一个或多个图像(例如通过使用显微技术)；和(c)分析图像以测定标记的一个或多个特征。适当地，标记的一个或多个特征可以用于测定来源或获得标记的一种或多种细胞单位的细胞培养史。细胞的组合连续培养分开-合并细胞培养形成细胞单位(特别是微观细胞单位)对于取样多种组织培养条件更加有用，因为每种细胞单位构成容易处理的单位，所述单位可以暴露于各种细胞培养条件。依照本发明，细胞分组一般通过在微载体培养物中培养细胞来产生，且术语细胞单位、细胞群体、集落和珠可互换使用。合并细胞培养，且在一个实施方案中，包括细胞单位群体的连续细分和组合，以便取样细胞培养条件的多个组合。在本发明的一个方面，该方法通过获取细胞单位的最初起始培养物(或不同起始培养物)来进行，所述细胞单位分成数目X!的各自包含多个珠(群体/集落/载体)的等分试样，所述等分试样在不同培养条件下分开生长。细胞培养给定时间后，细胞单位可以通过组合和混合来自不同等分试样的珠进4亍合并。这个库可以再次分成数目X2的等分试样，所述等分试样各自在不同条件下培养一定时间段，且随后同样进行合并。这种分开、培养和合并(或合并、分开和培养；取决于从何处进入循环)的反复操作允许细胞培养条件的许多不同组合的系统取样。实验的复杂性，或换言之测试的细胞培养条件的不同组合数目等于在每个循环中取样的不同条件数目的乘积(XiXX2X...Xn)。应当指出在后续分开前合并所有细胞单位的步骤可以是任选的-其中有限数目的细胞单位进行合并的步骤可以具有相同效应。本发明因此使许多系统取样细胞培养条件的多个组合的相关方法具体化，其中细胞单位群体批量进行处理。不管其中各种细胞培养条件通过这种方法进行取样的精确方式，该操作是有效的，因为多个细胞单位可以共享单个容器，在其中它们在相同条件下进行培养，且它可以只使用少数培养容器在任何一个时间来进行(使用的培养容器数目等于分开样品的数目)。在许多方面，这种操作的原理类似大型化学文库的裂分合成法(称为组合化学)的那种，所述裂分合成法取样化学构成基团之间键合的所有可能组合(参见例如CombinatorialChemistry,OxfordUniversityPress(2000)，HichamFenniri(Editor))。分开-合并细胞培养可以经过任何数目的循环进行重复，任何数目的条件可以在每个循环中进行取样。只要细胞单位的数目(或在这个例子中集群的珠)大于或等于经过所有循环取样的不同条件的数目，并假定细胞单位的分开完全随机发生，预期将存在至少一个细胞单种进行培养。这个操作可以用于取样任何细胞类型的生长或分化条件，或任何细胞类型的生物分子生产效率(例如促红细胞生成素或干扰素生产)。因为该操作是反复的，所以它理想地适合于测试多步组织培养方案-例如上文针对干细胞分化描述的那些。可以使用这种技术取样的变量包括细胞类型、细胞分组(例如微载体培养、细胞胶嚢化、完整生物)、生长基质(例如在微载体上的纤连蛋白)、细胞培养循环持续时间、温度、不同培养基(包括不同组成成分的浓度)、生长因子、条件培养基、与各种细胞类型(例如句养细胞)的共同培养、动物或植物提取物、药物、其他合成化学试剂、用病毒(包括转基因病毒)感染、添加转基因、添加反义或抗基因分子(例如RNAi、三链螺旋)、感觉输入(在生物的情况下)、电、光、或氧化还原刺激及其他。分开-分开细胞培养对细胞单位执行分开-合并方法的目的是使这些系统地暴露于预定的条件组合。本领域技术人员将能够设想达到这种结果的许多不同方法。除了分开-合并方法及其变化外，值得简要地讨论分开-分开方法。分开-分开方法包括将细胞单位群体细分至少2次，而不插入细胞单位的合并。如果分开-分开方法经过大量循环来使用，那么产生的分开样品的数目指数增加。在这种情况下重要的是使用一定水平的自动化，例如使用自动操纵平台和精密的样品跟踪系统。分开-分开步骤的优点是(因为细胞单位不是组合的)可以基于其细胞培养史来隔离各种细胞单位谱系。因此分开-分开步骤可以用于推论特定细胞培养条件是否负责任何给定细胞进程，和因此用于推导细胞单位的培养史。预定方案细胞单位的分开和/或合并可以完全随才几完成，或可以遵循预定方案。当细胞单位随机分开和/或合并时，将给定细胞单位隔离到任何群体内不以任何方式预定或有偏向。为了产生至少一个细月包单位已暴露于细胞培养条件的每种可能组合的高概率，使用比测试的细胞培养条件的组合总数目更大量的细胞单位是有利地。在某些情况下，因此根据预定方案分开和/或合并细胞单位是有利的，防止了偶然的组合重复或省略的总体效应。细月包单位的预定处理可以任选预先计划和记入空白表才各软件或计算机程序中，且分开和/或合并操作使用自动化方案进行，例如自动操纵装置。细^^单位的标记(参见下文)可以通过许多方法中的任何一种，例如通过RFID标记、光学标记或空间编码。能够测定才羊品标识和因此根据预定方案分隔样品的自动操纵装置已得到描述(参见'CombinatorialChemistry,ApracticalApproach',OxfordUniversityPress(2000),EdH.Fenniri)。备选地，标准实-睑室液体处理和/或组织培养自动操纵装置(例如由BeckmanCoulterInc,Fullerton,CA;TheAutomationPartnership,Royston,UK制造的)能够空间编码多个样品的标识，以及根据预编程的方案添加、去除或改变这些的位置。细胞单位的分析和/或分离每个细胞培养循环后，或限定数目的循环后，细胞单位可以进4亍研究以观察任何给定细胞进程，所述细胞进程可能已受到组织培养条件的影响。本发明现在将通过实施例进一步进行描述，所述实施例意欲用于帮助本领域普通技术人员执行本发明，且不希望以任何方式限制本发明的范围。实施例实施例1Cultispher-G微载体的生物素-缀合来自Bangs实验室的荧光微球体(标记)是链霉亲和素包被的且因此Cultispher-G微载体(CSG)是生物素化的，以便促进分开-合并实验过程中两者的结合。供给干燥的CSG且在过量无菌PBS中过夜水合(根据制造商的说明书)和高压灭菌。它们随后在无菌PBS中漂洗几次。实施例2生物素化试剂使用生物素化试剂，即生物素氨基己酰基-6-氨基-己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SigmaB329510mg)。将10mg试剂溶解于400|ul二甲基酰胺(DMF),且加入5ml固定体积的水合CSG中(在50ml管中5ml固定体积)，且通过温和吸液使孔混合(0.1Q/。v/vBSA/PBS预先上/下吸液到吸管尖内，以防止CSG与尖内表面粘附)。允许生物素化试剂与CSG—起于室温过夜温育，之后在无菌PBS中漂洗几次以去除过量生物素化试剂(漂洗在50ml管中进行，其中允许CSG在漂洗之间沉降和用真空装置小心抽吸)。生物素化CSG现在准备好在实验中使用。它们在无菌条件下贮存于已知体积的PBS中，且基于这个体积计算混合悬浮液中的浓度和最初向管中加入的CSG干质量(一般在100pi中具有2000CSG)。实施例3在孑L和柱中的标记方法用ES细胞接种CSG后，在分开-合并矩阵的每个阶段给标记加上荧光标记。使用下述方法用于用链霉亲和素包浮皮的标记对生物素化的CSG进行标记。实验在5x5孑L(10cmx10cm)细胞培养皿(因此每个孔测量为2cmx2cm)中进行。一般地，1个孔将包含7000CSG/ES细胞复合物。以已知标记/CSG浓度向孔中加入焚光标记。混合物进4亍温和吸取以混合(使用0.1%BSA/PBS处理的尖以防止粘附)，且随后使整个5x5皿倾斜以促进CSG和标记的紧密接触。将皿置于37。C培养箱约1小时，且随后水平放置直至分开-合并实验的下一个阶段。实施例4洗涤方法和筛分已接受相同处理的孔的内容物温和合并在一起，且通过70(im筛进行洗涤。CSG大于70|um且留在筛中(参见图2)。最低限度的PBS体积(一般为5ml)通过筛进行洗涤以去除未结合的荧光标记，且筛随后被倒置且洗涤的<3ml基础培养基。过筛，以收集CSG/标记复合物。在分开用于下一个培养条件循环前，包含不同培养条件的所有孔的内容物在合并在一起之前个别地进4亍洗涤。实施例5CSG和Cytopore2的消化在分析Cytopore2或CSG上附着的荧光Bangs，标记或非荧光Duke标记(如图1中所示)之前，使用下述方法消化珠。(a)CSG各个CSG珠在玻璃底、384孔农￡量滴定板的孔中的2U/ml蛋白酶K(SigmaP4850)中温育，导致CSG珠完全消化同时使聚苯乙烯、荧光标记保持完整。完全消化一般在20分钟内完成，且荧光标记随后无限期地保留在蛋白酶k溶液中而不灭活蛋白酶k,对标记或其荧光没有有害效应(参见图3)。(b)Cytopore2cytopore2微载体(由纤维素制成)在37%HC1(约12M)中温育，导致微载体在90分钟内完全消化同时使附着的彩色Duke标记保持完整。如同CSG—样，标记无限期地保留在消化介质中而不灭活且对标记没有有害效应(参见图4)。实施例6流程图制备平4亍冲全查标记的UV2(和罗丹明)和StarfireRed(和荧光素)荧光的空白表格软件，即，图5中显示的流程图平行重复，其中关于荧光1的所有参考用荧光4替换，并且荧光3用荧光2替换。对于这个系统，来自记录2和4的最终'否，结论将转向"没有调用"。这个系统可以导致标记保持未鉴定，或给出2种标识。如果关于最4氐强度标记的阈值不正确地设定，从而使得发低荧光的标记鉴定为UV2和Starfire阳性，那么后者可以发生。双重调用的另一个例子是由于RadiusRatio设置不够紧密，2种紧密相关的标记通过'轮廓'宏鉴定为1种时。另外的IF/AND和COUNT函数已用于标记此类双重调用和没有调用。如图6中所示，备选流程图可以连续检查发光体1和4,从而使得来自记录2和4的最终'否'结论将继续询问关于相关尺寸标记的StarfireRed值。这种系统还可以导致标记保持未鉴定，前提是其尺寸和/或荧光不包含在确定范围内。使用这个流程图将不存在双重调用，但如上所述其具有误鉴定低强度标记或双联体的风险。实施例7使用组合细胞培养的ES细胞分化和使用标记方法的结果解巻积在组合细胞培养中，在微珠上生长的ES细胞集落通过生长条件的多个组合，^吏用伴随相伴标记的随机分开-合并方法进行改组。在该方法结束时，鉴定和分离具有分化后代的任何珠；和分析伴随标记以推导细胞培养史。这种方法的例子使用小鼠ES细胞的造血分化作为模型系统来描述。造血作用的发展标志相对良好地制图，并且影响细胞命运的重组生长因子中的许多是已知和容易获得的，然而文献中报道的定向分化已使用的材料和方法(胚状体；半固体培养基；补充动物血清)是麻烦和不明确的，我们已寻求使用新技术的实验力量来消除这点。特别地我们着手将小鼠ES细胞分化成单核细胞-巨噬细胞(单核吞噬细胞)谱系(GordonS.&TaylorP.R.，NatureRev.Immunol.20055:953-964)，因为这已报道在体外发生、和因为可以基于荧光抗原的吞噬作用进行这些细胞的单一功能筛选。才才诗+和方法试剂鼠类干细胞因子(SCF)(R&DSystems,455-MC)鼠类血小板生成素(TPO)(R&DSystems,488-TO)人促红细胞生成素(EPO)(R&DSystems,287-TC)人白介素6(IL-6)(R&DSystems，206-IL)人转化生长因子pi(TGF(M)(R&DSystems，240-B)鼠类巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)(R&DSystems,416-ML)鼠类白介素3(IL-3)(R&DSystems,403-ML)人骨形态发生蛋白2(BMP2)(R&DSystems,355-BM)人成纤维细胞生长因子(bFGF)(R&DSystems,233-FB)视黄酸(Sigma,R2625)牛胰岛素(Ins)(Sigma,10516)胰岛素/转铁蛋白/石西补充剂(ITS)(Sigma,B146)微量培养CultiSpher-G微载体(PercellBiolyticaAB)根据制造商的建议进行水合和灭菌。生物素化通过下述进行向包含3x105个农￡载体的5ml无Ca2+/Mg2、々PBS(CMF-PBS)中添加溶解于0.4mlN,N-二曱基甲酰胺(Sigma)的10mg生物素氨基己酰基-6-氨基-己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(Sigma),且于室温过夜温育，随后使用过量PBS洗涤5次。生物素化的樣i载体贮存于CMF-PBS中。D3ES细胞(ATTC号CRL-1934)在明胶包被的塑料上在KO-DMEM中生长，所述KO-DMEM包含15%敲除血清替代物(KOSR)、1%非必需氨基酸(NEAA)、1%Glutamax、0.5%青霉素/链霉素、0.1mMp巯基乙醇(P-ME;Sigma)和1000U/ml白血病抑制因子(LIF;Chemicon),除非另有il明所有这些都来自Invitrogen。在实验第1天的前一天，向包含3x1(f个ES细胞的100ml培养基A中加入约1.4x105个生物素化的孩i载体，所述樣i载体在培养基A(IMDM(Gibco)、15%KOSR、1%NEAA、0.5%青霉素/链霉素、0.1mMP-ME、1000U/mlLIF和1.5xIO-4Ml画硫甘油(MTG;Sigma))中平衡，平均等分到100mm正方形培养皿(25个孔；BibbyStenlm)的孔内且过夜温育。接种的微载体(约100个珠)的等分试样在4%多聚甲醛(Sigma)中于RT固定10分钟，在PBS中洗涤和重悬浮，且根据制造商的说明书用VectorBlue碱性磷酸酶底物试剂盒III(VectorLaboratories)染色。组合细胞培养将接种的微载体转移到70iam尼龙细胞过滤器(Falcon)内，且用15mlPBS进行洗涤，随后转移到过量的培养基B(包含1.5x10-4MMTG的StemlmeTM造血扩增培养基(Sigma))内。在第1天，4、6、8和10个微载体根据实验计划需要平均分开，且每个样品在100mm、25孑L、正方形培养皿的孔中进行温育，从而使得每个孔加载4ml培养基B中的约5000个珠，所述培养基B包含相关化学试剂和/或生长因子，和1x106链霉亲和素包被的微球体标记。当微载体未标记时，这个操作随后为每个分开-合并循环，除了在D10分开后。D10后，微载体分开进行处理(即未合并)，所以不需要标记。在实-验的第13天，1mg巨噬细胞测定试剂DQ-卵白蛋白(MolecularProbes)在0.4mlPBS中进行制备，且以1:100的稀释度加入每个样品中。温育至少4小时后，吸出培养基且用PBS替换。样品使用FITC滤光器组在NikonTE2000-S倒置外荧光显微镜上进行检查，以鉴定具有用绿色荧光内部标记的、大的圆形细胞的微载体。通过吸取将阳性微载体转移到包含溶于PBS的蛋白酶K溶液(2U/ml;Sigma)的384孔玻璃底测定板(BibbyStenlm)的孔内，且于37。C温育30分钟，这之后可以看见在玻璃表面上排列的荧光标记。标记50组标记(图13)委托BangsLaboratories(Fishers,IN)制备，每组包含荧光、链霉亲和素包一皮的聚苯乙烯微球体群体。50个组之间的差异是农"求体直径(尺寸为1.87)Lim、4.41)Lim、5.78pm、7.37pm或9.77pm)和荧光发射/亮度(用5种强度的StarfireRed或UV2染色)的函数。这50组的等分试样根据制造商的说明书进一步与四甲基罗丹明-5-(和_6)-异硫氰酸酯(TRITC;Invitrogen)缀合，以产生最大限度100个离散的标记。在这些中，在实验中使用一组28个高度区别的标记(表"。才示"i己^冲斤标记使用NikonTE2000-S倒置外焚光显微镜通过显微术进行分析，所述显微镜配备用于显示荧光团TRITC、DAPI(UV2)、GFP-B(全部来自Nikon)和Cy5(ChromaTechnology)的滤光器组。图i象使用EvolutionVF冷单色照相机来捕获，图像分析使用ImageProPlus(两者来自MediaCybernetics)。使用明视野照明捕获单个微球体的轮廓，且计算这些内的面积来按大小排列标记。通过与包含已知标记的参考样品比较，UV2、Cy5和TRITC通道中的面积焚光强度用于进一步指定每种标记的标识(例如图14)。结果设计我们假设的细胞培养条件的实验矩阵，包含能够指导ES细胞分化成巨噬细胞的一种或多种途径(表1)。该矩阵包含在实验第1天(Dl)的6个备选培养条件，随后为D4的6个备选培养条件，D6的进一步8个，D8的再8个，和D10的最后6个备选物。通过这种矩阵的可能途径总数目，即测试的细胞培养条件的不同组合数目是13,824(=6x6x8x8x6='实-睑复杂性，)。所有条件基于商购可得的培养基，所述培养基允许人类造血祖细胞生长，但在补充不同生长因子和成形素方面不同，所述生长因子和成形素已知影响中胚层形成、造血发育和定型至巨嗟细月包i普系(KaushanskyK.,N.Engl.J.Med.2006354:2034-2045;GodmI.&CumanoA.20022:593-603)。在LIF的存在下，将多能小鼠ES细胞接种在生物素化的大孔明月交微载体珠上，在其中它们形成对于碱性磷酸酶活性染色阳性的细胞集落(图8)。LIF取出后，<吏用如WO04013969中所述的反复分开-合并方法，珠通过实验矩阵中指定的所有可能的条件组合进行系统传代。在实验开始时，将约1.4xl()S个接种的微载体珠随机分成6组，每组在对于矩阵中的Dl指定的6种不同培养基之一中分开进行培养。4天后，将珠洗涤、合并且再次随机分成6组，每组在D4指定的培养基之一中进行培养；且这种分开-合并操作在D6、D8和D10进行重复。每次等分试样的珠在不同培养基中进行培养，那些珠用独特标记进行标记；除了在D10时，这之后分开等分试样个别地进4亍处理，且因此不需要标记。因此，任何给定珠通过各种培养基的移动可以通过分析伴随其的标记集合来推断。使用的标记策略包括独特区别的、链霉亲和素包被的荧光微球体标记阵列，所述标记与生物素化的微载体基质结合。在实验结束时，即D13,将微载体暴露于高荧光化(自我猝灭)卯白蛋白抗原。这种试剂已知通过吞噬性巨噬细胞特异性内化和消化，因此使荧光团分散且产生明亮的细胞内信号(图9和10)。在筛选时，发现约IOO个(即1.4x105个输入珠的0.07%)珠具有大的、圆形、内部荧光细胞。假定这些珠已通过对ES细胞分化成巨噬细胞允许或有益的条件进行传代。分析携带大量巨噬细胞的珠以对其细胞培养史解春积这些珠被分离且明胶基质进行蛋白水解以释放结合的标记，所述标记使用荧光显微术及随后的图像分析进行分类。某些微载体用大量标记进行标记，所有标记可以明确地分成4个不同种类，显示这些珠通过实验矩阵的途径。例如，发现珠C5具有对应途径1.2—4.2—6.1—8.2的标记，且/人最终分隔到条件10.5内的珠群体中分离(图lla)。某些其他微载体(例如珠A22)用大量标记进行标记，所述标记大部分包含在通过进行标记而获得的4个不同种类内，小部分看起来通过在不同微载体之间的偶然转移获得(图lib)。在大多数后面这些情况下，存在大量过量的1类标记，所述标记允许测量在细胞培养史解巻积中的可信性。在少数情况下(通常在总体标记无效时，例如珠E6)存在来自在同一天加入的2个不同种类的相同数目标记，产生不确定性(图llc)。这2种类型的不确定性在如下所述的验证结果的进一步实验中容易解决。将在微载体上接种的一批多能mES细胞分成一系列等分试样，每个等分试样用于测试如组合细胞培养限定的l种假定分化途径。不确定途径(例如A22和E6)通过平4t测定每种备选物进4亍测试。使用这种方法，珠A22被测定已通过条件1.2—4.2—6.4—8.2—10.3进行传代。类似地，珠E6通过矩阵的途径是1.2—4.2—6.3—8.4—10.5。Dl和D4时的处理在所有3种中一致，可能显示〗吏用这个系统产生造血祖细胞的那些条件的必要条件。当再现时，这些途径一致地产生所有微载体中的10-25%加载了大量巨噬细胞(图12)。发现背离最佳途径一般对巨噬细胞分化是有害的。类似地，当测试通过矩阵的随机途径产生巨噬细胞的能力时，没有发现有效方案，暗示这些相对罕见。结论mES细胞分化的例子使用以标志或标记使用为特征的组合细胞培养进行描述。该方法用于在实验矩阵中筛选导致分化成单核细胞-巨噬细胞语系的条件，所述实验矩阵包含几乎14,000种不同细胞培养方案。通过筛选此类大量潜在途径和使用合适的标记策略，可以鉴定多种分化方案，且克服胚状体和动物血清的使用，所述胚状体和动物血清中的一个或两个通常是体外单核细胞-巨噬细胞发育所需的9实施例8Cultispher-G微载体在载玻片上消化用于标记解巻积试剂和设备蛋白酶K(SigmaP48501ml)Sigmacote(SigmaSL-2)玻璃载玻片68。C烘箱自制湿化盒甘油(或Citifluor)镊子直径13mm的玻璃盖玻片方法微载体个别地进行消化以显示附着的标记的补足。消化在玻璃载玻片上进行(在一个玻片上可以消化最多达6个微载体)。在通风橱中用Sigmacote包被玻璃载玻片使玻片保持水平，小心地将1mlSigmacote吸取到玻片顶端，确保它覆盖整个玻璃表面。原位放置约30秒，随后小心地使玻片倾斜且用吸管从边缘去除Sigmacote。Sigmacote可以再次使用因此送回瓶中。大部分Sigmacote以这种方式去除但允许任何残余Sigmacote完全蒸发。如果在玻片上留下任何痕量Sigmacote,或如果存在任何污点，那么用戴手套的手指擦拭玻片表面以在玻片上产生干净表面。确保待消化的微载体已在dH20中小心洗涤以去除任何痕量培养基和/或盐。使用20pl吸管尖，小心地从最低限度体积(最多1-2)iil)的dH20中取出各个微载体且置于载玻片上。不一定必需将全部1-2pl体积吸取到玻片上；只吸取足以使微载体沉积玻片上的体积(确保微载体充分隔开以允许随后添加盖玻片而不重叠——可小心地达到5-6个微载体/玻片)。将玻片小心地置于68°C烘箱中，以达到微载体的完全脱水且与玻片粘附(IO分钟应当足够)。在dH20中制备新鲜的5U/ml蛋白酶k溶液(注意蛋白酶k贮存物浓度在批次之间变动，因此稀释应当使用每个新批次进行计算(例如贮存液1230U/ml比5U/ml=5/1230=l/246,即贮存液在dH20中1:246稀释)。制备其中将进行消化反应的湿化盒(10cmx10cm细胞培养皿用一次性塑料吸管良好地运转，所述吸管切割为适于两侧的尺寸。将用水湿润的棉纸置于吸管之间)。小心但迅速地将0.5pi5U/ml蛋白酶k溶液直接吸取在干燥微载体上(这可以是相当需要小心的，因为0.5pl是非常小量的体积且在湿化盒外将很快蒸发)。一旦所有微载体已向其中加入蛋白酶k,就将玻片置于湿化盒内且用盖子覆盖。置于室温，尽可能保护不受光，直至微载体已溶解(一般为30-60分钟)。必须从湿化盒中取出玻片以4全查完全消化，且这必须在立即将玻片放回盒中之前尽可能快地进行以避免蛋白酶k溶液蒸发)。一旦确定微载体已完全溶解，就从盒中取出玻片且允许置于室温，以允许蛋白酶k溶液蒸发(这将非常快速地进行)。将玻片置于68。C烘箱约IO分钟以确保在玻片上释放的标记完全干燥)。向干燥标记中小心地直4妻添加6ILll甘油滴，注意避免气泡(如果在滴中存在气泡，那么通过用小针刺破通常容易将其去除)。使用镊子，小心地将无尘、直径13mm的盖玻片放置在甘油小滴上，非常注意避免气泡(一旦适当放置几乎不可能从盖玻片下去除气泡)。允许盖玻片静置(甘油将扩散遍及整个盖玻片。尽可能保护玻片不受光，但小心不要过多扰乱盖玻片和使甘油扩散在表面上。使用显微镜分析标记。实施例9Cytopore2微载体的消化试剂和装备实验室外套，防护眼睛，手套*盐酸，37%鲁培养皿薄壁PCR管Sigmacote(Sigma目录号SL-2)Citifluor佳十固剂(Agarscientific)方法在分开_合并实验后，微载体个别地进行消化以显示附着的标记的补足。各个微载体的消化在薄壁PCR管中在热循环仪或加热块中于65°C进行。1.将可能的最小体积的各个cytopore-2微载体+标记(+细胞)吸取到吸管尖内，所述体积一般<2(20^吸管和尖工作良好)，且置于培养jEi中的5^137%HC1滴内。快速移至下一个步骤......2.将微载体快速吸取到设定为1)Lil的吸管端内，且沉积薄壁PCR管的最底部且关上盖子。3.将管置于设定在65。C的热循环仪或加热块中7分钟(使用显微镜通过管壁检查确定载体已溶解，且需要时将时间再增加2分钟。在7-9分钟后载体应当已溶解)。4.用Sigmacote处理^皮璃盖玻片。5.用sigmacote处理2|ul吸管尖，在小心地去除包含标记的PCR管中的HCL前确保它完全干燥。6.将lpl小滴置于载玻片上。这样倒置的滴是悬滴且于68。C温育干燥直至完全干燥(15-30分钟)。添加Citifluor滴和盖玻片。使用显微镜分析标记。实施例10用杆状标记来标记细胞单位在2ml生长培养基中用D3小鼠ES细胞以密度为50个细胞/载体的单细胞悬浮液接种3500个CultispherG微载体，所述生长培养基包含KO-DMEM+15%KO-SR、100U/ml青霉素、50(ig/ml链霉素、2mMGlutaMAX、IXNEAA、1000U/mlLIF、100jliM(3ME,且细胞单位于37。C培养过夜。在添加纳米条形码颗粒之前对细胞单位进4亍中性红活体染色，以在颗粒添加之前i正实细l包的存活力。包含6微米长Ag/Au包被的铝纳米丝(Nicewarner-Pena,S.R.等人，Science294:137-141，2001)的杆状颗粒悬浮液从OxonicaHealthcare(Kidlmgton，UK)获得，浓度为1x1(^个颗粒/ml。标明101010和100001(其中l=Ag~0=Au)的2种条形码用于标记细胞单位。/人贮存物中取出杆状颗粒样品，且在95%乙醇中灭菌1小时，之后洗涤和重悬浮于无菌PBS中。将2种纳米条形码颗粒的混合物加入在25孔细胞培养皿孔的2ml培养基中的约875个细胞单位中，比率为1000个颗粒/细胞单位。细胞培养皿在定规振荡器上于37。C温育过夜。培养24小时后将标记的细胞单位置于70iim过滤器上，以去除未结合的杆状颗粒，且用5mlPBS洗涤5次。取出各个细胞单位，且通过中性红活体染色评估在杆状颗粒的存在下D3细胞的延续存活力。将各个细胞单位置于Sigmacote处理的玻璃载玻片上，且置于68°C10-15分钟以确保完全脱水。制备新鲜的溶于H20的5U/ml蛋白酶k，且将0.5pl直接沉积于干燥材料上。立即将玻片置于湿化室中直至明胶材料已消化(一般为30-60分钟)，随后移至68。C培养箱以允许蛋白酶k溶液完全蒸发(一般为IO分钟)。将5jil甘油滴直4妻应用于干燥斑点且应用13mm圆形盖玻片。释放的杆状颗粒的显微图像使用明视野照明用NikonTE2000S倒置外荧光显微镜来捕获。样品中杆状颗粒的区别使用DeltavisionRT显微镜用100x油浸物镜来完成，所述显凝:4竟配备Hg灯和ChromaCFP滤光器组(Ex.436/10;Em.465/30)。进一步的方面进一步的方面和实施方案呈现于下述编号段落中。1.一种复合物，其包含微载体和微球体或微珠。2.根据段落l的复合物，其中所述微载体是Cultispher-G微载体或Cytopore2微载体。3.根据段落1或段落2的复合物，其中所述微球体或微珠是荧光和/或彩色微球体或微珠。4.根据前述段落中任何一项的复合物，其中所述微载体是生物素化的。5.根据段落4的复合物，其中所述荧光微球体是亲水微球体。6.根据段落5的复合物，其中所述亲水微球体是羧酸盐/酯修饰的(CML)微球体。7.根据段落6的复合物，其中所述复合物包含Cytopore2微载体和CML微球体。8.根据段落7的复合物，其中所述CML微球体Cytopore2微载体的比率是约1:1。9.根据段落1-4中任何一项的复合物，其中所述微珠是聚苯乙烯微珠。10.根据段落1-4和9中任何一项的复合物，其中所述微珠是链霉亲和素包一皮的。11.根据段落10的复合物，其中所述复合物包含Cultispher-G微载体和聚苯乙烯微珠。12.根据段落3-11中任何一项的复合物，其中所述荧光团是TRITC。13.—种用于分离包含Cultispher-G微载体和微球体的复合物的方法，其包括使所述复合物与蛋白酶K接触的步骤。14.根据段落13的方法，其中所述蛋白质K以2U/ml的量使用。15.根据段落13或段落14的方法，其中所述复合物与蛋白质K接触约20分钟。16.—种用于分离包含Cyt叩ore2和微珠的复合物的方法，其包括使所述复合物与HC1接触的步骤。17.根据段落16的方法，其中使用37%HC1(约12M)。18.根据段落16或段落17的方法，其中所述复合物与HC1接触约90分钟。19.一种用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，其包括使用根据段落1-12中任何一项的复合物。20.—种用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，其包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)4吏一种或多种所述群体细分，以产生另一组细胞单位群体；(c)使所述另外的群体暴露于另外的所需培养条件；(d)需要时任选反复重复步骤(b)-(C);和(e)评估所述培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与根据段落1-12中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。21.—种用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，其包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使所述第2个库细分，以产生另一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d);和(f)评估所述培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与根据段落1-12中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。22.—种使细胞暴露于各种细胞培养条件的方法，其包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使所述第2个库细分，以产生另一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；和(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d),其中每个细胞单位包含与根据段落1-12中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细^^。23.—种用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，其包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使所述第2个库细分，以产生另一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d);和(f)评估所述培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与根据段落1-12中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。24.根据段落20-23中任何一项的方法，其中所述细胞以细胞单位进行培养，每个细胞单位包含一种或多种细胞。25.根据段落24的方法，其中所述细胞单位是单细胞。26.根据段落20-25中任何一项的方法，其中所述培养条件是所述细胞暴露的培养基。27.根据段落26的方法，其中所述培养基包含影响细胞进程的一种或多种特定试剂。28.才艮据段落20-27中任何一项的方法，其中所述细胞培养条件包含在一种或多种特定温度下培养。29.根据段落20-28中任何一项的方法，其中所述细胞培养条件包含在一种或多种特定基质上培养。30.—种用于鉴定影响细胞进程的基因的方法，其包括下述步骤a)依照段落20-29中任何一项，测定一种或多种培养条件对细胞单位的影响；b)分析当暴露于所述培养条件时所述细胞单位中的基因表达；和c)鉴定在所需培养条件下差异表达的基因。31.根据段落30的方法，其中所述所需培养条件影响细胞进程。32.—种用于产生编码影响细胞进程的基因产物的核酸的方法，其包括依照段落30或段落31鉴定基因，和通过核酸合成或生物复制至少产生所述基因的编码区。33.—种用于诱导细胞进程的方法，其包括下述步骤(a)依照段落30或段落31鉴定与所述细胞进程相关而差异表达的一种或多种基因；和(b)调节所述一种或多种基因在细胞中的表达。34.根据段落33的方法，其中所述细胞中的基因表达的调节包含将所述一种或多种基因转染到所述细胞内。35.根据段落33的方法，其中基因表达的调节包含所述基因产物的外源性施用。36.—种用于鉴定所述细胞的细胞进程状态的方法，其包括下述步骤(a)依照段落30或段落31鉴定与所述细胞进程相关而差异表达的一种或多种基因；和(b)检测所述一种或多种基因在细胞中的表达的调节，从而测定所述细胞的所述细力包进程状态。37.根据段落36的方法，其中所述一种或多种基因编码标志物。检测。39.—种用于诱导细胞进程的方法，其包括下述步骤(a)依照段落20-29中任何一项测定一种或多种培养条件对细胞单位的影响；、(b)使细胞暴露于诱导细胞进程的培养条件；和(c)分离所需细胞。40.—种用于筌定能够诱导细胞进程的试剂的方法，其包括下述步骤(a)依照段落20-29中任何一项，测定一种或多种试剂对细胞单位的影响；和(b)鉴定诱导所述细胞单位中的细胞进程的那些试剂。41.一种用于制备能够诱导细胞进程的试剂的方法，其包括下述步骤(a)依照段落20-29中任何一项，测定一种或多种试剂对细胞单位的影响；(b)鉴定诱导所述细胞单位中的所需细胞进程的那些试剂；和(c)合成或分离所述试剂。42.根据前述权利要求中任何一项的方法，其中所述细胞进程是细胞增殖或分化。括下述步骤a)温育干细^^培养物；和b)将所述培养物分成2个或更多干细胞群体，且在2个或更多不同组的培养条件下培养所述干细胞群体，其中每个细胞单位包含与根据段落1-]2中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。43.根据段落43的方法，其中所述细胞在细胞单位中进行培养，每个细胞单位包含一种或多种细胞。44.根据段落42或段落43的方法，其中所述细胞单位是单细胞。45.—种用于培养干细胞的方法，其包括培养与根据段落1-12中任何一项的复合物附着的所述干细胞。46.根据段落45的方法，其中对所述干细胞实施培养条件的至少一种变化。47.根据段落46的方法，其中所述培养条件的变化包含培养基的变化。48.—种用于在体外从干细胞获得分化细胞的方法，其包括下述步骤(a)在培养基中培养与根据段落1-12中任何一项的复合物附着的干细月包；(b)将所述复合物从一种培养基转移到另一种中；(c)需要时任选重复步骤(b);和(d)获得与所述复合物附着的分化细胞。49.根据段落48的方法，其中所述分化细胞通过从复合物酶促或化学脱离而进行分离。50.根据段落49的方法，其中所述酶是蛋白酶K。51.根据段落49的方法，其中所述化学试剂是HC1。52.根据段落48-51中任何一项的方法，其中所述分化细胞通过消化根据段落1-12中任何一项的复合物进行分离。53.—种体外培养多能干细胞的方法，其包括下述步骤(a)在根据段落1-12中任何一项的复合物上接种所述细胞；和(b)在与所述复合物附着的同时增殖所述细胞。54.—种用于鉴定从细胞单位获得的标记的一个或多个面积和/或密度值的方法，其包括下述步骤(a)获得所述标记的一个或多个图像；(b)描绘关于所述一个或多个图像的轮廓；(c)加载关于所述一个或多个图像的所述轮廓；和(d)读出所述一个或多个轮廓内的面积和/或亮度。55.—种用于鉴定从细胞单位获得的标记的一个或多个面积和/或密度值的方法，其包括下述步骤(a)分离所述细胞单位和所述标记；(b)使用显微技术获得所述标记的一个或多个图像；(c)描绘关于所述一个或多个图像的轮廓；(d)将关于所述一个或多个图像的轮廓加载到使用不同的显微技术获得的其它相应图像上；和(e)读出所述一个或多个轮廓内的面积和/或亮度。56.根据段落55的方法，其中步骤(e)包括计数和/或分类一种或多种细胞单位中的一种或多种不同标记。57.根据段落54或55的方法，其中所述方法包括计数和/或分类一种或多种细胞单位中的至少不同类型的标记。58.根据段落54或55的方法，其中所述方法包括计数和/或分类一种或多种细胞单位中最多约IO或最多约50种不同类型的标记。59.根据段落54-58中任何一项的方法，其中将所述面积和/或密度值输入空白表格软件内。60.根据段落54-59中任何一项的方法，其中所述图像选自相位图像、蓝色图像、绿色图像、近红图像和远红图像。61.—种计算机程序产品，其包括用于控制计算积4丸4于如l殳落54-60中任何一项要求的方法的计算机程序。62.—种用于鉴定标记的一个或多个面积和/或密度值的装置，所述装置包含依照如段落54-60中任何一项要求的方法执行数据处理操作的可操作数据处理逻辑。63.—种用于测定细胞单位已暴露的细胞培养条件的时间排列和标识的方法，其包括下述步骤(a)比较标记的至少一种参数的上和下限与所述标记的至少一种参数的平均测量值；(b)比较所述标记的至少一种参数的平均测量值与所述标记的至少一种参数的最低限；和(c)使所述标记的至少一种参数的测量值与所述标记的标识关联，所述标记与所述细胞单位相关。64.根据段落63的方法，其中如果所述下限小于所述平均测量值，并且所述平均测量值小于所述上限，那么比较所述标记的另外的参数的上和下限与所述标记的至少一种另外的参数的所述平均测量值。65.根据段落63的方法，其中如果所述下限不小于所述平均测量值，并且所述平均测量值不小于所述上限，那么测量所述标记的相同参数的至少一个另外的整数的上和下限。66.根据段落65的方法，其中如果所述下限小于所述平均测量值，并且所述平均测量值小于所述上限，那么测量所述标记的至少一种另外的参数的上限。67.根据段落63-66中任何一项的方法，其中如果所述标记的至少一种参数的所述平均测量值大于所述标记的至少一种参数的所述最低限，那么所述结果与具有所述一种或多种参数的一种或多种标记相关。68.根据段落63-66中任何一项的方法，其中如果所述标记的所述至少一种参数的所述平均测量值不大于所述标记的所述一种或多种参数的所述最低限，那么所述结果与具有所述参数的标记相关。69.根据段落63的方法，其中如果所述下限不小于所述平均测量值，并且所述平均测量值不小于所述至少一种另外的参数的所述上限，那么测量所述标记的相同参数的至少一个另外的整数的上和下限。70.根据段落68的方法，其中所述方法对于所述标记的相同参数的一个或多个另外的整数进行重复。71.根据段落69的方法，其中所述方法对于所述标记的相同参数的所有整数进行重复。72.根据段落68的方法，其中如果所述下限小于所述平均测量值，并且所述平均测量值小于所述至少一种另外的参数的所述上限，并且所述标记的所述至少一种参数的所述平均测量值大于所述标记的至少一种参数的所述最低限，那么所述结果与具有所述一种或多种参数的一种或多种标"i己相关。73.根据段落71的方法，其中如果所述下限小于所述平均测量值，并且所述平均测量值小于所述至少一种另外的参数的所述上限，并且所述标记的所述至少一种参数的所述平均测量值不大于所述标记的所述一种或多种参数的所述最低限，那么所述结果与具有所述参数的标记相关。74.根据段落62-72中任何一项的方法，其中所述标记的参数选自所述标记尺寸、它们携带的萸光团类型；和它们携带的荧光团的量。75.根据段落73的方法，其中所述尺寸选自5种不同尺寸。76.根据段落73或段落74的方法，其中所述尺寸选自约1.87|im、约4.41iam、约5.37)um、约5.78pm和约9.66|im。77.根据段落73-75中任何一项的方法，其中所述荧光团是UV2或StarfireRed。78.根据段落73-75中任何一项的方法，其中所述荧光团的量选自5种不同量。79.根据段落77的方法，其中每种不同的量在亮度方面产生5-10倍差异。80.根据段落62-79中任何一项的方法，其中存在最多3种不同参数和50个不同整数或群体。81.根据段落62-79中任何一项的方法复合物，其中每个细胞单位包含与复合物附着或结合的一种或多种细胞，所述复合物包含微载体和聚苯乙烯微珠。82.根据段落80的方法，其中所述微珠是链霉亲和素包被的。83.根据段落80或段落81的方法，其中所述复合物包含Cultispher-G微载体和聚苯乙烯微珠。84.—种计算机程序产品，其包括用于控制计算机#1行如段落62-82中任何一项要求的方法的计算机程序。85.—种用于测定细胞单位已暴露的细胞培养条件的时间排列和标识的装置，所述装置包含依照如段落62-82中任何一项要求的方法执行数据处理操作的可操作数据处理逻辑。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>表1的说明条件列表包含实验矩阵、和用于标记暴露于那些条件的微载体的相应标记。标记名称表示实^^日期和实验条件(日期.条件)。笫2-5列指出了相应标记的特性，即尺寸(直径)；荧光团标识(UV2或StarfireRed);荧光团强度(1最低-5最高)和标记是否是TRITC修饰的。对于矩阵的每种条件、在基础培养基中存在的不同生长因子和/或成形素的终浓度在最后1列中指出。上文说明书中提及的所有出版物引入本文作为参考。无需背离本发明的精神和范围，本发明所述方法和系统的各种修饰和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。尽管本发明已结合具体优选实施方案进行描述，但应当理解如要求保护的本发明不应不适当地限制于此类具体实施方案。事实上，对于分子生物学或相关领域中的技术人员显而易见的、用于执行本发明所述方式的各种修饰意欲包括在下述权利要求的范围内。权利要求1.一种用于测定用超过一种标记进行标记的细胞单位的细胞培养史的方法，其包括下述步骤(a)测量用于标记所述细胞单位的每种标记的一种或多种参数；(b)鉴定所述细胞单位中的每种标记；和(c)使每种标记的标识与所述细胞单位的标识/或所述细胞单位已暴露的特定细胞培养条件关联。2.根据权利要求l的方法，其中所述方法是自动化方法。3.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中所述细胞单位与微载体结合或附着。4.根据权利要求3的方法，其中所述微载体是多孔或固体微载体。5.根据权利要求4的方法，其中所述多孔微载体选自Cytopore微载体(例如Cytopore1微载体或Cytopore2微载体)、Cultispher微载体、Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体、Inforaiatrix微载体、Microsphere微载体、Siran微载体和MicroporousMC微载体。6.根据权利要求4的方法，其中所述固体微载体是Cytodex微载体(例如Cytodexl、Cytodex2或Cytodex3微载体)、Biosilon微载体、Bioglass微载体、FACTIII微载体或DE52/53微载体。7.根据前述权利要求中任何一项的方法，其中参数是所述标记的尺寸和/或所述标记的光学特性。8.根据权利要求7的方法，其中所述光学特性选自光反射率、颜色、荧光发射波长和荧光发射强度。9.根据前述权利要求中任何一项的方法，其中测量目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像。10.根据权利要求9的方法，其中使用显微术测量目的视野中的细胞单位中每种标记的一个或多个图像。11.根据权利要求10的方法，其中所述显微术选自明视野显微术、相差显微术、斜射照明显微术、暗视野显微术、樣i分干涉相差显微术、反射相差显微术、varel相差显微术、偏光显微术、干涉显微术和荧光显微术。12.根据权利要求9-11中任何一项的方法，其中描绘关于所述目的;枧野中的所述细胞单位中每种标记的所述一个或多个图像的轮廓。13.根据前述权利要求中任何一项的方法，其中测量所述目的4见野中的所述细胞单位中每种标记的一个或多个焚光图像。14.根据权利要求13的方法，其中将关于所述一个或多个图像(例如一个或多个相位图像)的轮廓加载到所述一个或多个荧光图像上。15.根据权利要求13或权利要求14的方法，其中对于用于标记所述标i己的每种荧光团测量所述目的一见野中的所述细胞单位中每种标记的一个或多个图像。16.根据权利要求12-15中任何一项的方法，其中所述细胞单位中的每种标记通过读出所述一个或多个轮廓内的所述标记的所述一种或多种参数进行鉴定。17.根据权利要求16的方法，其中所述标记的所述一种或多种参数是所述标记的面积和/或光密度。18.根据前述权利要求中任何一项的方法，其中将所述标记的所述一种或多种参数输入空白表格软件。19.根据权利要求8-18中任何一项的方法，其中所述荧光团选自发出蓝色、绿色、近红或远红荧光的荧光团。20.根据权利要求7-19中任何一项的方法，其中所述尺寸选自至少3种不同尺寸(例如5、6或7种不同尺寸)。21.根据权利要求20的方法，其中所述尺寸选自约1.9|um、约4.4^m、约5.4ium、约5.8)um、约7.4)um、约9.7)um和约9.8|um。22.根据权利要求8-21中任何一项的方法，其中所述荧光团选自UV2、StarfireRed和TRITC。23.根据权利要求8-22中任何一项的方法，其中所述荧光团的量选自5种不同量。24.根据权利要求23的方法，其中每种不同量在亮度方面产生约5-10倍的差异。25.根据前述权利要求中任何一项的方法，其中存在至少2种不同参数。26.根据前迷权利要求中任何一项的方法，其中每种参数具有至少5个不同整数。27.根据权利要求1-25中任何一项的方法，其中每种参数具有针对每种参数的小于或等于20个不同整数。28.根据权利要求1-25中任何一项的方法，其中每种参数具有针对每种参数的小于或等于50个不同整数。29.—种计算机程序产品，其包括用于控制计算机执行如权利要求1-28中任何一项要求的方法的计算机程序。30.—种用于测定细胞单位的细胞培养史的装置，其包含依照如#又利要求1-28中任何一项要求的方法执行数据处理操作的可操作数据处理逻辑。31.—种复合物，且包含微载体和带电(例如带负电荷的)标记。32.根据权利要求31的复合物，其中所述微载体是多孔微载体。33.根据权利要求31或权利要求32的复合物，其中所述微载体具有净电荷。34.根据权利要求31-33中任何一项的复合物，其中所述微载体包含下述物质、由下述物质组成、或基本上由下述物质组成蛋白质、纤维素、聚乙烯、聚苯乙烯、玻璃、胶原、胶原-gylcose-氨基聚糖和/或明胶。35.根据权利要求31-34中任何一项的复合物，其中所述微载体选自Cytopore孩i载体、Cytopore1微载体、Cytopore2樣吏载体、Cultispher微载体、Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体、Informatrix微载体、Microsphere微载体、Siran微载体和MicroporousMC微载体。36.根据权利要求31-35中任何一项的复合物，其中所述带电标记是球体。37.根据权利要求36的复合物，其中所述球体是微球体。38.根据权利要求37的复合物，其中所述微球体直径为约9iuM或更小。39.根据权利要求37或权利要求38的复合物，其中所述微球体是羧酸盐/S旨修饰的(CML)微球体。40.根据权利要求31-39中任何一项的复合物，其中所述标记包含聚苯乙烯和/或乳胶、由聚苯乙烯和/或乳胶组成、或基本上由聚苯乙烯和/或乳胶组成。41.根据权利要求31-40中任何一项的复合物，其中所述复合物(例如微载体)与细胞单位附着或结合。42.根据权利要求31-41中任何一项的复合物，其中至少一种抗体与所述细胞单位结合。43.—种复合物，其包含微载体和杆状标记。44.根据权利要求43的复合物，其中所述杆状标记是纳米丝。45.根据权利要求44的复合物，其中所述纳米丝是铝纳米丝。46.根据权利要求44或权利要求45的复合物，其中所述纳米丝用银和/或金包被。47.根据权利要求44-46中任何一项的复合物，其中所述纳米丝直径为约1pM或更小。48.根据权利要求44-47中任何一项的复合物，其中所述纳米丝长度为约10iliM或更小。49.根据权利要求43-48中任何一项的复合物，其中所述微载体是多孔微载体。50.根据权利要求43-49中任何一项的复合物，其中所述多孔微载体是电中性的微载体。51.根据权利要求43-50中任何一项的复合物，其中所述微载体包含下述物质、由下述物质组成、或基本上由下述物质组成蛋白质、纤维素、聚乙烯、聚苯乙烯、玻璃、胶原、胶原-gylcose-氨基聚糖和/或明胶。52.根据权利要求43-51中任何一项的复合物，其中所述微载体选自Cytopore樣i载体、Cytopore1孩i载体、Cytopore2微载体、Cultispher微载体、Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体、Informatrix微载体、Microsphere微载体、Siran微载体和MicroporousMC微载体。53.根据权利要求43-52中任何一项的复合物，其中所述复合物(例如微载体)与细胞单位附着或结合。54.才艮据权利要求43-53中任何一项的复合物，其中至少一种抗体与所述细胞单位结合。55.—种用于分离包含微载体和标记的复合物的方法，其包括使所述复合物与蛋白酶接触的步骤，其中所述微载体包含蛋白质、由蛋白质组成、或基本上由蛋白质组成。56.根据权利要求55的方法，其中所述微载体包含明胶、由明胶组成、或基本上由明胶组成。57.根据权利要求55或权利要求56的方法，其中所述微载体是Cultispher微载体。58.根据权利要求57的方法，其中所述微载体选自Cultispher-G微载体、Cultispher-GL微载体和Cultispher-S微载体。59.根据权利要求55-58中任何一项的方法，其中所述蛋白酶选自蛋白酶K、胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和胱天蛋白酶。60.根据权利要求59的方法，其中所述蛋白酶K以约0.5U/ml或更多的量使用。61.根据权利要求59或权利要求60的方法，其中所述复合物与蛋白酶K接触至少20-60分钟。62.根据权利要求55-61中任何一项的方法，其中所述复合物与体积为约5pl或更少的蛋白酶接触。63.—种用于分离包含微载体和标记的复合物的方法，其包括使所述复合物与酸接触的步骤。64.根据权利要求63的方法，其中所述微载体是多孔微载体。65.根据权利要求63或权利要求64的方法，其中所述微载体具有净电荷。66.根据权利要求63-65中任何一项的方法，其中所述微载体包含纤维素、由纤维素组成、或基本上由纤维素组成。67.根据权利要求63-66中任何一项的方法，其中所述微载体是Cytopore微载体。68.根据权利要求63-67中任何一项的方法，其中所述微载体是Cytopore2微载体。69.根据权利要求63-68中任何一项的方法，其中所述标记是球体。70.根据权利要求69的方法，其中所述球体是微球体。71.根据权利要求70的方法，其中所述微球体包含聚苯乙烯、由聚苯乙烯组成、或基本上由聚苯乙烯组成。72.根据权利要求63-71中任何一项的方法，其中所述酸选自盐酸、石克酸和次氯酸钠。73.根据权利要求72的方法，其中所述酸是37%盐酸(约12M)。74.根据权利要求72的方法，其中所述酸是浓缩硫酸。75.根据权利要求63-74中任何一项的方法，其中所述复合物与体积为约5|Lll或更少的酸接触。76.根据权利要求63-75中任何一项的方法，其中所述复合物在酸的存在下进^于加热。77.—种用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，其包括使用根据权利要求31-54中任何一项的复合物。78.—种用于测定多种培养条件对细胞的影响的方法，其包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使所述笫2个库细分，以产生另一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d);和(f)评估所述培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与根据权利要求31-54中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。79.—种使细胞暴露于各种细胞培养条件的方法，其包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使所述第2个库细分，以产生另一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；和(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d),其中每个细胞单位包含与根据权利要求31-54中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。80.—种用于测定多种培养条件对细月包的影响的方法，其包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b)使2个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使所述第2个库细分，以产生另一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露于所需培养条件；(e)需要时任选反复重复步骤(b)-(d);和(f)评估所述培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与根据权利要求31-54中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。81.根据权利要求77-80中任何一项的方法，其中所述细胞以细胞单位进行培养，每个细胞单位包含一种或多种细胞。82.根据权利要求81的方法，其中所述细胞单位是单细胞。83.根据权利要求77-82中任何一项的方法，其中所述培养条件是所述细胞暴露的培养基。84.根据权利要求83的方法，其中所述培养基包含影响细胞进程的一种或多种特定试剂。85.根据权利要求77-84中任何一项的方法，其中所述细胞培养条件包含在一种或多种特定温度下培养。86.根据权利要求77-85中任何一项的方法，其中所述细胞培养条件包含在一种或多种特定基质上培养。87.—种用于鉴定影响细胞进程的基因的方法，其包括下述步骤a)依照4又利要求77-86中任何一项，测定一种或多种培养条件对细胞单位的影响；b)分析当暴露于所述培养条件时所述细胞单位中的基因表达；和c)鉴定在所需培养条件下差异表达的基因。88.根据权利要求87的方法，其中所需培养条件影响细胞进程。89.—种用于产生编码影响细胞进程的基因产物的核酸的方法，其包括依照权利要求87或权利要求88鉴定基因，和通过核酸合成或生物复制至少产生所述基因的编码区。90.—种用于诱导细胞进程的方法，其包括下述步骤(a)依照权利要求87或权利要求88鉴定与所述细胞进程相关而差异表达的一种或多种基因；和(b)调节所述一种或多种基因在细胞中的表达。91.根据权利要求90的方法，其中所述细胞中的基因表达的调节包含将所述一种或多种基因转染到所述细胞内。92.根据权利要求90的方法，其中基因表达的调节包含所述基因产物的外源性施用。93.—种用于鉴定所述细胞的细胞进程状态的方法，其包括下述步骤(a)依照权利要求87或权利要求88鉴定与所述细胞进程相关而差异表达的一种或多种基因；和(b)检测所述一种或多种基因在细胞中的表达的调节，从而测定所述细胞的细胞进程状态。94.根据权利要求93的方法，其中所述一种或多种基因编码标志物。95.根据权利要求94的方法，其中所述标志物可以通过免疫测定法进行一企测。96.—种用于诱导细胞进程的方法，其包括下述步骤U)依照权利要求77-86中任何一项，测定一种或多种培养条件对细胞单位的影响；(b)使细胞暴露于诱导细胞进程的培养条件；和(c)分离所述所需细胞。97.—种用于鉴定能够诱导细胞进程的试剂的方法，其包括下述步骤(a)依照权利要求77-86中任何一项，测定一种或多种试剂对细胞单位的影响；和(b)鉴定诱导所述细胞单位中的所述细胞进程的那些试剂。98.—种用于制备能够诱导细胞进程的试剂的方法，其包括下述步骤(a)依照权利要求77-86中任何一项，测定一种或多种试剂对细胞单位的影响；(b)鉴定诱导所述细胞单位中的所需细胞进程的那些试剂；和(c)合成或分离所述试剂。99.根据权利要求77-98中任何一项的方法，其中所述细胞进程是细胞增殖或分^^。括下述步骤a)温育干细胞培养物；和b)将所述培养物分成2个或更多干细胞群体，且在2个或更多不同组的培养条件下培养所述干细胞群体，其中所述细胞在细胞单位中进行培养，每个细胞单位包含与根据权利要求31-54中任何一项的复合物附着或结合的一种或多种细胞。100.101.根据权利要求100的方法，其中所述细胞单位是单细胞。102.—种用于培养干细胞的方法，其包括培养与根据权利要求31—54中任何一项的复合物附着的干细胞。103.根据权利要求102的方法，其中对所述干细胞实施培养条件的至少一种变4tu104.根据权利要求103的方法，其中所述培养条件的变化包含培养基的变化。105.—种用于在体外从干细胞获得分化细胞的方法，其包括下述步骤(a)在培养基中培养与根据权利要求31-54中任何一项的复合物附着的千细胞；(b)将所述复合物从一种培养基转移到另一种中；(c)需要时任选重复步骤(b);和(d)获得与所述复合物附着的分化细胞。106.根据权利要求105的方法，其中所述分化细胞通过从复合物酶促或化学脱离而进行分离。107.根据权利要求105或权利要求106的方法，其中所述分化细胞通过消化所述复合物进行分离。108.—种体外培养多能干细胞的方法，其包括下述步骤(a)在根据权利要求31-54中任何一项的复合物上接种所述细胞；和(b)在与所述复合物附着的同时增殖所述细胞。109.—种用于体外培养细胞的方法，其包括培养与根据权利要求31—54中任何一项的复合物附着的细胞。110.—种用于鉴定从细胞单位获得或可获得的标记的方法，其包括下述步骤(a)分离所述细胞单位和所述标记；(b)使用显微技术获得所述标记的一个或多个图像；和(c)分析所述图像以测定所述标记的一个或多个特征。111.根据权利要求31-54中任何一项的复合物用于测定多种培养条件对细胞的影响的用途。112.杆状标记(例如纳米丝)用于标记微载体的用途。113.杆状标记(例如纳米丝)用于测定多种培养条件对细胞的影响的用途。114.根据权利要求113的用途，其中所述标记与微载体附着或结合。115.—种方法、一种复合物、一种计算机程序、一种装置或一种用途，其基本上如本文所述，参照附图。全文摘要本发明在一个方面涉及用于测定细胞单位的细胞培养史的方法，所述细胞单位用超过一种类型的标记进行标记，所述方法包括下述步骤(a)测量用于标记细胞单位的每种标记的一种或多种参数；(b)鉴定细胞单位中的每种标记；和(c)使每种标记的标识与细胞单位的标识和/或细胞单位已暴露的特定细胞培养条件关联。文档编号G01N33/50GK101253260SQ200680031299公开日2008年8月27日申请日期2006年8月25日优先权日2005年8月26日发明者F·霍恩比,J·吉尔德莱斯通,Y·乔申请人:可塑细胞有限公司